顱內(nèi)出血新生兒血清TNF-α與IL-1β的臨床價(jià)值研究

徐會(huì)榮　盧媛玥　李銀華　王宏勇　韋登飛　蘇華平

[摘要] 目的 探討血清白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）在顱內(nèi)出血新生兒的臨床價(jià)值。 方法 選擇2015年1月～2017年1月于天門(mén)市第一人民醫(yī)院住院治療的新生兒顱內(nèi)出血患兒98例為研究對(duì)象（顱內(nèi)出血組），同時(shí)納入同期出生的健康新生兒50名為對(duì)照組。分別于出生后24 h內(nèi)及出生后3、7 d，取外周靜脈血液標(biāo)本，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫測(cè)定法檢測(cè)血漿IL-1β、TNF-α水平。隨訪患兒1年，統(tǒng)計(jì)預(yù)后情況。 結(jié)果 顱內(nèi)出血組新生兒血漿IL-1β、TNF-α水平均明顯高于對(duì)照組（P < 0.05）。同時(shí)，出生后患兒血漿IL-1β、TNF-α水平隨著時(shí)間逐漸下降（P < 0.05）。同出血量患兒在出生后24 h內(nèi)，血漿IL-1β、TNF-α差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。其中出血量為大量的患兒，血漿IL-1β、TNF-α水平最高。顱內(nèi)出血新生兒出血量與血漿IL-1β、TNF-α水平均呈正相關(guān)（r = 0.409、0.376，P < 0.05）。治愈組血漿IL-1β、TNF-α水平均顯著低于未愈組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。 結(jié)論 IL-1β和TNF-α在顱內(nèi)出血新生兒血漿中表達(dá)異常升高，且與血腫量呈正相關(guān)。顱內(nèi)出血新生兒預(yù)后與血漿IL-1β和TNF-α密切相關(guān)，預(yù)后差的患兒血漿IL-1β和TNF-α顯著升高。

[關(guān)鍵詞] 顱內(nèi)出血;新生兒;TNF-α;IL-1β

[中圖分類號(hào)] R722.1 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A ? ? ? ? ?[文章編號(hào)] 1673-7210（2019）05（b）-0063-04

[Abstract] Objective To investigate the clinical value of serum TNF-α and IL-1β in neonates with intracranial hemorrhage. Methods From January 2015 to January 2017， 98 neonates with intracranial hemorrhage in Tianmen First People′s Hospital were selected as the subjects （intracranial hemorrhage group）， and 50 healthy newborns at the same time were selected as the control group. The levels TNF-α and IL-1β in plasma were detected by ELISA assay at 24 h， 3， 7 d after birth respectively. The patients were followed up for 1 year， and the prognosis was statistically analyzed. Results The levels of plasma TNF-α and IL-1β in intracranial hemorrhage group were significantly higher than those in control group （P < 0.05）. At the same time， plasma TNF-α and IL-1β levels gradually decreased after birth （P < 0.05）. There was a significant difference in plasma TNF-α and IL-1β in neonates with bleeding volume in 24 h （P < 0.05）. The neonates with highest blood volume had the highest plasma TNF-α and IL-1β levels （P < 0.05）. There was a positive correlation between the amount of bleeding and the levels of TNF-α and IL-1β in neonates with intracranial hemorrhage （r = 0.409， 0.376; P < 0.05）. The plasma TNF-α and IL-1β levels in the cure group were significantly lower than those in the unhealed group （P < 0.05）. Conclusion The expression of TNF-α and IL-1β in plasma of neonates with intracranial hemorrhage increased abnormally， and positively correlated with the amount of hematoma. The prognosis of neonates with intracranial hemorrhage is closely related to plasma TNF-α and IL-1β， plasma IL-1β and TNF-α are significantly increased in neonateswith poor prognosis.

