燕麥與苜蓿不同比例組合對(duì)驢盲腸體外發(fā)酵的影響

梁婷玉，郞俠，吳建平，*，王彩蓮，劉立山，張瑞，韋勝

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，甘肅 蘭州730070;2.甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜草與綠色農(nóng)業(yè)研究所，甘肅 蘭州730070)

驢(Equus asinus)作為單胃草食動(dòng)物，具有耐粗飼、抗逆性強(qiáng)等特性。我國(guó)養(yǎng)驢數(shù)在世界居首位，但目前國(guó)內(nèi)尚沒(méi)有專門(mén)飼養(yǎng)驢的營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，一般都根據(jù)小馬營(yíng)養(yǎng)需要量的75%來(lái)飼喂[1]。而相比于馬，驢有更強(qiáng)的粗纖維消化能力，當(dāng)按馬的日糧配比飼喂驢時(shí)會(huì)出現(xiàn)一系列健康問(wèn)題[2]。驢胃容積小，飼料在胃中停留時(shí)間短，是易飽又容易餓的動(dòng)物，需采食大量低能量飼草來(lái)滿足食欲，飼草中的纖維素能刺激胃腸蠕動(dòng)進(jìn)而促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。因此在驢的飼養(yǎng)管理中應(yīng)結(jié)合其消化特性和生理需求供給充足的牧草。苜蓿(Medicago sativa)由于營(yíng)養(yǎng)全面，蛋白含量高(20%以上)等特性，是草食家畜優(yōu)質(zhì)牧草之一[3]。研究發(fā)現(xiàn)，飼喂苜蓿干草可明顯提高小馬盲腸細(xì)菌總數(shù)，纖維分解菌的數(shù)目也顯著增加，從而有利于纖維素降解[4-5]。在實(shí)踐生產(chǎn)中，苜蓿不能單獨(dú)飼喂家畜，其纖維含量低，缺乏可溶性碳水化合物，從而降低胃腸道微生物發(fā)酵[6]。研究表明，以秸稈等低質(zhì)飼草作為家畜基礎(chǔ)日糧時(shí)，苜?？勺鳛槔硐胙a(bǔ)充料，可為瘤胃分解菌提供生長(zhǎng)所必需的揮發(fā)性支鏈脂肪酸[7-8]。燕麥(Avena sativa)是僅次于小麥(Triticum aestivum)、玉米(Zea mays)等糧食作物種植面積居世界第7的農(nóng)作物，是我國(guó)唯一達(dá)到干草級(jí)的禾本科牧草。晾曬后的燕麥干草適口性好，養(yǎng)分含量高，中性洗滌纖維消化率高，且含有較多的水溶性碳水化合物，可為家畜提供充足的能量。研究發(fā)現(xiàn)燕麥干草代替部分苜蓿可改善斷奶后犢牛瘤胃發(fā)酵，提高氮利用率，減少腹瀉發(fā)生率[9]。

驢的盲腸有著與反芻動(dòng)物瘤胃類似的作用，是纖維素被大量微生物發(fā)酵、分解、消化的地方[10]。Pearson等[11]研究發(fā)現(xiàn)飼喂稻草日糧時(shí)驢的表觀消化率與牛相似。但飼喂任何單一牧草都不會(huì)使盲腸發(fā)酵達(dá)到優(yōu)化，本研究通過(guò)體外發(fā)酵法來(lái)研究苜蓿與燕麥組合對(duì)驢盲腸降解率及其發(fā)酵參數(shù)組合效應(yīng)的影響，為驢養(yǎng)殖業(yè)中飼草的科學(xué)利用提供數(shù)據(jù)支持和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)所用燕麥干草和苜蓿干草均采自甘肅省會(huì)寧縣世民種養(yǎng)殖有限公司。飼草樣品風(fēng)干后粉碎，過(guò)0.425 mm，再在105℃下烘干至恒重后密封備用。飼草營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。

