• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    亞硝酸鹽脅迫對草魚肝臟泛素-蛋白酶體系統(tǒng)的影響

    2019-07-26 06:58:20孫怡晴ONXAYVIENGKommaly李大鵬
    淡水漁業(yè) 2019年4期
    關(guān)鍵詞:蛋白酶體泛素草魚

    孫怡晴,梁 驍,熊 梅,ONXAYVIENG Kommaly ,2,湯 蓉,李大鵬

    (1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院,池塘健康養(yǎng)殖湖北省工程實(shí)驗(yàn)室,武漢 430070;2.家畜和漁業(yè)部,農(nóng)林部,老撾萬象 6644)

    亞硝酸鹽是生態(tài)系統(tǒng)中氮循環(huán)的重要中間產(chǎn)物,也是水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中常見的污染物。在池塘精養(yǎng)過程中,由于投餌量大以及殘餌糞便大量沉積會(huì)產(chǎn)生大量的氨,缺氧時(shí)硝化作用受阻,會(huì)引起亞硝酸鹽在水環(huán)境中積累。養(yǎng)殖水體中較高濃度的亞硝酸鹽通常會(huì)對魚類引起毒理效應(yīng),導(dǎo)致應(yīng)激反應(yīng),危害養(yǎng)殖魚類存活和健康。環(huán)境應(yīng)激通常會(huì)直接或間接地引起細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)代謝的改變,影響動(dòng)物的生長和發(fā)育。

    在脊椎動(dòng)物中,有三個(gè)主要的系統(tǒng)對蛋白質(zhì)降解起關(guān)鍵作用,即泛素-蛋白酶體系統(tǒng),溶酶體自噬系統(tǒng)和鈣蛋白酶系統(tǒng)。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(ubiquitin-proteasome system,UPS)是一個(gè)調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)降解與功能的重要系統(tǒng)[1]。UPS降解細(xì)胞內(nèi)聚集的或錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)以調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、凋亡、代謝、免疫應(yīng)答、信號傳遞、轉(zhuǎn)錄控制、應(yīng)激應(yīng)答等生物學(xué)過程[2]。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)由泛素(Ub)、泛素活化酶(E1)、泛素結(jié)合酶(E2)、泛素連接酶(E3)和26S蛋白酶體等組成。泛素化是一個(gè)ATP依賴型的耗能過程,主要包括兩個(gè)步驟:首先,通過E1、E2、E3使目標(biāo)蛋白與泛素形成一條多聚泛素鏈;其次,多聚泛素鏈被26S蛋白酶體識別并降解為小肽或氨基酸[3]。E3連接酶可以對不同的底物進(jìn)行特異性的識別,表現(xiàn)了蛋白降解的高度選擇性。

    UPS的核心組分可以作為應(yīng)激傳感器直接參與應(yīng)激感知,如E3連接酶CRL3KEAP1、SCFMET30和SCFFBXL5。Nrf2是由E3連接酶調(diào)控的典型轉(zhuǎn)錄因子,同時(shí)是氧化應(yīng)激的重要傳感器[4]。各種應(yīng)激條件如熱、滲透、氧化和重金屬引起的應(yīng)激反應(yīng)可能會(huì)導(dǎo)致蛋白損傷,從而引起蛋白質(zhì)的錯(cuò)誤折疊。作為第一反應(yīng),不同的伴侶系統(tǒng)(如HSP70、HSP90)嘗試重新折疊蛋白;當(dāng)重折疊不成功時(shí),這些蛋白通過CHIP(E3)的作用被UPS降解[5]。研究表明,生活在0 ℃以下的南極魚類鰓和肝臟中20S蛋白酶體活性隨著溫度升高而增強(qiáng)[6]。在酵母中的研究結(jié)果表明蛋白酶體與Hul5(HECT型泛素連接酶)在清除細(xì)胞質(zhì)內(nèi)錯(cuò)誤折疊蛋白質(zhì)時(shí)發(fā)揮積極作用[7]。

    草魚(Ctenopharyngodonidellus)是我國主要的大宗淡水養(yǎng)殖種類,也是世界上養(yǎng)殖產(chǎn)量最大的水產(chǎn)品種。急性亞硝態(tài)氮濃度的升高會(huì)使草魚免疫性能下降、氧化應(yīng)激反應(yīng)加強(qiáng)[8]、甲狀腺激素代謝平衡被擾亂及甲狀腺功能減退[9]。雖然泛素-蛋白酶體系統(tǒng)在魚類蛋白質(zhì)代謝中具有重要的作用,但亞硝酸鹽脅迫對魚類該系統(tǒng)的影響目前了解甚少。本研究以草魚幼魚為實(shí)驗(yàn)對象,進(jìn)行亞硝酸鹽的急性脅迫實(shí)驗(yàn),探究亞硝酸鹽脅迫對草魚肝臟泛素-蛋白酶體系統(tǒng)的影響,旨在為養(yǎng)殖環(huán)境控制和提升養(yǎng)殖魚類品質(zhì)提供基礎(chǔ)科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)魚與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

