消腫止痛液消腫、促潰瘍面愈合、鎮(zhèn)痛的有效部位篩選Δ

王銀潔，劉本臣，劉軍，宮凱敏，賽紀(jì)虎，張久存，王宏偉（.銀川市中醫(yī)醫(yī)院制劑中心，銀川75000；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣州 50006）

消腫止痛液是銀川市中醫(yī)醫(yī)院（下文簡稱“我院”）制劑（批準(zhǔn)文號(hào)：寧藥制字Z20140005），主要由地榆、黃柏、大黃、五倍子等八味中藥組成，在我院臨床已應(yīng)用多年，用于治療各種原因所致的痔瘡初期及外痔、混合痔、肛裂和痔瘡術(shù)后的消腫止痛等，治療肛腸疾病術(shù)后疼痛水腫的臨床總有效率達(dá)93.33%[1]。但由于消腫止痛液為外用洗劑，臨床采用坐浴熏洗的給藥方式，用藥方法較為煩瑣，限制了其使用?？紤]到軟膏制劑較易被患者接受，為此，欲將消腫止痛液開發(fā)為軟膏制劑。但軟膏制劑存在載藥量小的特點(diǎn)，按原制劑給藥劑量制備軟膏，制劑無法成型（藥物含量過大），故需對(duì)其進(jìn)行有效部位篩選。鑒于此，本研究用大孔樹脂對(duì)消腫止痛液進(jìn)行分離，得到不同極性部位，將分離得到的部位制備為軟膏劑，通過醋酸致大鼠肛周潰瘍（痔瘡模型）實(shí)驗(yàn)、醋酸致小鼠扭體實(shí)驗(yàn)（全身疼痛）、小鼠熱板實(shí)驗(yàn)（局部疼痛）3個(gè)藥效實(shí)驗(yàn)篩選消腫止痛液具有消腫、促潰瘍面愈合、鎮(zhèn)痛作用的有效部位，為將其二次開發(fā)為軟膏制劑提供參考。

1 材料

1.1 儀器

YLS-6B智能熱板儀（濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司）；RE-500旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）。

1.2 藥品與試劑

消腫止痛液（由我院制劑中心提供，批號(hào)：20170706，規(guī)格：200 mL，每1 mL含生藥量為0.26 g）；硬脂酸、羥苯乙酯、甘油（湖南爾康制藥股份有限公司，批號(hào)：101820150901、103620170605、000120161004）；三乙醇胺（成都華邑藥用輔料制造有限責(zé)任公司，批號(hào)：20170401）；D101大孔樹脂（安徽三星樹脂科技有限公司）；蒸餾水、乙醇、冰醋酸（四川金山制藥有限公司）。

1.3 動(dòng)物

SD大鼠120只（♀♂各半，體質(zhì)量180～220 g）和ICR小鼠260只[♀：200只、♂：60只，體質(zhì)量均為18～22 g），均由寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（寧）2015-0001]。將大、小鼠飼養(yǎng)于寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)動(dòng)物房中，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后用于實(shí)驗(yàn)。

2 方法

2.1 消腫止痛液各極性部位的制備

取消腫止痛液若干瓶，濃縮干燥，制備為干膏粉，備用。取適量干膏粉溶于蒸餾水中，上D101大孔樹脂柱[2]，使藥液高于樹脂面約2 cm，靜置吸附12 h，依次用蒸餾水和體積分?jǐn)?shù)分別為20%、40%、60%、95%的乙醇梯度洗脫，每個(gè)梯度洗脫5個(gè)柱體積，收集并合并相應(yīng)部位洗脫液，濃縮干燥，得各洗脫部位干粉，水洗脫部位得率為36.61%、20%乙醇洗脫部位得率為10.49%、40%乙醇洗脫部位得率為12.11%、60%乙醇洗脫部位得率為2.44%、95%乙醇洗脫部位得率為0.97%。

2.2 醋酸致大鼠肛周潰瘍實(shí)驗(yàn)