1.2 盲腸液采集與處理

在甘肅省會(huì)寧縣世民種養(yǎng)殖有限公司選2頭3～4周歲、體重相近的成年驢作為盲腸液供體動(dòng)物，屠宰后分離內(nèi)臟，每頭驢快速采集1.5 L盲腸液，用4層紗布過(guò)濾，裝入提前預(yù)熱至39℃的保溫瓶中，同時(shí)持續(xù)注入CO2氣體，快速帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行體外發(fā)酵試驗(yàn)。

表1 2種飼草常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Nutrient components of 2 kinds of forage grass(%DM basis)

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)以燕麥和苜蓿為發(fā)酵底物進(jìn)行體外發(fā)酵，將燕麥與苜蓿按80∶20，60∶40，40∶60和20∶80進(jìn)行組合，依次為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組，各處理組設(shè)5個(gè)培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)，即2、4、8、12和24 h，每組每個(gè)培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)設(shè)3個(gè)重復(fù)，測(cè)定各培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)的產(chǎn)氣量、發(fā)酵參數(shù)及養(yǎng)分降解率。

1.4 盲腸液體外發(fā)酵試驗(yàn)

1.4.1 人工唾液配制 參照Menke[12]的方法配制人工唾液。其主要成分包含5部分(表2):微量元素溶液(A)、碳酸鹽緩沖液(B)、常量元素溶液(C)、還原劑溶液(D)(現(xiàn)用現(xiàn)配)和指示劑(E)。在發(fā)酵試驗(yàn)開(kāi)始前將各組分按以下比例混合配制緩沖液:依次加入蒸餾水400 m L、B液200 m L、C液200 m L、A液0.1 m L、D液40 m L和E液1 m L。在39℃恒溫水浴鍋中預(yù)熱，并在充分混勻后持續(xù)通入CO2氣體，直至溶液顏色由粉紅色變?yōu)闊o(wú)色即可。

表2 人工唾液配方Table 2 The formula of artificial saliva

1.4.2 體外發(fā)酵及樣品采集 體外產(chǎn)氣裝置采用ANKOM RFS產(chǎn)氣系統(tǒng)。準(zhǔn)確稱取按相應(yīng)比例混合的飼草0.5 g裝入250 m L厭氧發(fā)酵瓶底部，迅速向每個(gè)瓶中加入100 m L預(yù)熱的液體培養(yǎng)基和50 m L經(jīng)4層紗布過(guò)濾的盲腸液，并向瓶中持續(xù)通入CO25 s，立即蓋上瓶塞，將每個(gè)發(fā)酵瓶與產(chǎn)氣裝置中相應(yīng)的傳感器相連接，于39℃下連續(xù)培養(yǎng)24 h。發(fā)酵過(guò)程中實(shí)時(shí)記錄每小時(shí)的產(chǎn)氣量(gas production，GP)。

發(fā)酵參數(shù)及養(yǎng)分降解率用人工瘤胃系統(tǒng)進(jìn)行發(fā)酵。準(zhǔn)確稱取按相應(yīng)比例混合的飼草0.5 g裝入尼龍袋中，每組15個(gè)重復(fù)，在105℃下烘干至恒重后將4個(gè)處理組尼龍袋分別裝入1、2、3、4號(hào)發(fā)酵罐，再向每個(gè)發(fā)酵罐中加入1000 m L緩沖液和500 m L經(jīng)4層紗布過(guò)濾的盲腸液，并持續(xù)通入CO2氣體10 s，蓋上瓶蓋放入人工瘤胃裝置中進(jìn)行發(fā)酵，在發(fā)酵過(guò)程中分別采集2、4、8、12和24 h時(shí)每組的發(fā)酵液45 m L分裝于15 m L離心管-20℃保存待測(cè)，同時(shí)每組取3個(gè)尼龍袋，用自來(lái)水沖洗終止發(fā)酵，用于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率測(cè)定。

