α地中海貧血與β地中海貧血患者鐵負(fù)荷水平分析

丁高明，峗淑莉，張景濤

(廣東醫(yī)科大學(xué)附屬中山醫(yī)院腫瘤血液科，廣東 中山 528415)

臨床中針對地中海貧血的治療通常采用輸血的方式，反復(fù)輸血加上患者自身溶血異常極易導(dǎo)致機體內(nèi)鐵負(fù)荷過重，對患者的病情不利，但臨床中對于哪種基因類型的地中海貧血更容易發(fā)生鐵負(fù)荷過重的重視度不高[1]。鑒于此，筆者對150例地中海貧血患者進行基因與鐵指標(biāo)的檢測，對比分析不同基因類型地中海貧血患者的鐵負(fù)荷水平，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年2月至2018年2月廣東醫(yī)科大學(xué)附屬中山醫(yī)院收治的地中海貧血患者150例，其中男性86例、女性64例；年齡18～37歲、平均(22.34±4.63)歲；病程1～13年、平均(6.64±1.34)年；Hb 59～118 g·L-1，RBC 3.2～6.0×1012L-1，Ret 2.4%～14.5%，血紅蛋白H(HbH)7.2%～24.6%，血紅蛋白F(HbF)10.3%～18.5%；患者癥狀體征：面色蒼黃84例、鞏膜黃染9例、地中海面容63例、生長發(fā)育遲緩90例、肝腫大90例、脾腫大62例、心尖收縮期雜音53例、合并感染135例。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

所有患者經(jīng)臨床診斷及生化檢驗證實符合地中海貧血診斷標(biāo)準(zhǔn)，血紅蛋白質(zhì)量濃度均>100 g·L-1，紅細(xì)胞平均體積(MCV)<79 fL，紅細(xì)胞平均血紅蛋白量(MCH)<27 pg，紅細(xì)胞滲透脆性下降。

1.3 檢測方法

于患者清晨空腹?fàn)顟B(tài)下取其靜脈血5 mL，并加肝素抗凝待用。采用微陣列雜交技術(shù)進行基因診斷，以抗鹼試驗測定HbF，操作方法如下：1)取0.083 mol·L-1KOH 1.6 mL加于試管中，置25 ℃ 水浴；2)待5～10 min后加0.1 mL血紅蛋白溶液，立即開動秒表，用吸管洗6次,輕輕搖動試管10 s，此步操作需在20 s內(nèi)完成；3)準(zhǔn)確計時60 s后，加入酸性硫酸銨液3 mL，立即顛倒混勻6次；4)用濾紙過濾，取濾液在540 nm波長下比色，以蒸餾水作空白，讀取抗堿血紅蛋白的吸光度；5)另取血紅蛋白溶液0.02 mL，加入5 mL水中，混勻，按上述方法比色，讀出總Hb的吸光度；6)計算結(jié)果。以醋酸纖維薄膜電泳法測定HbA2，操作方法如下：1)裁剪適量尺寸濾紙條來搭建濾紙橋，再將緩沖液倒入電泳槽，在醋酸纖維素薄膜無光澤面做好點樣標(biāo)記；2)將該面在下浸入緩沖液約20 min，在浸透完全以后，取出吸取多余緩沖液備用；3)用加樣器取適量蛋白樣品均勻加于點樣線處，最終形成一定寬度、粗細(xì)均勻的直線；4)將點樣端位于負(fù)極，無光澤面朝下，平整放于濾紙橋上，平衡完畢后，調(diào)節(jié)電壓并開始電泳；5)電泳完畢后，小心取下薄膜，浸入染色液2 min，取出后在漂洗液中反復(fù)漂洗，直到干凈為止，然后觀察電泳結(jié)果；6)要注意醋酸纖維薄膜吸水性差，電泳的過程中水分容易蒸發(fā)而使電泳終止，因此電泳過程應(yīng)在密閉電泳槽中進行，以確保處于濕潤狀態(tài)。以血液鋅原卟啉測定代替紅細(xì)胞游離原卟啉測定，血液鋅原卟啉測定儀由廣東康達發(fā)展公司生產(chǎn)，試驗方法為：以市售標(biāo)準(zhǔn)XC蓋玻片經(jīng)鹽酸酒精浸泡擦干備用，取患者耳垂血，并置于蓋玻片中央部，以細(xì)玻璃棒攤勻成一直徑約0.8 cm的血膜，進行ZPP結(jié)果測定，單位pmol·L-1(全血)。采用放射免疫法對血清鐵蛋白(SF)檢測，試劑盒由北京原子能研究所提供。采用α-α雙聯(lián)吡啶法測定血清鐵(SI)、鐵結(jié)合力(TIBC)及鐵飽和度(TS)，制備方法如下：1)取70 g無水吡啶與13 g無水三氯化鐵混合,在封管中于300 ℃加熱反應(yīng)約35 h；2)冷卻后,反應(yīng)物固化為紅黑色結(jié)晶,打開封管,用少量熱水洗出固體物的紅黑色溶液；3)用乙醚萃取除去油狀不純物，用碳酸氫鈉中和后,用蒸汽加熱除去過量的吡啶；4)然后將混合物調(diào)成強堿性,用蒸汽蒸出2,2′-聯(lián)吡啶；蒸出物酸化后蒸發(fā)濃縮,再加氫氧化鈉,用乙醚提取,除去乙醚得粗品，粗品用乙醇來重結(jié)晶、活性炭脫色即得純品,以酸性亞鐵氰化鉀對骨髓細(xì)胞涂片進行染色。