2.2.1 分組、造模與給藥 取SD大鼠120只（♀♂各半）隨機(jī)分為正常組（n＝8）和造模組（n＝112）。正常組大鼠不作處理，造模組大鼠采用肛周皮膚注射75%冰醋酸（0.05 mL/只）致肛周潰瘍復(fù)制大鼠痔瘡模型[3]。于造模后24 h，進(jìn)行局部癥狀評(píng)分，分值在6分以上認(rèn)為造模成功[4-5]。將96只造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組，陽性組，消腫止痛液高、低劑量組，水以及20%、40%、60%乙醇洗脫部位的高、低劑量組[由于95%乙醇洗脫部位的得率低（0.97%），再加上考慮到原制劑制備工藝為水提，其有效成分在95%乙醇洗脫部位的可能性較低，故未對(duì)該部位進(jìn)行藥效篩選]，每組8只。于造模成功后開始給藥，每天給藥2次（每天9：00 a.m.和1：00 p.m.各給藥1次），連續(xù)給藥7 d。全方消腫止痛液臨床給藥劑量以生藥計(jì)為27 g/（kg·d），換算為大鼠的給藥劑量以生藥計(jì)為2.78 g/（kg·d），本研究采用臨床劑量的3倍劑量和臨床劑量分別作為高、低劑量，即消腫止痛液高、低劑量組和4個(gè)洗脫部位高、低劑量組大鼠的給藥劑量均分別為8.34、2.78 g/（kg·d），取適量全方消腫止痛液和各洗脫部位干粉，分別與軟膏基質(zhì)混合制成含藥軟膏后[6]，按以上劑量于大鼠肛周涂抹給藥；陽性組大鼠肛周涂抹馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏0.51 g/（kg·d）（臨床等效劑量）；正常組、模型組大鼠肛周涂抹等量空白軟膏基質(zhì)[0.51 g/（kg·d）]。

2.2.2 肛周局部癥狀評(píng)分 在給藥第3、7天，分別測量大鼠肛門腫脹程度及潰瘍的長、寬，并計(jì)算潰瘍面積，觀察各組大鼠肛周腫脹程度、炎性滲出及潰瘍面積，從這3個(gè)方面對(duì)局部癥狀進(jìn)行評(píng)分[5]。（1）腫脹程度：0分，無腫脹；1分，勉強(qiáng)可見腫脹；2分，可見邊緣高出皮膚；3分，紅腫隆起≥1 mm。（2）炎性滲出：0分，無炎性滲出；1分，有少許炎性滲出；2分，有炎性滲出；3分，炎性滲出多。（3）潰瘍面積：0分，無潰瘍面積；1分，潰瘍面積≤0.2 cm2；2分，潰瘍面積 0.2～0.3 cm2；3分，潰瘍面積≥0.3 cm2。以上3個(gè)方面指標(biāo)評(píng)分相加即為最終評(píng)分結(jié)果。

2.2.3 肛周局部黏膜組織病理形態(tài)觀察 在給藥第7天進(jìn)行局部評(píng)分后，將大鼠處死，取各組大鼠肛周組織，固定于10%中性緩沖福爾馬林溶液中，脫水，石蠟包埋，切片（4 μm），蘇木素-伊紅（HE）染色，進(jìn)行病理學(xué)檢查。病理學(xué)檢查在我院病理科進(jìn)行。參考中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥實(shí)驗(yàn)藥理專業(yè)委員會(huì)2017年頒布的《中藥痔瘡動(dòng)物模型制備規(guī)范（草案）起草說明》中的“痔瘡局部黏膜組織病理觀察分級(jí)參考標(biāo)準(zhǔn)”進(jìn)行病理評(píng)分[3]，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：-，0分；+，1分；++，2分；+++，3分?！爸摊従植筐つそM織病理觀察分級(jí)參考標(biāo)準(zhǔn)”具體如下：“-”表示黏膜上皮正常?！?”表示黏膜上皮細(xì)胞部分變性；黏膜下有較多中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤，間質(zhì)充血水腫。“++”表示黏膜上皮細(xì)胞部分變性脫落，形成小潰瘍；黏膜下有較多中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤，偶有小膿腫形成，間質(zhì)充血水腫；黏膜表面有較多膿細(xì)胞、纖維蛋白及壞死的組織碎片。“+++”表示黏膜上皮細(xì)胞部分變性壞死脫落，形成較大潰瘍；黏膜下有大量中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤，有較多小膿腫形成，炎細(xì)胞波及整個(gè)肌層，肌纖維部分變性；間質(zhì)明顯充血、出血、水腫，黏膜表面有大量膿細(xì)胞、纖維蛋白及壞死的組織碎片。