1.5 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.5.1 常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分分析及降解率測(cè)定 參考袁纓[13]的《動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》檢測(cè)燕麥和苜蓿干物質(zhì)(dry matter，DM)、粗脂肪(ether extract，EE)、粗蛋白(crude protein，CP)、粗灰分(crude ash，Ash)、酸性洗滌纖維(acid detergent fiber，ADF)、中性洗滌纖維(neutral detergent fiber，NDF)、鈣(calcium，Ca)和磷(phosphorus，P)含量，計(jì)算燕麥與苜蓿不同比例組合DM、NDF和ADF體外降解率。其中:

某養(yǎng)分降解率=[(試驗(yàn)原料中某養(yǎng)分含量-發(fā)酵濾渣中某養(yǎng)分含量)/試驗(yàn)原料中某養(yǎng)分含量]×100%

1.5.2 發(fā)酵參數(shù)測(cè)定 1)p H及GP測(cè)定:采用p H5系列筆式p H計(jì)直接測(cè)定2、4、8、12、24 h時(shí)培養(yǎng)液的p H值。讀取發(fā)酵2、4、8、12和24 h時(shí)的累積壓力值，某時(shí)間點(diǎn)的累積產(chǎn)氣量按下列公式計(jì)算:

Vx=Vj×Ppsi×0.068004084

式中:Vx為39℃下某時(shí)間點(diǎn)的產(chǎn)氣體積(m L);Vj為發(fā)酵瓶?jī)?nèi)液面上部空間的體積(m L);Ppsi為軟件記錄的累積壓力psi。

2)NH3-N、VFA及MCP濃度的測(cè)定:采用馮宗慈等[14]的方法測(cè)定培養(yǎng)液NH3-N濃度;采用GC-2010島津氣相色譜儀測(cè)定揮發(fā)性脂肪酸(volatile fatty acids，VFA)含量;培養(yǎng)液中菌體蛋白(microbial protein，MCP)含量采用南京建成蛋白定量測(cè)試盒(A045-2)檢測(cè)，即考馬斯亮藍(lán)法。

3)飼草組合效應(yīng)的估算:

單組合效應(yīng)指數(shù)(single-factor associative effects index，SFAEI)=(實(shí)測(cè)值-加權(quán)估算值)/加權(quán)估算值×100%

多項(xiàng)組合效應(yīng)綜合指數(shù)(multiple-factors associative effects index，MFAEI)=∑SFAEI=

SFAEIGP+SFAEIMCP+SFAEINH3-N+SFAEITVFA

式中:實(shí)測(cè)值為實(shí)際測(cè)定值;加權(quán)估算值=燕麥實(shí)測(cè)值×燕麥比例(%)+苜蓿實(shí)測(cè)值×苜蓿比例(%)。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

用Excel 2013整理后，用SPSS 21.0軟件進(jìn)行單因子方差分析，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)降解率和發(fā)酵參數(shù)等數(shù)據(jù)用Duncan’s法進(jìn)行多重比較，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(Mean±SE)表示，當(dāng)P＜0.05時(shí)認(rèn)為差異顯著;對(duì)組合效應(yīng)值進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼草組合發(fā)酵液p H的變化

由表3可知，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，各組p H均逐漸降低。在發(fā)酵2 h時(shí)，Ⅰ組p H最高，且顯著高于Ⅳ組(P＜0.05);8 h時(shí)Ⅲ、Ⅳ組p H均顯著高于Ⅰ和Ⅱ組(P＜0.05)，12 h時(shí)Ⅳ組p H顯著高于Ⅰ和Ⅱ組(P＜0.05);24 h時(shí)Ⅳ組p H顯著高于其余3組(P＜0.05)。

表3 飼草不同比例組合對(duì)驢盲腸體外發(fā)酵p H的影響Table 3 Effect of different proportions of forages on the p H of in vitro fermentation of donkey cecum