1.4 觀察指標(biāo)與判定標(biāo)準(zhǔn)

對不同基因型地中海貧血患者的鐵負(fù)荷水平及鐵缺乏水平進行對比觀察，鐵缺乏判斷標(biāo)準(zhǔn)為：1)血清鐵蛋白<12 μg·L-1；2)骨髓染色顯示骨髓小?？扇捐F消失、鐵粒幼細(xì)胞<0.15；3)轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度<0.15；4)FEP/Hb>4.5 mg·g-1[2]。鐵負(fù)荷過重判定標(biāo)準(zhǔn)為：1)SF>200 μg·L-1；2)SI>27 μmol·L-1；3)TS>30%；4)骨髓細(xì)胞涂片細(xì)胞外鐵增加幅度在—之間[3]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 地中海貧血患者基因類型

150例地中海貧血患者基因類型如表1所示。

表1 地中海貧血基因類型

2.2 α地中海貧血與β地中海貧血患者鐵負(fù)荷情況

本次研究150例地中海貧血患者中37例(24.67%)合并鐵缺乏，33例(22.00%)鐵負(fù)荷過重，β地中海貧血患者鐵負(fù)荷過重人數(shù)雖多于α地中海貧血患者，但二者所占比例差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同基因類型貧血患者鐵負(fù)荷情況對比

2.3 各基因型地中海貧血的鐵負(fù)荷情況

150例地中海貧血患者中，純合子β地中海貧血患者最容易發(fā)生鐵負(fù)荷過重，靜止型α地中海貧血患者未發(fā)生鐵負(fù)荷過重情況；靜止型α地中海貧血患者最容易合并鐵缺乏，純合子β地中海貧血基因型患者均未發(fā)生鐵缺乏現(xiàn)象。詳情見表3。

表3 各基因型地中海貧血的鐵負(fù)荷情況

3 討論

地中海貧血是一組遺傳性溶血性貧血疾病，由遺傳基因缺陷致使血紅蛋白中一種或一種以上珠蛋白鏈合成缺如或不足所導(dǎo)致，緣于基因缺陷的復(fù)雜性與多樣性，使缺乏的珠蛋白鏈類型、數(shù)量及臨床癥狀變異性較大，廣泛分布于世界許多地區(qū)[4]。臨床中針對地中海貧血的命名與分類主要是以機體所缺乏的蛋白鏈種類及缺乏程度為依據(jù)，分為α型、β型、δβ型和δ型4種，其中以β和α地中海貧血較為常見，α地中海貧血是由于α珠蛋白基因缺失造成，少數(shù)也可由基因點突變導(dǎo)致[5]；β地中海貧血發(fā)生的分子病理復(fù)雜，已知有100種以上的β基因突變，以基因的點突變?yōu)橹?，少?shù)為基因缺失[6]。這些基因的缺失或點突變可造成各種肽鏈的合成速率不同，致使血紅蛋白的組分改變，過剩的α鏈或β鏈沉積于幼紅細(xì)胞和紅細(xì)胞中，形成包涵體附著于紅細(xì)胞膜上而使其變僵硬，在骨髓內(nèi)大多被破壞而導(dǎo)致“無效造血”。部分含有包涵體的紅細(xì)胞雖能成熟并被釋放至外周血，但當(dāng)它們通過微循環(huán)時容易被破壞；從而出現(xiàn)血清鐵負(fù)荷過重[7]。

本次研究對150例地中海貧血患者進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)37例(24.67%)合并鐵缺乏，33例(22.00%)鐵負(fù)荷過重，13例靜止型α地中海貧血患者未發(fā)生鐵負(fù)荷過重情況，但均合并鐵缺乏現(xiàn)象，出現(xiàn)該情況的原因是不合并缺鐵或溶血患者其血色素多在正常范圍未被納入。本次研究側(cè)面也提示：如果靜止型α地中海貧血出現(xiàn)與貧血程度不相符合的情況應(yīng)考慮合并缺鐵情況，補鐵治療是一種有效方法。在95例HbH病中7例非缺失型并發(fā)鐵負(fù)荷過重，明顯高于缺失型(1例)；而合并鐵缺乏患者中缺失型HbH基因型(3例)則多于非缺失型(2例)，這表明非缺失型HbH病較易發(fā)生鐵負(fù)荷過重，這主要是由于非缺失型HbH病的血紅蛋白更易形成β四聚體，該四聚體極不穩(wěn)定，容易合并溶血，因此臨床癥狀重，輸血次數(shù)增多，反過來又抑制骨髓造血，更加重血清鐵負(fù)荷。在本次研究中，β地中海貧血患者合并鐵缺乏15例(40.54%)，均為雜合子β地中海貧血基因型，純合子β地中海貧血基因型無鐵缺乏現(xiàn)象發(fā)生；合并鐵負(fù)荷過重19例(57.58%)，其中雜合子β地中海貧血基因型僅有1例，這表明雜合子β地中海貧血基因型較易發(fā)生鐵缺乏，這主要是由于缺失型HbH病、雜合子β地中海貧血基因型相對癥狀稍輕，輸血次數(shù)也少，當(dāng)遇到引起患者地中海貧血的原因時，即可能發(fā)生鐵缺乏。

綜上所述，地中海貧血患者的基因類型與其鐵負(fù)荷情況相關(guān)，但并不完全對應(yīng)，臨床中應(yīng)根據(jù)地中海貧血患者的不同基因型結(jié)合患者鐵負(fù)荷水平進行相應(yīng)處理，以改善患者的臨床癥狀。