    實(shí)驗(yàn)用草魚(94.88±16.54 g)購自湖北省黃岡市團(tuán)風(fēng)縣百容良種場,實(shí)驗(yàn)前暫養(yǎng)1周,養(yǎng)殖用水為曝氣的自來水。實(shí)驗(yàn)采用亞硝酸鈉溶液作為亞硝酸鹽脅迫溶液,設(shè)置對照組和實(shí)驗(yàn)組,對照組亞硝酸鈉濃度為0 mg/L,實(shí)驗(yàn)組暴露濃度為0.5 mg/L和20 mg/L。在暴露12、24 、48和96 h后,分別從每組采集8尾魚麻醉(MS-222,250 mg/L)后采集組織樣品,用于生物化學(xué)、組織學(xué)、分子生物學(xué)的檢測。實(shí)驗(yàn)期間,水溫24.0~26.0 ℃,pH值為7.5±0.3,24 h連續(xù)曝氣,溶氧保持在7 mg/L以上,每12 h更換試液一次以保證實(shí)驗(yàn)暴露濃度的穩(wěn)定性。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 血液生化指標(biāo)測定

    葡萄糖(GLU)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)在全自動(dòng)生化分析儀(Selectra XL,荷蘭威圖科學(xué)公司)上測定,試劑盒購自武漢康瑞嘉科技有限公司。皮質(zhì)醇的測定采用放射性免疫法(RIA),試劑盒購自北京北方生物技術(shù)研究所。

    1.2.2 相關(guān)基因表達(dá)水平檢測

    總RNA提取及cDNA合成:取約80 mg樣品使用Trizol(Vazyme)提取總RNA,在1.1%瓊脂糖凝膠電泳中檢測樣品RNA完整性,并通過分光光度計(jì)法測定濃度。使用帶有g(shù)DNA Eraser(Perfect Real Time)(Takara)的PrimeScript RT試劑盒,根據(jù)說明書進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。

    基因的引物設(shè)計(jì):根據(jù)GenBank中相關(guān)基因序列,使用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)引物(表1)。選用β-actin為實(shí)時(shí)熒光定量PCR內(nèi)參基因,引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。選取psma2(20S proteasome subunit alpha type 2)和psmc1(26S proteasome subunit ATPase 1)分別代表26S 蛋白酶體的20 S亞基和19 S亞基。

    實(shí)時(shí)熒光定量PCR:反應(yīng)體系包括10 μL HieffTMqPCR SYBRGreen Master Mix(No Rox Plus)(YEASEN),各0.4 μL上、下游引物,7.2 μL雙蒸水,2 μL cDNA模板,在QuantStudio 6 Flex Real-Time PCR Detection System(Applied Biosystems,USA)進(jìn)行熒光定量反應(yīng)。反應(yīng)程序:首先95 ℃預(yù)變性5 min,再進(jìn)行95 ℃變性10 s,57 ℃退火20 s,72 ℃延伸20 s,循環(huán)40次。

    表1 實(shí)驗(yàn)所用引物序列

    1.2.3 泛素化蛋白含量測定

    使用Dot-Blot 方法測定肝臟組織泛素化蛋白含量。用RIPA 裂解緩沖液(廣州捷倍斯生物科技有限公司)提取肝臟中的總蛋白,BCA蛋白測定試劑盒(廣州捷倍斯生物科技有限公司)測定濃度,PBS調(diào)節(jié)樣品蛋白濃度,使?jié)舛缺3忠恢?0.67 μg/μL)。移取100 μL樣品至Bio-Dot(Bio-Rad),通過抽濾裝置將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝化纖維素膜(Millipore)。將NC膜置于封閉液中孵育1 h以阻斷非特異性結(jié)合,然后多聚泛素化蛋白抗體(FK1)(Biomol,BML-PW8805-0500)4 ℃孵育過夜。FITC標(biāo)記的二抗(BOSTER,BA1101)孵育2 h后,通過Odyssey CLx(LI-COR,CLx-0813)顯影分析,使用Image J讀取各斑點(diǎn)灰度值。

    1.2.4 肝臟組織學(xué)觀察

    實(shí)驗(yàn)96 h后,采集20 mg/L暴露組草魚肝臟樣品保存于多聚甲醛中,制作石蠟組織切片,用蘇木素-伊紅染色。在Nikon Eclipse 80i顯微鏡下觀察組織學(xué)結(jié)構(gòu),并進(jìn)行拍照分析。

    1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

    基因相對表達(dá)量采用2-ΔΔCt法計(jì)算,采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA),當(dāng)P<0.05時(shí),差異顯著。使用Graphpad PrismV5.0作圖。

    2 結(jié)果

    2.1 血液生化指標(biāo)

    由圖1-A可知,在實(shí)驗(yàn)12、24和48 h時(shí),亞硝酸鹽脅迫顯著提高了草魚血清皮質(zhì)醇含量;在96 h時(shí)恢復(fù)至對照水平。在0.5 mg/L亞硝酸鹽脅迫下,血清葡萄糖的含量在24、48和96 h時(shí)均出現(xiàn)顯著性下降(圖1-B)。血清中膽固醇的含量在亞硝酸鹽脅迫期間,無顯著性變化(圖1-C)。在0.5 mg/L暴露組,甘油三酯和總蛋白的含量在24 h顯著降低(圖1-D、E)。在0.5 mg/L暴露組,血清中白蛋白含量在24 h顯著低于對照組,在48 h和96 h顯著高于對照組(圖1-F)。