2.2 飼草不同比例組合對(duì)驢盲腸體外DM、NDF和ADF降解率的影響

由表4可知，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，DM降解率逐漸增加。Ⅳ組各時(shí)間點(diǎn)DM降解率最高，發(fā)酵4 h時(shí)，Ⅳ組顯著高于其余3組(P＜0.05)，12 h時(shí)Ⅳ組顯著高于Ⅱ組(P＜0.05)，24 h時(shí)Ⅳ組顯著高于Ⅰ組，其余各組間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。

表4 飼草不同比例組合對(duì)驢盲腸體外DM消失率的影響Table 4 Effect of different proportions of forages on DM of in vitro fermentation of donkey cecum(%)

由表5可知，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，NDF降解率逐漸增加，發(fā)酵2 h時(shí)Ⅰ、Ⅱ兩組NDF降解率均顯著高于Ⅲ和Ⅳ組(P＜0.05)，從發(fā)酵8 h開(kāi)始，Ⅳ組各時(shí)間點(diǎn)NDF降解率高于其他各組，但差異不顯著(P＞0.05)。

表5 飼草不同比例組合對(duì)盲腸體外NDF消化率的影響Table 5 Effect of different proportions of forages on NDF of in vitro fermentation of donkey cecum(%)

由表6可知，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，ADF降解率逐漸增加，發(fā)酵2 h時(shí)，各組間無(wú)顯著性差異(P＞0.05);發(fā)酵4、8和12 h時(shí)，Ⅳ組ADF降解率顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組(P＜0.05);發(fā)酵24 h時(shí)Ⅳ組顯著高于Ⅰ組(P＜0.05)，其余各組間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。

表6 飼草不同比例組合對(duì)驢盲腸體外ADF降解率的影響Table 6 Effect of different proportions of forages on ADF of in vitro fermentation of donkey cecum(%)

2.3 飼草不同比例組合對(duì)驢盲腸體外發(fā)酵產(chǎn)氣量(GP)的影響

由表7可知，各組產(chǎn)氣量均隨發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)而不斷增加，各時(shí)間點(diǎn)GP均為Ⅱ組顯著高于其余3組(P＜0.05)，各組24 h GP由高到低依次為Ⅱ＞Ⅳ＞Ⅰ＞Ⅲ，其中Ⅰ、Ⅲ組總產(chǎn)氣量顯著低于Ⅱ和Ⅳ組(P＜0.05)。

表7 飼草不同比例組合對(duì)驢盲腸體外發(fā)酵GP的影響Table 7 Effect of different proportions of forages on gas production of in vitro fermentation of donkey cecum(m L)

2.4 飼草不同比例組合對(duì)驢盲腸體外發(fā)酵NH 3-N濃度的影響

由表8可知，燕麥與苜蓿不同比例組合對(duì)驢盲腸體外發(fā)酵液中NH3-N濃度有顯著影響。發(fā)酵2 h時(shí)，Ⅱ組NH3-N濃度顯著高于其余3組(P＜0.05)，4 h時(shí)Ⅰ組顯著高于Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組(P＜0.05)，12和24 h時(shí)Ⅲ和Ⅳ組NH3-N濃度均顯著高于Ⅰ、Ⅱ組(P＜0.05)。

表8 飼草不同比例組合對(duì)驢盲腸體外發(fā)酵NH3-N濃度的影響Table 8 Effect of different proportions of forages on NH3-N concentration of in vitro fermentation of donkey cecum(mg·100 mL-1)

2.5 飼草不同比例組合對(duì)驢盲腸體外發(fā)酵MCP濃度的影響

由表9可知，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，MCP濃度呈先降低再升高再降低的變化趨勢(shì)，發(fā)酵2 h時(shí)Ⅳ組MCP濃度顯著低于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組(P＜0.05)，12 h時(shí)Ⅲ、Ⅳ組MCP濃度顯著高于Ⅰ、Ⅱ組(P＜0.05)，24 h時(shí)Ⅱ組MCP濃度顯著高于Ⅲ組(P＜0.05)，與Ⅰ、Ⅳ組間差異不顯著(P＞0.05)。