[Key words] Intracranial hemorrhage; Newborn; TNF-α; IL-1β

新生兒顱內(nèi)出血（intractanial hemorrhage）是常見(jiàn)的新生兒因產(chǎn)傷或缺氧引起的腦損傷，具有致殘率及致死率高的特點(diǎn)，部分幸存新生兒可遺留嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，如腦積水、癲癇及運(yùn)動(dòng)障礙等[1]。新生兒顱內(nèi)出血包括硬膜下出血、原發(fā)性蛛網(wǎng)膜下隙出血、生發(fā)基質(zhì)-腦室內(nèi)出血、小腦出血和腦實(shí)質(zhì)出血等多種類型，尤其是在早產(chǎn)兒中多見(jiàn)，是造成其死亡的主要原因之一[2]。顱內(nèi)出血發(fā)生除可因原發(fā)性的出血導(dǎo)致的占位效應(yīng)所致原發(fā)性顱腦損傷外，還可通過(guò)激活繼發(fā)性免疫反應(yīng)，釋放大量的炎癥因子導(dǎo)致繼發(fā)性腦損傷。成人顱內(nèi)出血的研究表明，血清白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平在損傷后顯著升高，且與損傷程度密切相關(guān)[3]。但是，目前關(guān)于顱內(nèi)出血新生兒血清IL-1β、TNF-α的臨床價(jià)值仍鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)觀察98例顱內(nèi)出血新生兒血清IL-1β、TNF-α的動(dòng)態(tài)變化，并與健康新生兒對(duì)照，探討顱內(nèi)出血新生兒血清IL-1β、TNF-α的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年1月～2017年1月天門(mén)市第一人民醫(yī)院住院治療的新生兒顱內(nèi)出血患兒98例為研究對(duì)象，設(shè)為顱內(nèi)出血組，診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)第4版《實(shí)用新生兒學(xué)》[4]。98例顱內(nèi)出血新生兒中，男51例，女47例;胎齡34～42周，平均（37.89±4.63）周;出生體質(zhì)量2354～3721 g，平均（3157±952）g;確診為顱內(nèi)出血時(shí)間，出生后2～24 h，平均（11.46±7.35）h。根據(jù)出血部位區(qū)分，其中蛛網(wǎng)膜下腔出血47例，腦實(shí)質(zhì)出血25例，硬膜下出血9例，腦室內(nèi)出血17例。按出血量分為小量（<15 mL）32例，中量（15～30 mL）27例，大量（>30 mL）39例。血腫體積計(jì)算方法按多田公式計(jì)算。同時(shí)納入同期出生的健康新生兒50名為對(duì)照組，男27名，女23名;胎齡34～42周，平均（38.74±2.15）周;出生體質(zhì)量3152～4138 g，平均（3967±1307）g。兩組新生兒性別、胎齡、出生體質(zhì)量等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。研究對(duì)象排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并妊娠期糖尿病、子癇前期等妊娠合并癥者;②出生時(shí)或出生后合并感染者;③伴心、肝、腎或其他系統(tǒng)疾病，或合并造血系統(tǒng)及自身免疫性疾病者;④呼吸窘迫綜合征、重度窒息及新生兒缺氧缺血性腦病者;⑤出生后1個(gè)月內(nèi)死亡、轉(zhuǎn)院或自行出院者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，兩組研究對(duì)象家屬和/或監(jiān)護(hù)人對(duì)研究?jī)?nèi)容知情，自愿參與并簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

兩組新生兒均于出生后24 h內(nèi)及出生后3、7 d，分別抽取5 mL外周靜脈血液標(biāo)本。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫測(cè)定法，檢測(cè)新生兒的IL-1β、TNF-α血清細(xì)胞因子水平。獲得血液標(biāo)本后，4℃ 10 000 r/min（離心半徑=40 cm）離心1 min獲得血清，保存于-80℃冰箱中待測(cè)。IL-1β、TNF-α血清細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物試劑工程公司，具體操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)執(zhí)行。

1.3 治療方法

對(duì)顱內(nèi)出血新生兒組采取綜合對(duì)癥治療以及個(gè)體化治療?；純壕诿鞔_診斷后立即給予治療，具體方法包括止血、降低顱內(nèi)壓、抗驚厥及營(yíng)養(yǎng)腦細(xì)胞等，必要時(shí)可于病情穩(wěn)定后采取高壓氧治療。

1.4 療效判斷標(biāo)準(zhǔn)