2.3 醋酸致小鼠扭體實(shí)驗(yàn)

2.3.1 分組與給藥 取ICR小鼠120只（♀♂各半）隨機(jī)分為模型組，陽性組，消腫止痛液高、低劑量組，水以及20%、40%、60%乙醇洗脫部位的高、低劑量組，每組10只。按臨床給藥劑量換算，消腫止痛液的小鼠給藥量以生藥計(jì)為5.55 g/（kg·d）。本研究采用臨床劑量的3倍劑量和臨床劑量分別作為高、低劑量，即消腫止痛液高、低劑量組和4個(gè)洗脫部位高、低劑量組大鼠的給藥劑量以生藥計(jì)均分別為16.65、5.55 g/（kg·d），取適量消腫止痛液及其各部位干粉與軟膏基質(zhì)配制成含藥軟膏后給藥；模型組小涂抹等量軟膏基質(zhì)；陽性組小鼠涂抹馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏1.03 g/（kg·d）（臨床等效劑量）。給藥前，將小鼠背部脫毛，經(jīng)皮給藥，每天給藥2次（每天9：00 a.m.和1：00 p.m.各給藥1次），連續(xù)給藥3 d。

2.3.2 鎮(zhèn)痛率測定 末次給藥30 min后，各組小鼠均腹腔注射0.6%冰醋酸，劑量為每只0.2 mL[7-9]，觀察各組小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時(shí)間（扭體潛伏時(shí)間）及15 min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)（以小鼠出現(xiàn)腹部內(nèi)凹、軀干與后肢伸張，臀部高起為扭體反應(yīng)），計(jì)算鎮(zhèn)痛率：鎮(zhèn)痛率（%）＝（模型組平均扭體次數(shù)－給藥組平均扭體次數(shù)）/模型組平均扭體次數(shù)×100%。

2.4 小鼠熱板實(shí)驗(yàn)

2.4.1 分組與給藥 取140只ICR小鼠（♀），調(diào)節(jié)恒溫裝置使熱板控制在（55±0.5）℃ ，預(yù)熱30 min。每次將1只小鼠放在熱板上，記錄其開始舔后足的時(shí)間（s），即為此鼠的痛閾值（正常為5～30 s）[10-12]，＜5 s或＞30 s者不用。將正常痛閾值小鼠120只隨機(jī)分為模型組，陽性組，消腫止痛液高、低劑量組，水以及20%、40%、60%乙醇洗脫部位的高、低劑量組，每組10只。給藥劑量和給藥方法同“2.3.1”項(xiàng)下。

2.4.2 痛閾值測定 末次給藥30 min后，分別測量各組小鼠痛閾值，若60 s無反應(yīng)，其痛閾值按60 s計(jì)算，計(jì)算痛閾提高百分率：痛閾提高百分率（%）＝（給藥后痛閾值－給藥前痛閾值）/給藥前痛閾值×100%。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以±s表示，配對(duì)比較用配對(duì)t檢驗(yàn)（給藥第3天和給藥第7天的局部癥狀評(píng)分比較以及給藥前痛閾值和給藥后痛閾值的比較），兩組間比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析中的兩兩比較（Dunnett-t檢驗(yàn)），若方差不齊或數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，則采用非參數(shù)Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 醋酸致大鼠肛周潰瘍實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1.1 局部癥狀評(píng)分結(jié)果 與正常組比較，模型組大鼠在給藥第3天和第7天均顯示出肛周腫脹、炎性滲出及具有潰瘍，局部癥狀評(píng)分顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，在給藥第3天，陽性組、20%乙醇洗脫部位高劑量組、40%乙醇洗脫部位高劑量組和低劑量組以及60%乙醇洗脫部位高劑量組大鼠肛周潰瘍癥狀均得到改善，局部癥狀評(píng)分顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）；在給藥第7天，除以上5組外，60%乙醇洗脫部位低劑量組大鼠肛周潰瘍癥狀也得到明顯改善，局部癥狀評(píng)分也顯著降低（P＜0.05）。結(jié)果提示，20%、40%、60%乙醇洗脫部位可能為消腫止痛液有效部位。各組大鼠給藥后局部癥狀評(píng)分結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠肛周局部癥狀評(píng)分結(jié)果（±s，n＝8）Tab 1 Scores of local symptoms around the anus of rats in each group（±s，n＝8）