表9 飼草不同比例組合對(duì)驢盲腸體外發(fā)酵MCP濃度的影響Table 9 Effect of different proportions of forages on MCP concentration of in vitro fermentation of donkey cecum(mg·mL-1)

2.6 飼草不同比例組合對(duì)驢盲腸體外發(fā)酵VFA的影響

燕麥與苜蓿不同比例組合對(duì)體外發(fā)酵液中VFA有較大影響(表10)。乙酸濃度在發(fā)酵2～12 h內(nèi)，Ⅱ組均顯著高于其他3組(P＜0.05)，24 h時(shí)Ⅰ、Ⅱ組間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，但均顯著高于Ⅲ和Ⅳ組(P＜0.05)，且Ⅳ組顯著高于Ⅲ組(P＜0.05);丙酸濃度在發(fā)酵2 h時(shí)Ⅱ組顯著高于其他3組(P＜0.05)，4、8和12 h時(shí)Ⅰ、Ⅱ組間均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，且在8和12 h時(shí)Ⅰ、Ⅱ組丙酸濃度均顯著高于Ⅳ組(P＜0.05)，24 h時(shí)Ⅰ、Ⅳ組均顯著高于Ⅱ和Ⅲ組;各組異丁酸濃度在各時(shí)間點(diǎn)均存在顯著性差異，且Ⅱ組最高，在4、8和12 h時(shí)Ⅱ組顯著高于其他3組(P＜0.05)，24 h時(shí)與Ⅰ組無(wú)顯著性差異(P＞0.05);丁酸濃度在各發(fā)酵時(shí)間點(diǎn)均為Ⅱ組顯著高于其他3組(P＜0.05)，24 h時(shí)Ⅰ組顯著高于Ⅲ和Ⅳ組(P＜0.05);異戊酸濃度除發(fā)酵8 h時(shí)各組間差異不顯著外(P＞0.05)，其他各時(shí)間點(diǎn)均為Ⅱ組顯著高于Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ組(P＜0.05);戊酸濃度分別在2、4和12 h時(shí)Ⅱ組顯著高于Ⅲ和Ⅳ組(P＜0.05)，其余時(shí)間點(diǎn)各組間無(wú)顯著性差異(P＞0.05);發(fā)酵2～12 h內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)總揮發(fā)性脂肪酸(TVFA)含量均是Ⅱ組顯著高于Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ組(P＜0.05)，24 h時(shí)Ⅰ、Ⅱ組間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，但均顯著高于Ⅲ和Ⅳ組，且Ⅲ組顯著低于Ⅳ組(P＜0.05)。

表10 飼草不同比例組合對(duì)驢盲腸體外發(fā)酵VFA影響Table 10 Effect of different proportions of forages on VFA production of in vitro fermentation of donkey cecum(mmol·L-1)

2.7 飼草組合效應(yīng)

由表11可知，單項(xiàng)組合效應(yīng)值(SFAEI)中Ⅱ組的GP、TVFA和MCP效應(yīng)值最高，Ⅳ組的NH3-N濃度效應(yīng)值最高。但通過(guò)多項(xiàng)組合效應(yīng)值(MFAEI)綜合評(píng)估來(lái)看，Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ組均為正組合效應(yīng)，且Ⅳ組組合效應(yīng)值最高，Ⅲ組為負(fù)組合效應(yīng)。

表11 燕麥與苜蓿組合效應(yīng)綜合評(píng)價(jià)Table 11 Comprehensive evaluation of combined effects of oat and alfalfa