隨訪1年，依據(jù)患兒具體情況，將其預(yù)后分為治愈與未愈2種情況。治愈：治療后復(fù)查CT提示顱內(nèi)出血灶消失，臨床癥狀及體征全部消失[5]。未愈包括3種情況：①治療后CT提示顱內(nèi)出血灶消失或減小，但仍存在神經(jīng)系統(tǒng)癥狀及體征;②顱內(nèi)高壓癥狀無(wú)明顯改善甚至加重;③死亡[6]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 15.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn);重復(fù)測(cè)量的計(jì)量資料、多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用Q檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血漿IL-1β、TNF-α水平比較

顱內(nèi)出血組新生兒血漿IL-1β、TNF-α水平均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。同時(shí)，出生后患兒血漿IL-1β、TNF-α水平隨著時(shí)間逐漸下降（P < 0.05）。見(jiàn)表1～2。

2.2顱內(nèi)出血組不同出血量與不同出血部位患兒血漿IL-1β、TNF-α水平比較

不同出血部位患兒血漿IL-1β、TNF-α水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。不同出血量患兒在出生后24 h內(nèi)，血漿IL-1β、TNF-α水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），其中出血量為大量的患兒，血漿IL-1β、TNF-α水平最高。見(jiàn)表3。

2.3 出血量與血漿IL-1β、TNF-α水平相關(guān)性分析

相關(guān)性分析結(jié)果示，顱內(nèi)出血新生兒出血量與血漿IL-1β、TNF-α水平均呈正相關(guān)（r = 0.409、0.376，P = 0.009、0.012）。

2.4顱內(nèi)出血組不同預(yù)后患兒血漿IL-1β、TNF-α水平比較

比較出生7 d時(shí)不同預(yù)后患兒血漿IL-1β、TNF-α水平。98例患兒中，治愈65例，未愈33例，其中死亡2例。治愈組血漿IL-1β、TNF-α水平均顯著低于未愈組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)表4。

3 討論

新生兒顱內(nèi)出血是新生兒常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，產(chǎn)傷、窒息、缺氧是其常見(jiàn)病因。嚴(yán)重的新生兒顱內(nèi)出血甚至可導(dǎo)致腦干功能受損、出血后腦積水，以及其他并發(fā)癥，常易遺留有不同程度后遺癥。顱內(nèi)出血病理生理機(jī)制不僅包括出血對(duì)腦組織的壓迫、破壞以及血腫占位效應(yīng)導(dǎo)致的原發(fā)性顱腦損傷，出血后細(xì)胞因子的毒性作用亦造成了繼發(fā)性腦損傷，且繼發(fā)性顱腦損傷是影響患者預(yù)后的關(guān)鍵[7]。顱內(nèi)出血后患兒在應(yīng)激狀態(tài)下出現(xiàn)血清免疫細(xì)胞（如單核巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞）和某些非免疫細(xì)胞（如血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)母細(xì)胞等）激活，合成分泌具有高度生物學(xué)活性的炎性因子，在介導(dǎo)和調(diào)節(jié)炎癥中發(fā)揮重要作用，亦是導(dǎo)致繼發(fā)性顱腦損傷的重要機(jī)制[8]。成人腦出血的研究表明，多種細(xì)胞因子均異常表達(dá)，且與神經(jīng)損傷程度及出血量密切相關(guān)，尤其是IL-1β、IL-6和TNF-α等炎性細(xì)胞因子發(fā)揮極為重要的作用[9]。