表1 各組大鼠肛周局部癥狀評(píng)分結(jié)果（±s，n＝8）Tab 1 Scores of local symptoms around the anus of rats in each group（±s，n＝8）

注：與正常組比較，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note：vs.normal group，＊ ＊ P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01

給藥第7天0.00±0.00 6.75±0.71＊＊2.00±0.76##6.00±0.76 5.88±0.99 6.13±0.64 6.25±0.71 5.63±0.74#5.88±1.13 2.38±0.74##3.00±0.76##5.25±0.89##5.75±0.71#組別正常組模型組陽性組消腫止痛液高劑量組消腫止痛液低劑量組水洗脫部位高劑量組水洗脫部位低劑量組20%乙醇洗脫部位高劑量組20%乙醇洗脫部位低劑量組40%乙醇洗脫部位高劑量組40%乙醇洗脫部位低劑量組60%乙醇洗脫部位高劑量組60%乙醇洗脫部位低劑量組局部癥狀評(píng)分給藥第3天0.00±0.00 7.13±0.83＊＊4.63±0.52##6.13±0.99 6.25±1.04 6.75±0.89 6.38±0.92 6.00±0.76#6.13±1.13 4.88±0.83##5.50±0.93#5.88±0.99#6.25±1.28

3.1.2 病理觀察及評(píng)分結(jié)果 正常組大鼠肛周局部組織無明顯病理形態(tài)學(xué)改變，黏膜上皮正常。模型組大鼠肛周局部組織皮膚斷裂，黏膜上皮細(xì)胞部分變性壞死脫落，黏膜下有大量中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤，有較多小膿腫形成，間質(zhì)明顯充血、出血、水腫，黏膜表面有大量膿細(xì)胞、纖維蛋白及壞死的組織碎片符合炎性病理學(xué)改變，與文獻(xiàn)報(bào)道[3]的大鼠醋酸致肛周潰瘍的痔瘡病理結(jié)果相似，且該病理改變與文獻(xiàn)報(bào)道的人急性嵌頓性痔的病理形態(tài)特征相似[13]。陽性組大鼠黏膜上皮部分細(xì)胞變性，黏膜下有少量中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤，輕度間質(zhì)充血水腫。消腫止痛液高、低劑量組大鼠肛周黏膜下有較多中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤，黏膜上皮細(xì)胞部分變性脫落，黏膜表面有較多膿細(xì)胞、纖維蛋白及壞死的組織碎片。水洗脫部位高、低劑量組大鼠肛周局部組織皮膚斷裂，黏膜上皮細(xì)胞部分變性壞死脫落，黏膜下有大量中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤，有較多小膿腫形成，間質(zhì)明顯充血、出血、水腫。20%乙醇洗脫部位高、低劑量組大鼠肛周組織黏膜下有較多中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤，有較多小膿腫形成，間質(zhì)明顯充血、出血、水腫。40%乙醇洗脫部位高、低劑量組大鼠黏膜上皮細(xì)胞均較為正常，黏膜下有少量中性粒細(xì)胞，輕度間質(zhì)充血水腫和少量血栓形成。60%乙醇洗脫部位高劑量組較模型組有所改善，黏膜上皮細(xì)胞變性壞死較少，黏膜下中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤，偶有小膿腫形成，間質(zhì)充血水腫，黏膜表面膿細(xì)胞減少等；60%乙醇洗脫部位低劑量組大鼠肛周黏膜上皮細(xì)胞有壞死，黏膜下部分中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤，偶有血栓，黏膜表面有少量膿細(xì)胞。各組大鼠痔瘡局部組織病理形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果見圖1。

圖1 各組大鼠肛周局部黏膜組織HE染色病理切片圖（×100）Fig 1 HE staining pathological sections of local mucosa around the anus of rats in each group（×100）

與正常組比較，模型組大鼠痔瘡局部組織黏膜病理評(píng)分顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，陽性組、40%乙醇洗脫部位高劑量組和低劑量組以及60%乙醇洗脫部位高劑量組大鼠痔瘡局部組織黏膜病理評(píng)分顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），提示40%、60%乙醇洗脫部位可能為消腫止痛液的有效部位。各組大鼠肛周局部黏膜組織病理觀察評(píng)分結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠肛周局部黏膜組織病理觀察評(píng)分結(jié)果Tab 2 Histopathological score of local mucosa around the anus of rats in each group