    圖版1 亞硝酸鹽暴露對草魚幼魚血清生化指標(biāo)的影響Plt.1 Serum biochemical parameters of C.idellus juveniles exposed to different nitrite concentration*表示同一暴露時(shí)間內(nèi)與0 mg/L組比較有顯著差異(P<0.05),結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)誤的形式表示(n=8),圖版2、圖版3同。

    20 mg/L亞硝酸鹽脅迫24 h后ALP的含量顯著性升高(圖1-G)。在0.5 mg/L暴露組中,血清中ALT含量與暴露時(shí)間負(fù)相關(guān),在12 h與24 h顯著性升高,在48 h與96 h顯著性降低。在20 mg/L暴露組中,其含量在48 h和96 h顯著性低于對照組(圖1-H)。20 mg/L亞硝酸鹽脅迫24 h時(shí),血清AST的含量顯著升高;但在12 h及96 h時(shí),其含量顯著降低。0.5 mg/L亞硝酸鹽脅迫12 h時(shí),AST含量顯著高于對照水平;在48 h和96 h時(shí),其含量與對照組相比顯著降低(圖1-I)。

    2.2 Nrf2 和hsp70的表達(dá)

    20 mg/L亞硝酸鹽脅迫下,nrf2的表達(dá)量在12 h與48 h出現(xiàn)顯著性升高;在0.5 mg/L暴露組,其表達(dá)量在24 h顯著降低,在48 h顯著升高(圖2-A)。在20 mg/L暴露組,hsp70的表達(dá)量在12、24和48 h均顯著性升高,在96 h恢復(fù)至對照水平;在0.5 mg/L暴露組,hsp70的表達(dá)量在12、48和96 h顯著升高,在24 h其表達(dá)量顯著低于對照組(圖2-B)。

    圖版2 亞硝酸鹽暴露對草魚幼魚肝臟nrf2,hsp70相對表達(dá)量的影響Plt.2 Relative expression of nrf2 and hsp70 in the liver of C.idellus exposed to nitrite基因的表達(dá)量以0 mg/L組為1。

    2.3 泛素-蛋白酶體系統(tǒng)的活性

    圖版3 草魚幼魚肝臟UPS相關(guān)基因的相對表達(dá)量和泛素化蛋白的相對含量Plt.3 Relative expression of genes and ubiquitinated proteins in the liver of grass carp 泛素化蛋白的表達(dá)量以0 mg/L組為1。

    在20 mg/L暴露組,chip的mRNA水平在12、24和48 h顯著升高,在96 h與對照組相比無顯著不同(圖3-A)。Ub的表達(dá)量在亞硝酸鹽脅迫的不同時(shí)間點(diǎn)均存在劑量依賴式上升(圖3-B);0.5 mg/L暴露組,其表達(dá)量在24 h和48 h顯著降低,在12 h和96 h顯著性升高;在20 mg/L暴露組中ub的表達(dá)水平均顯著高于對照組。在20 mg/L暴露組,psma2的mRNA水平在24 h顯著升高,在48 h顯著下降;0.5 mg/L亞硝酸鹽脅迫使psma2表達(dá)量在12 h顯著升高,24 h和48 h顯著降低(圖3-C)。psmc1的mRNA水平在0.5 mg/L脅迫48 h顯著降低;在20 mg/L脅迫24 h其表達(dá)水平顯著升高,在48 h顯著降低(圖3-D)。在0.5 mg/L亞硝酸鹽脅迫12、48和96 h,肝臟泛素化蛋白的含量顯著性升高。在20 mg/L暴露組中,泛素蛋白含量在12、24和96 h顯著高于對照組(圖3-E)。

    2.4 肝臟組織病理學(xué)觀察

    由圖4-A可觀察到,對照組的肝細(xì)胞形狀正常,總體形態(tài)規(guī)律,細(xì)胞核位置明顯;而草魚肝細(xì)胞在20 mg/L的亞硝酸鹽脅迫96 h后,肝細(xì)胞出現(xiàn)明顯脂肪空泡化現(xiàn)象(圖4-B)。

    圖4 20 mg/L亞硝酸鹽暴露96 h對草魚幼魚肝臟的組織學(xué)影響Fig.4 The hepatic histological change in grass carp exposed to 20 mg/L of nitrite for 96 h.A:對照組;B:暴露組;HE×200。

    3 討論

    3.1 血清生化指標(biāo)