3 討論

3.1 燕麥與苜蓿不同比例組合對(duì)盲腸體外發(fā)酵液p H的影響

p H是維持盲腸內(nèi)環(huán)境正常的重要指標(biāo)之一，也是評(píng)價(jià)盲腸發(fā)酵的基本指標(biāo)。p H的變化直接影響盲腸微生物對(duì)纖維類物質(zhì)的降解[15]。細(xì)菌、原蟲(chóng)和厭氧性真菌最適生存p H分別為6.7、5.8和7.5[16]。本試驗(yàn)測(cè)得發(fā)酵液的p H為6.71～6.80，在盲腸微生物活動(dòng)的適宜范圍內(nèi)，各比例組合的發(fā)酵環(huán)境穩(wěn)定。試驗(yàn)結(jié)果顯示在發(fā)酵2 h時(shí)隨苜蓿含量的增加p H逐漸降低，從12 h開(kāi)始，p H逐漸趨于穩(wěn)定。有研究表明日糧中蛋白含量的增加可顯著影響微生物發(fā)酵進(jìn)而降低p H，但隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，發(fā)酵體系逐漸趨于穩(wěn)定，p H逐漸趨于正常水平[17]，本試驗(yàn)結(jié)果與此一致。

3.2 燕麥與苜蓿不同比例組合對(duì)DM、NDF和ADF體外降解率的影響

日糧中DM的降解率是評(píng)價(jià)飼料被動(dòng)物可利用程度的重要指標(biāo)，一般DM降解率越高飼料的可利用程度越高[18]。NDF和ADF是粗飼料纖維物質(zhì)的主要組成部分，具有調(diào)控微生物發(fā)酵作用[19]。本研究發(fā)現(xiàn)各組DM、NDF和ADF降解率隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，均呈不同程度的上升趨勢(shì)，該結(jié)果與劉艷芳等[20]的研究結(jié)果一致。燕麥與苜蓿不同比例組合對(duì)NDF降解率無(wú)顯著影響，對(duì)ADF降解率影響較為顯著，但隨著苜蓿比例增加DM、NDF和ADF降解率均有所升高。趙紅艷[21]通過(guò)苜蓿與其他秸稈類飼草組合得出了相似結(jié)果。由于適宜的纖維含量會(huì)提高飼料利用率，但纖維含量過(guò)高會(huì)降低飼料利用率[22]。

3.3 燕麥與苜蓿不同比例組合對(duì)驢盲腸體外發(fā)酵產(chǎn)氣量的影響

體外發(fā)酵產(chǎn)氣量是衡量飼料可消化性的重要指標(biāo)[23]。Silva等[24]發(fā)現(xiàn)不同粗飼料間組合可能會(huì)出現(xiàn)飼料間的正組合效應(yīng)，改善劣質(zhì)飼料的降解率，繼而提高產(chǎn)氣量。本試驗(yàn)結(jié)果表明，Ⅱ組各時(shí)間點(diǎn)累計(jì)產(chǎn)氣量均為最高，Ⅱ和Ⅳ組產(chǎn)氣量組合效應(yīng)優(yōu)于Ⅰ和Ⅲ組;此外Ⅱ組產(chǎn)氣量顯著高于Ⅳ組，該結(jié)果與湯少勛等[25]研究結(jié)果相似。有學(xué)者認(rèn)為產(chǎn)氣量的增加表明微生物發(fā)酵活性越強(qiáng)，則飼料消化率會(huì)不斷提高[12，26]。但由于不同飼料的產(chǎn)氣量并不相同，故產(chǎn)氣量的多少并不能直接來(lái)評(píng)價(jià)飼料的降解程度，需要與其他指標(biāo)相結(jié)合進(jìn)行評(píng)價(jià)[27]。