3.2 醋酸致小鼠扭體反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

與模型組比較，陽性組、20%乙醇洗脫部位高劑量組、40%乙醇洗脫部位高劑量組和低劑量組以及60%乙醇洗脫部位高劑量組小鼠的扭體潛伏時(shí)間均顯著延長，15 min內(nèi)扭體次數(shù)均顯著減少（P＜0.05或P＜0.01），這提示消腫止痛液20%、40%、60%乙醇洗脫部位對(duì)醋酸所致小鼠疼痛有一定抑制作用。各組小鼠扭體潛伏時(shí)間、15 min扭體次數(shù)測定結(jié)果見表3。

表3 各組小鼠扭體潛伏時(shí)間、15 min內(nèi)扭體次數(shù)測定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 3 Writhing latency time and 15 min writhing times of mice in each group（±s，n＝10）

表3 各組小鼠扭體潛伏時(shí)間、15 min內(nèi)扭體次數(shù)測定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 3 Writhing latency time and 15 min writhing times of mice in each group（±s，n＝10）

注：與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note：vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01

鎮(zhèn)痛率，%組別模型組陽性組消腫止痛液高劑量組消腫止痛液低劑量組水洗脫部位高劑量組水洗脫部位低劑量組20%乙醇洗脫部位高劑量組20%乙醇洗脫部位低劑量組40%乙醇洗脫部位高劑量組40%乙醇洗脫部位低劑量組60%乙醇洗脫部位高劑量組60%乙醇洗脫部位低劑量組36.13 6.07 5.78 4.34 6.65 17.63 14.45 28.61 24.57 21.10 14.16扭體潛伏時(shí)間，s 170.80±30.46 290.90±38.05##193.10±18.43 190.20±20.88 177.10±22.29 183.20±14.70 205.70±17.52#196.30±22.31 284.10±35.28##232.40±18.55##209.40±23.83##196.90±18.75 15 min扭體次數(shù)34.60±5.48 22.10±3.90##32.50±5.48 32.60±6.50 33.10±5.59 32.30±3.95 28.50±6.15 29.60±4.58 24.70±4.42##26.10±4.18##27.30±7.92#29.70±5.87

3.3 小鼠熱板實(shí)驗(yàn)結(jié)果

與給藥前比較，陽性組、消腫止痛液高劑量組、20%乙醇洗脫部位高劑量組以及40%乙醇洗脫部位高、低劑量組小鼠給藥后痛閾值均顯著升高（P＜0.05或P＜0.01）。給藥后，與模型組比較，陽性組和40%乙醇洗脫部位高、低劑量組小鼠給藥后的痛閾值明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）。這提示給藥后消腫止痛液、20%和40%乙醇洗脫部位對(duì)熱刺激引起的疼痛具有鎮(zhèn)痛作用。各組小鼠痛閾值測定結(jié)果見表4。

表4 各組小鼠痛閾值測定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 4 Pain threshold of mice in each group（±s，n＝10）

表4 各組小鼠痛閾值測定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 4 Pain threshold of mice in each group（±s，n＝10）

注：與同組給藥前比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note：vs.the same group before administration，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01

痛閾提高百分率，%1.59 34.50 23.69 18.89 22.75 10.71 24.78 19.87 27.47 25.94 14.73 8.65組別模型組陽性組消腫止痛液高劑量組消腫止痛液低劑量組水洗脫部位高劑量組水洗脫部位低劑量組20%乙醇洗脫部位高劑量組20%乙醇洗脫部位低劑量組40%乙醇洗脫部位高劑量組40%乙醇洗脫部位低劑量組60%乙醇洗脫部位高劑量組60%乙醇洗脫部位低劑量組給藥前痛閾值，s 15.75±2.86 15.82±2.96 15.74±3.77 16.24±3.43 15.50±3.82 16.15±2.72 16.56±3.97 16.41±4.06 15.89±2.71 16.02±3.67 16.74±3.51 16.56±2.51給藥后痛閾值，s 15.95±3.79 20.86±2.74＊＊##18.65±2.49＊18.80±2.79 18.24±1.73 17.51±2.02 19.32±3.08＊18.93±2.52 20.04±2.79＊＊#19.52±2.47＊#18.33±2.05 17.50±3.80