    魚類的血液承擔(dān)機(jī)體營養(yǎng)代謝和信息傳遞的重要作用,在生理學(xué)研究中,可以通過魚類血液生化指標(biāo)的變化來衡量其應(yīng)激水平、營養(yǎng)狀況、代謝狀態(tài)等。皮質(zhì)醇的含量變化作為檢測應(yīng)激反應(yīng)重要的指標(biāo)之一,在魚體受到外界環(huán)境刺激后,通過下丘腦-垂體-腎間組織軸(HPI)分泌,可幫助機(jī)體對抗環(huán)境應(yīng)激[10]。草魚在高濃度的亞硝酸鹽脅迫短時(shí)間內(nèi)血清皮質(zhì)醇含量上升,表明草魚產(chǎn)生了應(yīng)激反應(yīng),實(shí)驗(yàn)后期已恢復(fù)至對照水平,在鳙(Aristichthysnobilis)的研究中也發(fā)現(xiàn)了相似的結(jié)果[11],大菱鲆(Scophthalmusmaximus)在急性的亞硝酸鹽暴露下血清皮質(zhì)醇水平也顯著升高[12]。有研究指出,亞硝酸鹽脅迫可以通過激活HPI軸使皮質(zhì)醇分泌增多,從而提高葡萄糖水平[13]。本實(shí)驗(yàn)中,0.5 mg/L亞硝酸鹽暴露組的葡糖糖含量在24、48、96 h均呈現(xiàn)顯著下降,這可能是由于魚體內(nèi)能量物質(zhì)的大量消耗。在暗紋石斑魚(Sebastesinermis)的研究中也發(fā)現(xiàn)血清中葡萄糖的含量隨著亞硝酸鹽暴露時(shí)間的延長而明顯下降[14]。

    甘油三酯和膽固醇作為魚類脂質(zhì)代謝中的重要物質(zhì),在抵抗外界環(huán)境應(yīng)激的時(shí)候發(fā)揮重要作用,堿性磷酸酶是一種代謝調(diào)節(jié)酶,可以促進(jìn)魚體營養(yǎng)的吸收和利用[11],亞硝酸鹽暴露濃度及時(shí)間對草魚血清中甘油三酯,膽固醇和堿性磷酸酶影響不大。在本研究中0.5 mg/L的亞硝酸鹽脅迫提高了血清中白蛋白的含量,白蛋白作為血清中主要的蛋白質(zhì)成分能夠維持滲透壓平衡[15]。

    谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶是肝臟、心肌組織中的重要轉(zhuǎn)氨酶,在正常生理狀態(tài)下,這些酶在血清中活性穩(wěn)定,當(dāng)肝細(xì)胞受應(yīng)激等引起病變或損傷時(shí),組織細(xì)胞膜的通透性增加,細(xì)胞內(nèi)的這兩種酶釋放到血液中。鳙在48.634 mg/L亞硝酸鹽氮暴露下其血清中這兩種酶的含量在48 h顯著升高,在恢復(fù)12 h 后達(dá)到對照水平[11]。強(qiáng)俊等[15]發(fā)現(xiàn)高溫脅迫尼羅羅非魚(Oreochromisniloticus)12 h 后,其血清中這兩種酶的含量顯著上升并在脅迫24 h 后降低。本實(shí)驗(yàn)中草魚血清谷草、谷丙轉(zhuǎn)氨酶的含量先升高后下降,可能是因?yàn)槎唐趦?nèi)亞硝酸鹽脅迫會(huì)使肝臟損傷加重,而脅迫后期,魚體基本適應(yīng)脅迫環(huán)境。

    3.2 肝臟hsp70 和nrf2的相對表達(dá)

    通常,除了血液中皮質(zhì)醇及葡萄糖的含量,HSP70和Keap1-nrf2通路的表達(dá)水平也可以反映魚類的應(yīng)激狀態(tài)[16]。在魚類中,熱休克蛋白(HSPS)的調(diào)控受機(jī)體本身的遺傳特性與外界環(huán)境的共同影響,HSP70可以作為分子伴侶參與細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)合成,以及對錯(cuò)誤折疊蛋白質(zhì)的調(diào)節(jié)、降解[15,17]。在本實(shí)驗(yàn)中,hsp70在肝臟中的表達(dá)量受高濃度亞硝酸鹽脅迫影響巨大。草魚受到亞硝酸鹽的脅迫后,hsp70 mRNA被誘導(dǎo)高表達(dá)以保護(hù)魚體減小損傷,環(huán)境應(yīng)激引起機(jī)體hsp70 mRNA表達(dá)上升可以在許多研究中發(fā)現(xiàn)。例如,大菱鲆在亞硝酸鹽脅迫96 h后血液中的hsp70的表達(dá)量出現(xiàn)顯著上調(diào)[12],團(tuán)頭魴(Megalobramaamblycephala)在34 ℃的熱應(yīng)激條件下其肝臟hsp70基因的表達(dá)量在6 h達(dá)最高,隨后開始下降[18]。除了熱休克蛋白,氧化應(yīng)激反應(yīng)同樣受到抗氧化轉(zhuǎn)錄因子Nrf2的調(diào)節(jié),通過Nrf2/ARE通路,激活靶基因,積極發(fā)揮抗氧化作用[19]。Nrf2的表達(dá)趨勢與hsp70相似,在高濃度亞硝酸鹽脅迫短期內(nèi)大幅度上調(diào),96 h后恢復(fù)至對照水平,與鎘脅迫斑馬魚(Daniorerio)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果相似,這可能與抗氧化基因的增強(qiáng)密切相關(guān)[20]。葉元土等[21]發(fā)現(xiàn),灌喂氧化魚油顯著改變了草魚“Keap1-Nrf2-ARE”調(diào)控的下游靶向通路,谷胱甘肽/谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶、熱休克蛋白和蛋白質(zhì)泛素化通路的基因均顯著性上調(diào),用于清除氧化損傷的物質(zhì)和修復(fù)氧化損傷的細(xì)胞等。