IL-1β是炎性反應(yīng)中的一個(gè)共同因子，具有多重調(diào)節(jié)功能，發(fā)揮重要的神經(jīng)體液調(diào)節(jié)作用，調(diào)節(jié)T和B淋巴細(xì)胞增殖和分化，刺激造血細(xì)胞，參與炎性反應(yīng)[10]。正常生理情況下，IL-1β水平較低，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)腫瘤、炎性反應(yīng)、自身免疫性疾病等應(yīng)激反應(yīng)時(shí)，其血漿含量急劇升高，且與疾病狀態(tài)密切相關(guān)[11]。研究表明，成人腦出血后IL-1β的顯著升高是出血后中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性反應(yīng)的重要標(biāo)志，與損傷程度呈正相關(guān)[12]。腦出血后IL-1β可以通過(guò)多種機(jī)制加重繼發(fā)性顱腦損傷，包括刺激花生四烯酸的代謝使自由基和一氧化氮的合成、釋放增多，產(chǎn)生神經(jīng)毒性;促進(jìn)黏附分子的表達(dá)參與炎性反應(yīng);激活膠質(zhì)細(xì)胞釋放IL-6等其他炎性細(xì)胞因子[13-15]。研究發(fā)現(xiàn)，IL-1β可以促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)膠質(zhì)細(xì)胞釋放合成分泌IL-6，進(jìn)而導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷，增加血腦屏障通透性，加重腦水腫及神經(jīng)細(xì)胞凋亡[16]。因此，IL-1β在顱內(nèi)出血中發(fā)揮核心作用，通過(guò)多種機(jī)制影響神經(jīng)損傷的發(fā)生發(fā)展[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，新生兒顱內(nèi)出血后血漿IL-1β顯著升高，且與出血量密切相關(guān)，但是與出血部位無(wú)明顯相關(guān)性。同時(shí)，IL-1β亦與預(yù)后密切相關(guān)，患兒預(yù)后較差組，其血漿IL-1β水平明顯高于治愈組。這提示IL-1β可以作為判斷新生兒顱內(nèi)出血預(yù)后的重要指標(biāo)，但其臨床應(yīng)用還有待進(jìn)一步探討。

另一種重要的炎癥因子TNF-α，是與IL-1β類似，由活化單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的活性蛋白，亦可由中樞神經(jīng)系統(tǒng)活化小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞，甚至某些部位的神經(jīng)合成分泌[18-19]。TNF-α過(guò)度釋放，除通過(guò)促進(jìn)與IL-1β相似的IL-6等炎癥因子釋放，介導(dǎo)繼發(fā)性顱腦損傷外，還可通過(guò)誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶分泌，啟動(dòng)促進(jìn)包括血管內(nèi)皮細(xì)胞基底膜在內(nèi)的細(xì)胞外基質(zhì)分解，破壞血腦屏障，誘發(fā)血管源性腦水腫[20]。TNF-α可以通過(guò)直接調(diào)控神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞壞死，以及新血管形成等多種機(jī)制促進(jìn)繼發(fā)性顱腦損傷的發(fā)生發(fā)展[21-22]。成人腦出血的研究已表明，TNF-α的表達(dá)明顯增加，且在循環(huán)中的表達(dá)亦明顯上調(diào)，可以作為監(jiān)測(cè)患者腦出血疾病嚴(yán)重狀態(tài)的重要指標(biāo)。生理情況下，TNF-α可以通過(guò)調(diào)控細(xì)胞增殖與循環(huán)免疫平衡，發(fā)揮保護(hù)作用，而疾病狀態(tài)下，TNF-α異常升高，且與顱內(nèi)出血的量密切相關(guān)。同時(shí)，患兒預(yù)后較差組血漿TNF-α水平明顯高于治愈組，提示TNF-α可以作為判斷新生兒顱內(nèi)出血預(yù)后的重要指標(biāo)，但其進(jìn)一步臨床應(yīng)用還有待進(jìn)一步探討。

綜上所述，IL-1β和TNF-α在顱內(nèi)出血新生兒血漿中表達(dá)異常升高，且與血腫量呈正相關(guān)。顱內(nèi)出血新生兒預(yù)后與血漿IL-1β和TNF-α密切相關(guān)，預(yù)后差的患兒血漿IL-1β和TNF-α顯著升高。

[參考文獻(xiàn)]

[1] ?崔桂云，鄭娟，王慶廣，等.大鼠腦出血后IL-1β表達(dá)及凝血酶的干預(yù)作用[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2006， 4（12）：1073-1075.

[2] ?張明偉，彭俊，劉陽(yáng)，等.高血壓腦出血患者血清和顱內(nèi)血腫液中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量研究[J].中華神經(jīng)外科疾病研究雜志，2010，9（2）：138-141.

[3] ?王強(qiáng)，王久余，孫建懷.腦出血患者血腫周圍組織的IL-1β、TNF-α及NF-κb的表達(dá)與臨床意義[J].貴州醫(yī)藥，2018，42（1）：24-26.

[4] ?邵肖梅，葉鴻琩，仁小汕.實(shí)用新生兒學(xué)[M].4版.北京：人民衛(wèi)生出版社.