4 討論

痔瘡是臨床常見多發(fā)的肛腸疾病，俗有“十人九痔”之稱。祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為，風(fēng)、濕、熱凝結(jié)于肛門，導(dǎo)致氣血壅滯、宿積不散、經(jīng)絡(luò)交錯(cuò)，終發(fā)為痔[14]。寧夏回族自治區(qū)地處西北，由于地域特點(diǎn)及風(fēng)土人情因素，多數(shù)居民擅飲酒、喜食牛羊肉及辛辣厚膩之品，故痔瘡發(fā)病率較高，達(dá)40.06%[15]。我院醫(yī)院制劑消腫止痛液在臨床使用中效果良好，將消腫止痛液有效部位開發(fā)為軟膏制劑是臨床所需，也是醫(yī)院制劑和創(chuàng)新藥物發(fā)展的方向[16]。

本課題組采用D101大孔樹脂對(duì)消腫止痛液進(jìn)行有效部位富集，其原因是在前期文獻(xiàn)調(diào)研中對(duì)該處方中主要藥味黃柏[17]、大黃[18]、五倍子[19]等均有采用D101大孔樹脂進(jìn)行成分富集的相關(guān)研究。馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏具有清熱燥濕、活血消腫、去腐生肌的功效，臨床效果較好，故以其作為本研究的陽性藥[20]。

在進(jìn)行醋酸致大鼠肛周潰瘍的正式實(shí)驗(yàn)前，筆者先采用貼敷法和肛周注射法進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)貼敷法造模效果不佳，且變異性較大；而肛周注射法造模較為穩(wěn)定，并對(duì)注射劑量進(jìn)行了篩選，分別用75%冰醋酸以每只0.05 mL和每只0.1 mL的劑量造模，結(jié)果按每只0.1 mL劑量造模潰瘍面積過大，而按每只0.05 mL劑量造模潰瘍面積適合，同時(shí)應(yīng)注意注射肛周位置相同，以減少模型間的差異。在制備各部位含藥軟膏時(shí)，若藥物不溶于水，先加少量聚山梨酯80助溶，再加蒸餾水溶解作為水相制備軟膏。在制備消腫止痛液給藥組含藥軟膏時(shí)，軟膏藥物濃度較大，給藥后不易吸收，在一定程度上影響了療效。

在醋酸致大鼠肛周潰瘍實(shí)驗(yàn)中，痔瘡局部癥狀評(píng)分的結(jié)果表明，20%、40%和60%乙醇洗脫部位均能改善醋酸致大鼠肛周潰瘍癥狀；觀察痔瘡局部黏膜組織的病理結(jié)果表明，40%和60%乙醇洗脫部位能改善醋酸致大鼠肛周潰瘍的病理變化?？梢?，40%和60%乙醇洗脫部位具有較好的消腫、促潰瘍面愈合作用。在醋酸致小鼠扭體實(shí)驗(yàn)中，20%、40%和60%乙醇洗脫部位均有一定的鎮(zhèn)痛作用。在小鼠熱板實(shí)驗(yàn)中，消腫止痛液、20%和40%乙醇洗脫部位對(duì)熱刺激引起的疼痛具有鎮(zhèn)痛作用。根據(jù)該研究藥效結(jié)果，確定40%乙醇洗脫部位為消腫止痛液有效部位，具有消腫、促潰瘍面愈合、鎮(zhèn)痛的作用。關(guān)于高劑量20%乙醇洗脫部位也有一定鎮(zhèn)痛作用，高劑量60%乙醇洗脫部位也有一定的消腫、促潰瘍面愈合作用，可能原因是這兩個(gè)部位的化學(xué)成分與40%乙醇洗脫部位有一定重疊，尤其是60%乙醇洗脫部位，并且經(jīng)筆者后期通過超高效液相色譜-質(zhì)譜（UPLC-MS）技術(shù)檢測這3個(gè)部位化學(xué)成分后，初步得到了驗(yàn)證。

綜上，本研究首先通過藥效實(shí)驗(yàn)最終確定了40%乙醇洗脫部位為消腫、促潰瘍面愈合和鎮(zhèn)痛的有效部位，后期筆者將繼續(xù)對(duì)該部位化學(xué)成分進(jìn)行研究，以確定其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，并將其二次開發(fā)為軟膏制劑。