HPLC法測定刺楸皮中常春藤皂苷元的含量

貴州省食品藥品檢驗所，貴州 貴陽 550004

本品為五加科植物Kalopanaxseptemlobus(Thunb.) Koidz.的干燥樹皮，全年均可采收。貴州民間常用于治療腰膝肩臂疼痛、風濕痹痛、跌打損傷等[1-2]，目前收載于2003版《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標準》中，但該標準僅從性狀和顯微鑒別對其進行質(zhì)量控制，為完善質(zhì)量標準，達到有效控制藥材質(zhì)量的目的，更好地發(fā)揮其治療作用，保障用藥的安全、穩(wěn)定及有效，需要對刺楸皮進行深一步的研究。據(jù)文獻報道刺楸中的皂苷成分主要為刺楸皂苷A,其水解產(chǎn)物常春藤皂苷元、阿拉伯糖及鼠李糖[3-4]。常春藤皂苷元是刺楸皮中主要活性成分，具有保肝、抗腫瘤、止痛、止痙、抗真菌、殺蟲等多種藥理活性[5-6]，與刺楸皮的臨床療效具有相關(guān)性。因此采用高效液相色譜對刺楸皮中常春藤皂苷元進行含量測定，以達到完善質(zhì)量標準及用藥的安全性和穩(wěn)定性的目的，為全面評價刺楸皮藥材質(zhì)量提供參考。

1 材料

1.1 儀器 Ultimate 3000 高效液相色譜儀(美國)，KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，METTLER TOLEDO MS204TS 萬分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)

1.2 試藥與試劑 乙腈為色譜純，甲醇、磷酸、鹽酸均為分析純，水為超純水。刺楸皮3批樣品；常春藤皂苷元(批號：11733-201205，質(zhì)量分數(shù)98.3%)中國食品藥品檢定研究院提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸(60∶40)為流動相；檢測波長為210 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL/min，進樣量：10 μL。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取常春藤皂苷元對照品20.29 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1 mL至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液﹙81.16 μg/mL﹚。

2.3 供試品溶液的制備方法 取過三號篩的粉末約 0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%的甲醇25 mL，加熱回流30 min，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL置具塞錐形瓶中，加入1.5 mL鹽酸，加熱回流2 h，取下，放冷，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，用75%的甲醇定容至25 mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 精密吸取對照品溶液、供試品溶液，照“色譜條件”項下進樣，記錄色譜圖，結(jié)果供試品與對照品在對應(yīng)的位置出現(xiàn)色譜峰。色譜圖見圖1。

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2”項下對照品溶液2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL注入高效液相色譜儀器, 測定峰面積。計算回歸方程：y=6.7155x-0.0013，r=0.9999﹙n=6﹚，表明常春藤皂苷元在0.1632～2.0400 μg的進樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗 取“2.2”項下的對照品溶液，連續(xù)進樣6次，進樣量10 μL，測定常春藤皂苷元的峰面積，計算其RSD為0.46%，結(jié)果表明，儀器精密度好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取同一樣品，按“供試品溶液的制備”項下方法制備1份供試品溶液，分別于0，2 h，4 h，6 h，8 h，10 h，24 h各進樣10 μL，測定常春藤皂苷元的峰面積，計算RSD為0.95%，結(jié)果表明，供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復性試驗 取同一批樣品，按“供試品溶液的制備”項下方法制備6份供試品溶液，進樣量10 μL，測定常春藤皂苷元的峰面積，平均含量13.1470 /g，計算其RSD為0.62%，表明該方法重現(xiàn)性好。

2.9 加樣回收率試驗 取已測定含量的刺楸皮樣品(平均含量13.1470 mg/g)約0.25 g，精密稱定，置于三角燒瓶中，分別精密加入常春藤皂苷元量對照品溶液(0.1058 mg/mL)25 mL，按“供試品溶液的制備”項下方法制備供試品溶液，計算常春藤皂苷元的平均回收率99.19%，RSD為1.18%。見表1。

表1 回收率實驗結(jié)果

2.10 不同色譜柱的考察 取同一樣品，按“供試品溶液的制備”項下方法制備1份供試品溶液，分別以不同品牌C18色譜柱(賽默飛Acclaim 120、依利特Hypersil ODS2、安捷倫Eclipse XDB-C18)各進樣10 μL，測定常春藤皂苷元的峰面積，計算含量，RSD為0.48%，結(jié)果表明不同品牌十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱對含量測定無顯著差異。

2.11 不同流速的考察 取同一樣品，按“供試品溶液的制備”項下方法制備1份供試品溶液，分別以流速(0.8 mL/min、1.0 mL/min、1.2 mL/min)各進樣10 μL，測定常春藤皂苷元的峰面積，計算含量，RSD為0.60%。

2.12 范圍 按正常測定取樣量的80%和120%取樣測定，考察在高低取樣量測定的精密度。取同一樣品，按“供試品溶液的制備”項下方法制備1份供試品溶液，分別以不同取樣量(0.4 g、0.5 g、0.6 g)各進樣10 μL，測定常春藤皂苷元的峰面積，計算含量，RSD為0.68%。

2.14 樣品含量測定 按上述色譜條件，取刺楸皮“供試品溶液的制備”項下方法制備供試品溶液，測定常春藤皂苷元的含量，結(jié)果表2。

表2 樣品測定結(jié)果

3 討論

常春藤皂苷元屬于齊墩果烷型五環(huán)三萜類化合物,一般可溶于水,易溶于熱水、熱甲醇及熱乙醇,不溶于乙醚、苯等極性小的有機溶劑[6]。利用常春藤皂苷元在甲醇中有較好的溶解度這一特性，選擇甲醇作為提取溶劑，再使用鹽酸酸水解進一步的提取皂苷元成分，通過本試驗篩選出最佳的甲醇濃度為75%，提取方法為回流，鹽酸最佳取樣量為1.5 mL。該測定方法準確，簡單，具有較高的重現(xiàn)性。