    3.3 UPS活性的檢測

    在應(yīng)激反應(yīng)中產(chǎn)生的錯(cuò)誤折疊蛋白與未折疊蛋白首先被HSP70等熱休克蛋白重新折疊,當(dāng)HSP70不能對其進(jìn)行重新折疊時(shí),CHIP作為HSP70的分子伴侶及重要的E3連接酶,可以識別HSP70-底物復(fù)合物,誘導(dǎo)該底物蛋白多聚泛素化并被UPS降解[5,17]。草魚肝組織中chip的表達(dá)趨勢與hsp70和nrf2的基本一致。我們發(fā)現(xiàn)肝臟中ub的表達(dá)量與亞硝酸鹽的脅迫濃度有顯著的正相關(guān);psmc1和psma2的表達(dá)水平在20 mg/L亞硝酸鹽脅迫下在24 h顯著升高,因此UPS的活性在亞硝酸鹽脅迫短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)顯著的增強(qiáng)。有文獻(xiàn)指出溫度升高10 ℃顯著提高了南極魚類的肝臟及鰓組織中20S蛋白酶體活性[6];藍(lán)綠光鰓魚(Chromisviridis)在高溫暴露12 h后,其血糖水平、鰓熱休克蛋白及泛素化蛋白的含量出現(xiàn)顯著上升[22]。本實(shí)驗(yàn)中亞硝酸鹽脅迫提高了草魚肝臟中的泛素化蛋白含量。當(dāng)草魚腸道黏膜受到嚴(yán)重的氧化損傷后,它產(chǎn)生許多損傷細(xì)胞及損傷蛋白質(zhì),從而激活黏膜細(xì)胞中泛素蛋白酶體系統(tǒng)和熱休克蛋白顯著上調(diào),以清除損傷或錯(cuò)誤蛋白[21]。

    3.4 組織病理學(xué)變化

    魚類肝臟在調(diào)控基礎(chǔ)代謝、降解與排泄外源有毒物質(zhì)中發(fā)揮重要作用,并且可以作為魚體健康狀況的指示性參數(shù),肝臟對于外界環(huán)境污染物特別敏感,這種敏感表現(xiàn)在肝臟組織所產(chǎn)生的實(shí)質(zhì)性的變化[23]。本實(shí)驗(yàn)中,肝臟在高濃度亞硝酸鹽脅迫96 h后出現(xiàn)明顯的空泡化,鯰(Clariasgariepinus)和團(tuán)頭魴(Megalobramaamblycephala)在亞硝酸鹽脅迫下其肝臟也表現(xiàn)相似的損傷[24-25]。Saraste等[26]認(rèn)為,肝臟中細(xì)胞凋亡引發(fā)的一些形態(tài)學(xué)特征變化可能導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)的不規(guī)則,脂滴和空泡的形成。肝臟的抗氧化狀態(tài)與肝組織學(xué)存在一致性變化,在肝臟的解毒過程中可能產(chǎn)生ROS并導(dǎo)致對機(jī)體的氧化損傷。Zhang 等[27]發(fā)現(xiàn)當(dāng)抗氧化系統(tǒng)不能及時(shí)消除肝臟中過量的ROS時(shí),為避免羰基蛋白(CP)的積累造成氧化損傷風(fēng)險(xiǎn)加劇,組織中酶催化活性被降低,最終引起蛋白酶作用加強(qiáng),加快降解蛋白質(zhì)。

    綜上所述,急性亞硝酸鹽脅迫導(dǎo)致草魚產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng),肝臟hsp70、nrf2的表達(dá)量顯著上升,造成了肝臟細(xì)胞損傷;泛素-蛋白酶體系統(tǒng)的活性加強(qiáng),通過清除損傷或錯(cuò)誤蛋白來降低氧化損傷風(fēng)險(xiǎn)。