[5] ?孔祥永，池婧涵.新生兒顱內(nèi)出血[J].中國(guó)醫(yī)刊，2011，46（4）：8-11.

[6] ?何冬慧.顱內(nèi)出血新生兒血清IL-6、TNF-α動(dòng)態(tài)變化對(duì)判斷預(yù)后的臨床價(jià)值[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2016，25（2）：179-181.

[7] ?Ni LJ，Wang NN，Zhang LG，et al. Evaluation of the effects of active fractions of chinese medicine formulas on IL-1β，IL-6，and TNF-α release from ANA-1 murine macrophages [J]. J Ethnopharmacol，2016，179：420-431.

[8] ?閻雯，黃妮娜，賈小芳，等.IL-1β和TNF-α表達(dá)量與新生兒缺血缺氧性腦病腦損傷程度的相關(guān)性[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2010，26（7）：693-694.

[9] ?Ray AL，Berggren KL，Cruz Restrepo S. Inhibition of MK2 suppresses IL-1β，IL-6，and TNF-α-dependent colorectal cancer growth [J]. Int J Cancer，2017，142（8）：1702-1711.

[10] ?劉艷紅，趙先鋒，賈美云，等.新生兒顱內(nèi)出血患兒血清IL-6、TNF-α變化的臨床研究[J].中國(guó)兒童保健雜志，2014，22（7）：733-735.

[11] ?劉艷紅，趙先鋒，賈美云，等.顱內(nèi)出血足月新生兒治療前后血漿IL-6、TNF-α變化的臨床分析[J].中國(guó)婦幼衛(wèi)生雜志，2014，5（1）：39-40.

[12] ?李麗.急性腦出血患者血清TNF-α、IL-6、NO的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)及臨床意義[J].中國(guó)醫(yī)師雜志，2003，5（12）：1711-1712.

[13] ?趙穎，呂軍，白龍.血清因子IL-6、IL-1β、hs-CRP、LepE2、TNF-α等指標(biāo)變化與腦出血的關(guān)系分析[J].中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志，2015，18（2）：46-48.

[14] ?Looney CB，Smith JK，Merck LH，et al. Intracranial hemorrhage in asymptomatic neonates：prevalence on MR images and relationship to obstetric and neonatal risk factors 1 [J]. Radiology，2007，242（2）：535-541.

[15] ?程澤沛，蔡志友，趙立波，等.微創(chuàng)血腫清除術(shù)對(duì)腦出血患者血清超氧化物歧化酶和丙二醛的影響[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2008，24（10）：1735-1737.

[16] ?Hanafy KA，Grobelny B，F(xiàn)ernandez L，et al. Brain interstitial fluid TNF-α after subarachnoid hemorrhage [J]. J Neurol Sci，2010，291（1）：69-73.

[17] ?王靜石，劉艷，于泓.新生兒缺氧缺血性腦損傷中的少量出血灶在磁敏感加權(quán)序列的成像研究[J].航空航天醫(yī)學(xué)雜志，2018，29（1）：14-16.

[18] ?夏世文，周茜茜，胡玉蓮，等.宮內(nèi)感染早產(chǎn)兒血清及腦脊液炎性因子與腦損傷的關(guān)系[J].中華實(shí)用兒科臨床雜志，2015，30（18）：1425-1427.

[19] ?劉敬，吳廣琴，郭秀霞，等.新生兒HIE血清IL-6、IL-18與TNF-α動(dòng)態(tài)變化及臨床意義探討[J].中華新生兒科雜志，2001，16（4）：145-146.

[20] ?吳建龍，張艷利，喬建勇，等.高血壓腦出血血腫周圍腦組織中TNF-α、VEGF以及ET-1的表達(dá)及其意義[J].中華神經(jīng)外科雜志，2017，33（5）：498-501.

[21] ?Ma M，Zhang M，Tang X，et al. Massive neonatal intracranial hemorrhage caused by bromadiolone：A case report [J]. Medicine，2017，96（45）：e8506.

[22] ?曹亞芹，董玉斌，郭秋芬，等.顱內(nèi)出血足月新生兒血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9及其抑制劑水平的動(dòng)態(tài)變化[J].臨床兒科雜志，2012，30（3）：244-246.

（收稿日期：2018-08-29 ?本文編輯：蘇 ?暢）