3.4 燕麥與苜蓿不同比例組合對(duì)驢盲腸體外發(fā)酵NH 3-N和MCP濃度的影響

NH3-N濃度可反映日糧中蛋白的降解及MCP合成狀況。有研究表明，瘤胃中NH3-N濃度為8.5 mg·100 m L-1時(shí)瘤胃微生物蛋白質(zhì)合成能力將達(dá)到飽和[28]。本研究結(jié)果表明，發(fā)酵液中NH3-N濃度為2.73～5.94 mg·100 m L-1，且隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，發(fā)酵液中NH3-N濃度呈降低趨勢(shì)，但隨著苜蓿比例的增加，NH3-N濃度隨發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸趨于穩(wěn)定，Ⅱ組NH3-N濃度從2 h時(shí)的最高到24 h時(shí)降至最低，由此推斷Ⅱ組微生物對(duì)NH3-N的利用較高。本試驗(yàn)所得NH3-N濃度與趙紅艷[21]研究結(jié)果相比偏低，可能是由于本試驗(yàn)以單純的粗飼料為發(fā)酵底物而使可降解碳水化合物偏少，進(jìn)而使微生物活性受限所致[29]。有研究報(bào)道體外培養(yǎng)中滿足微生物生長(zhǎng)需要的理想NH3-N濃度為2～5 mg·100 m L-1[30]，因此本研究結(jié)果在正常范圍內(nèi)。MCP的代謝程度決定了消化道微生物區(qū)系的營(yíng)養(yǎng)代謝水平[31]。MCP也反映飼料組合為微生物提供可利用蛋白質(zhì)的能力，主要受飼料中可降解氮和可發(fā)酵能平衡程度的影響[32]。本研究結(jié)果顯示在發(fā)酵12 h時(shí)苜蓿比例較高的Ⅲ和Ⅳ組MCP濃度較苜蓿比例低的Ⅰ和Ⅱ組高，但在24 h時(shí)Ⅱ組顯著高于Ⅲ組，該結(jié)果與張銳等[33]的研究結(jié)果一致。

3.5 燕麥與苜蓿不同比例組合對(duì)驢盲腸體外發(fā)酵VFA的影響

飼糧經(jīng)消化道微生物發(fā)酵所產(chǎn)生的乙酸、丙酸、丁酸等VFA是草食家畜主要的能量來(lái)源[34]。乙酸、丙酸和丁酸占消化道發(fā)酵TVFA的95%，其中乙酸是動(dòng)物體合成乳脂肪和體脂肪的原料，丙酸主要是促進(jìn)葡萄糖的轉(zhuǎn)化與儲(chǔ)存，丁酸可為動(dòng)物機(jī)體供能[35]。試驗(yàn)中，燕麥與苜蓿不同比例組合對(duì)各種VFA及TVFA均有顯著影響，其中在發(fā)酵24 h時(shí)，除丙酸外，Ⅱ組其余各種脂肪酸含量均顯著高于其他3組;相比于苜蓿含量高的Ⅲ和Ⅳ組，Ⅰ和Ⅱ組TVFA含量顯著提高。飼糧中可降解纖維含量的升高可提高發(fā)酵液中VFA的濃度，進(jìn)而為消化道微生物生長(zhǎng)繁殖提供充足能量[36-37]。

3.6 燕麥與苜蓿組合效應(yīng)的綜合評(píng)估

家畜采食混合飼料是絕對(duì)的，各營(yíng)養(yǎng)素通過(guò)飼料間的相互作用和影響作用于家畜。Ewing等[38]將混合日糧中不同組分之間的相互影響定義為飼料組合效應(yīng)。家畜品種、飼養(yǎng)水平、飼草料種類及配合比例等因素均可直接促使飼草料之間組合效應(yīng)的發(fā)生[26]。單個(gè)飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及利用率會(huì)隨著日糧結(jié)構(gòu)和采食量等因素的不同而改變。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，燕麥與苜蓿不同比例組合，Ⅰ、Ⅱ兩組SFAEI中24 h總產(chǎn)氣量和TVFA為正，Ⅲ和Ⅳ組為負(fù)，且Ⅱ組大于Ⅳ組。從產(chǎn)氣量、NH3-N、TVFA和MCP 4個(gè)指標(biāo)綜合分析發(fā)現(xiàn)Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ組MFAEI均為正，且Ⅳ組MFAEI值最大，Ⅲ組MFAEI為負(fù)。

4 結(jié)論

燕麥與苜蓿按20∶80組合時(shí)能提高DM、NDF和ADF降解率，且多項(xiàng)組合效應(yīng)值更高;燕麥與苜蓿飼喂驢以20∶80組合效果較好。