    猜你喜歡
    蛋白酶體泛素草魚
    見證!草魚、加州鱸再度崛起
    見證!草魚再次崛起
    屋檐下的小草魚
    蛋白酶體激活因子REGγ的腫瘤相關(guān)靶蛋白研究進(jìn)展
    王豐:探究蛋白酶體與疾病之間的秘密
    槲皮素通過抑制蛋白酶體活性減輕心肌細(xì)胞肥大
    蛋白泛素化和類泛素化修飾在植物開花時(shí)間調(diào)控中的作用
    泛RNA:miRNA是RNA的“泛素”
    草魚“四大病”癥狀及防治方法(上)
    泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域與泛素化信號的識別
    人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 日本av免费视频播放| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲精品av麻豆狂野| 黑人猛操日本美女一级片| 午夜免费鲁丝| 热re99久久国产66热| 一本综合久久免费| 自线自在国产av| 久久av网站| 亚洲av日韩在线播放| 欧美日韩福利视频一区二区| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产精品一区二区精品视频观看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 高清黄色对白视频在线免费看| 人人妻人人澡人人看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 自线自在国产av| 一二三四社区在线视频社区8| 久久精品91无色码中文字幕| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 美女视频免费永久观看网站| 十八禁网站网址无遮挡| 国产黄色免费在线视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 手机成人av网站| 色在线成人网| 狠狠狠狠99中文字幕| 日本wwww免费看| 精品一区二区三区av网在线观看 | av天堂在线播放| 捣出白浆h1v1| 99热国产这里只有精品6| 精品第一国产精品| 少妇 在线观看| 日韩视频在线欧美| 黄色视频,在线免费观看| 成年人黄色毛片网站| 国产高清videossex| 五月天丁香电影| 男女午夜视频在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 日韩有码中文字幕| xxxhd国产人妻xxx| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产精品久久久人人做人人爽| 天堂中文最新版在线下载| 日本wwww免费看| 真人做人爱边吃奶动态| 飞空精品影院首页| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产黄频视频在线观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| www日本在线高清视频| 老熟女久久久| 香蕉丝袜av| 国产麻豆69| 久久 成人 亚洲| 丝袜在线中文字幕| 亚洲成人国产一区在线观看| 男人操女人黄网站| 青青草视频在线视频观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 人妻久久中文字幕网| 日韩免费高清中文字幕av| 韩国精品一区二区三区| 久久精品人人爽人人爽视色| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲国产欧美网| 男人舔女人的私密视频| 99在线人妻在线中文字幕 | 欧美久久黑人一区二区| 亚洲色图av天堂| 国产日韩欧美在线精品| 久久99一区二区三区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 亚洲午夜理论影院| 国产亚洲精品第一综合不卡| 亚洲七黄色美女视频| 国产精品亚洲av一区麻豆| 一本久久精品| 国产日韩欧美在线精品| 最近最新中文字幕大全免费视频| 夫妻午夜视频| 不卡一级毛片| 90打野战视频偷拍视频| 国产区一区二久久| 一本久久精品| 国产午夜精品久久久久久| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲国产欧美网| 国产男靠女视频免费网站| 午夜福利在线免费观看网站| 成人国产av品久久久| 精品乱码久久久久久99久播| 久久精品亚洲av国产电影网| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产在线免费精品| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 在线观看免费高清a一片| 好男人电影高清在线观看| 午夜福利免费观看在线| 成人国产av品久久久| 欧美激情高清一区二区三区| 日韩中文字幕视频在线看片| 国产精品1区2区在线观看. | 老汉色av国产亚洲站长工具| 性少妇av在线| 色老头精品视频在线观看| 人妻 亚洲 视频| 亚洲精华国产精华精| 国产精品 欧美亚洲| 久热爱精品视频在线9| av视频免费观看在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 一级黄色大片毛片| 欧美黑人欧美精品刺激| 精品国产乱码久久久久久小说| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 99久久精品国产亚洲精品| 久久精品国产综合久久久| 亚洲成人免费av在线播放| 国产免费现黄频在线看| 亚洲免费av在线视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 久久天堂一区二区三区四区| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 久久 成人 亚洲| 日本五十路高清| 日韩欧美免费精品| 国产精品免费大片| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 成年人免费黄色播放视频| 操出白浆在线播放| 又黄又粗又硬又大视频| 精品视频人人做人人爽| 久久免费观看电影| 国产成人av激情在线播放| 亚洲全国av大片| 91成年电影在线观看| 女警被强在线播放| 在线观看舔阴道视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 久久精品91无色码中文字幕| 久久 成人 亚洲| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产福利在线免费观看视频| 亚洲情色 制服丝袜| 黄色 视频免费看| 成年人免费黄色播放视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| 成年版毛片免费区| 黄片小视频在线播放| 后天国语完整版免费观看| 亚洲成人手机| 国产精品久久久人人做人人爽| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产主播在线观看一区二区| 精品国产乱码久久久久久小说| 一区二区三区乱码不卡18| 啦啦啦免费观看视频1| 久久免费观看电影| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲美女黄片视频| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 美女视频免费永久观看网站| 日本a在线网址| 久久久精品94久久精品| 免费在线观看影片大全网站| 国产一区二区激情短视频| 亚洲免费av在线视频| 欧美日韩精品网址| 在线天堂中文资源库| 黄色片一级片一级黄色片| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 久久中文看片网| 欧美日韩福利视频一区二区| 午夜激情av网站| 国产精品免费一区二区三区在线 | 亚洲国产av影院在线观看| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 在线永久观看黄色视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 五月天丁香电影| 国产伦理片在线播放av一区| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 丰满饥渴人妻一区二区三| 视频区欧美日本亚洲| 日韩中文字幕视频在线看片| 成人av一区二区三区在线看| 久久久久久久精品吃奶| 欧美大码av| 三上悠亚av全集在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 中文亚洲av片在线观看爽 | 人人妻人人澡人人看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 欧美黄色片欧美黄色片| 在线观看免费午夜福利视频| 国产日韩欧美视频二区| av有码第一页| 91大片在线观看| 大型黄色视频在线免费观看| 黄片大片在线免费观看| 一本大道久久a久久精品| 欧美午夜高清在线| 女人精品久久久久毛片| 国产精品久久久久久精品古装| 黄频高清免费视频| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 啦啦啦免费观看视频1| 久9热在线精品视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 久久精品人人爽人人爽视色| 成人影院久久| 亚洲第一av免费看| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲欧美激情在线| 国产精品av久久久久免费| 亚洲精品国产色婷婷电影| 欧美+亚洲+日韩+国产| 一级片免费观看大全| 窝窝影院91人妻| 国产又色又爽无遮挡免费看| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 18禁黄网站禁片午夜丰满| 美女国产高潮福利片在线看| 大陆偷拍与自拍| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产日韩欧美在线精品| 黄色片一级片一级黄色片| 又紧又爽又黄一区二区| 久久精品人人爽人人爽视色| av天堂久久9| 日本五十路高清| 青草久久国产| 欧美日韩精品网址| 精品国产乱码久久久久久男人| 最近最新中文字幕大全电影3 | 老司机影院毛片| 精品国产乱码久久久久久小说| 欧美日韩精品网址| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 高清黄色对白视频在线免费看| 夫妻午夜视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 一进一出抽搐动态| 丁香六月欧美| 国产精品1区2区在线观看. | 老司机亚洲免费影院| 亚洲av美国av| 精品国产乱码久久久久久小说| 窝窝影院91人妻| 国产精品久久久人人做人人爽| 久久性视频一级片| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 久久久久视频综合| 在线 av 中文字幕| 黑丝袜美女国产一区| 成年女人毛片免费观看观看9 | 老司机午夜福利在线观看视频 | 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产在线免费精品| 日韩中文字幕视频在线看片| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲欧美色中文字幕在线| 69精品国产乱码久久久| 亚洲专区字幕在线| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 80岁老熟妇乱子伦牲交| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 国产一区有黄有色的免费视频| 波多野结衣一区麻豆| 在线观看免费高清a一片| 午夜福利视频在线观看免费| 在线看a的网站| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久久水蜜桃国产精品网| 精品国产一区二区久久| 黑人操中国人逼视频| 91精品三级在线观看| 国产麻豆69| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲国产看品久久| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲成人免费电影在线观看| 99国产综合亚洲精品| 怎么达到女性高潮| 丁香欧美五月| 免费人妻精品一区二区三区视频| 欧美成人午夜精品| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 亚洲三区欧美一区| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲精品av麻豆狂野| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产成人精品无人区| 亚洲国产欧美网| 成年动漫av网址| 波多野结衣一区麻豆| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲国产欧美在线一区| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 男女之事视频高清在线观看| 伦理电影免费视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 欧美在线一区亚洲| 国产免费视频播放在线视频| 男女无遮挡免费网站观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 人妻 亚洲 视频| 欧美乱妇无乱码| 在线观看免费高清a一片| 少妇精品久久久久久久| av片东京热男人的天堂| 久久人妻熟女aⅴ| 欧美黄色淫秽网站| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 啦啦啦在线免费观看视频4| 一级片'在线观看视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 成人手机av| 手机成人av网站| 男女之事视频高清在线观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 日韩视频一区二区在线观看| 国产免费视频播放在线视频| 性高湖久久久久久久久免费观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲,欧美精品.| 国产亚洲欧美精品永久| 国产xxxxx性猛交| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲国产av新网站| 男女午夜视频在线观看| 成人国语在线视频| 午夜福利视频在线观看免费| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产伦人伦偷精品视频| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲七黄色美女视频| 超碰成人久久| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 手机成人av网站| cao死你这个sao货| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 老司机亚洲免费影院| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 我要看黄色一级片免费的| 日韩视频一区二区在线观看| 国产在视频线精品| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| av电影中文网址| 免费高清在线观看日韩| 无限看片的www在线观看| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 久久精品国产综合久久久| 久久国产精品大桥未久av| 黑人操中国人逼视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产成人精品久久二区二区免费| 一个人免费在线观看的高清视频| 9191精品国产免费久久| 99国产综合亚洲精品| av电影中文网址| 免费观看人在逋| 国产亚洲精品一区二区www | 婷婷丁香在线五月| 人妻 亚洲 视频| 高清在线国产一区| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 岛国毛片在线播放| 热re99久久国产66热| 久久精品人人爽人人爽视色| 一本久久精品| 欧美在线一区亚洲| 麻豆乱淫一区二区| 成年人黄色毛片网站| 黄色 视频免费看| 欧美日韩福利视频一区二区| 午夜免费成人在线视频| 日韩大片免费观看网站| 精品视频人人做人人爽| 成人影院久久| 欧美日本中文国产一区发布| 国产精品电影一区二区三区 | 99精品欧美一区二区三区四区| www.熟女人妻精品国产| 日韩欧美三级三区| 精品国产乱子伦一区二区三区| 天堂动漫精品| 丝袜美足系列| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 久久久久久久精品吃奶| 中文亚洲av片在线观看爽 | 成人影院久久| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 黄色视频不卡| 国产亚洲精品一区二区www | 久久久久国内视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| 99国产精品一区二区蜜桃av | 国产精品久久久久久精品电影小说| 亚洲av日韩在线播放| 男男h啪啪无遮挡| videosex国产| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 欧美日本中文国产一区发布| 欧美久久黑人一区二区| 美女高潮到喷水免费观看| 中国美女看黄片| 成在线人永久免费视频| 免费观看a级毛片全部| av电影中文网址| 亚洲视频免费观看视频| 免费av中文字幕在线| 日日爽夜夜爽网站| 黄色a级毛片大全视频| 91字幕亚洲| 女性生殖器流出的白浆| e午夜精品久久久久久久| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲中文av在线| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 久久久久网色| 18禁国产床啪视频网站| 大陆偷拍与自拍| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 欧美亚洲日本最大视频资源| cao死你这个sao货| 我的亚洲天堂| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 久久中文字幕一级| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 热99re8久久精品国产| 亚洲专区国产一区二区| 久久精品亚洲av国产电影网| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 欧美成人免费av一区二区三区 | 男女高潮啪啪啪动态图| 在线观看免费视频网站a站| 两人在一起打扑克的视频| 91九色精品人成在线观看| 日本a在线网址| 高清欧美精品videossex| 中亚洲国语对白在线视频| 欧美性长视频在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 天堂中文最新版在线下载| 麻豆成人av在线观看| 啪啪无遮挡十八禁网站| 美国免费a级毛片| 日韩人妻精品一区2区三区| 岛国在线观看网站| 国产黄色免费在线视频| 亚洲色图av天堂| 男人操女人黄网站| 国产精品久久久久久精品古装| 久久免费观看电影| 三上悠亚av全集在线观看| 久9热在线精品视频| 在线观看人妻少妇| 性少妇av在线| 国产精品国产av在线观看| 多毛熟女@视频| 丝袜喷水一区| 国产人伦9x9x在线观看| 久久天堂一区二区三区四区| 国产成人免费无遮挡视频| 91精品三级在线观看| 多毛熟女@视频| 久久人人97超碰香蕉20202| 波多野结衣一区麻豆| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 免费看a级黄色片| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 色婷婷久久久亚洲欧美| 99国产综合亚洲精品| 在线观看66精品国产| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产av又大| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 久久香蕉激情| 丝袜在线中文字幕| 精品欧美一区二区三区在线| 欧美精品高潮呻吟av久久| 黄色丝袜av网址大全| 一区福利在线观看| 精品国内亚洲2022精品成人 | 日韩欧美一区视频在线观看| 人妻久久中文字幕网| 亚洲欧美色中文字幕在线| 精品欧美一区二区三区在线| 久久久精品区二区三区| 99久久精品国产亚洲精品| 极品少妇高潮喷水抽搐| 正在播放国产对白刺激| 欧美黑人欧美精品刺激| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲精品在线美女| 国产熟女午夜一区二区三区| 啦啦啦免费观看视频1| 国产亚洲欧美精品永久| 91成人精品电影| 亚洲成国产人片在线观看| 国产精品98久久久久久宅男小说| 热99re8久久精品国产| 亚洲专区中文字幕在线| 欧美国产精品一级二级三级| 成年动漫av网址| 久久 成人 亚洲| 91成年电影在线观看| 一级a爱视频在线免费观看| 这个男人来自地球电影免费观看| 日本五十路高清| 女人精品久久久久毛片| 嫩草影视91久久| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国产人伦9x9x在线观看| 久久av网站| 我要看黄色一级片免费的| 最近最新中文字幕大全免费视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 精品熟女少妇八av免费久了| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产三级黄色录像| 99国产精品99久久久久| 亚洲熟妇熟女久久| a级毛片黄视频| 男女免费视频国产| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| av欧美777| 久久人妻av系列| 国产亚洲精品久久久久5区| 超碰成人久久| 日韩有码中文字幕| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产精品一区二区免费欧美| 欧美激情极品国产一区二区三区| 亚洲一区中文字幕在线| 啪啪无遮挡十八禁网站| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产一区二区激情短视频| 久久青草综合色| 黄色视频,在线免费观看| 中文字幕高清在线视频| 1024视频免费在线观看| 一级黄色大片毛片| 亚洲成国产人片在线观看| 国产成人系列免费观看| 黄片播放在线免费| cao死你这个sao货| 国产视频一区二区在线看| 国产单亲对白刺激| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 9191精品国产免费久久| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 日韩欧美三级三区| 人人澡人人妻人| 大香蕉久久网| 精品卡一卡二卡四卡免费| 丝袜美腿诱惑在线| 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美在线一区亚洲| 另类精品久久| 午夜激情久久久久久久| 操出白浆在线播放| 搡老岳熟女国产| 欧美精品av麻豆av| 国产一区二区三区综合在线观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲人成电影观看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产高清国产精品国产三级| 免费观看人在逋| 亚洲色图av天堂| 十分钟在线观看高清视频www| 国产又爽黄色视频|