2018年河南省部分地區(qū)新城疫免疫狀況調(diào)查

摘? 要：采用血凝抑制試驗(yàn)方法對(duì)采自河南信陽(yáng)、濟(jì)源、焦作和周口4個(gè)地區(qū)的6438份血液樣品檢測(cè)新城疫抗體，采用熒光PCR方法對(duì)178份雙拭子樣品進(jìn)行新城疫病毒檢測(cè)。結(jié)果表明：4個(gè)地市新城疫抗體合格率遠(yuǎn)超過(guò)國(guó)家規(guī)定的70%合格率標(biāo)準(zhǔn)，不同規(guī)模雞場(chǎng)新城疫抗體水平有差異，所有雙拭子樣品均未檢到新城疫病毒存在。

關(guān)鍵詞：新城疫;血凝抑制;熒光PCR;抗體水平;合格率

中圖分類號(hào)：S858.312.4? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B? ? ?文章編號(hào)：1673-1085（2019）04-0047-03

新城疫（Newcastie disease，ND）是由新城疫病毒引起的雞和多種禽類的急性高度接觸性傳染病，主要引起禽類呼吸困難、下痢、神經(jīng)紊亂、粘膜和漿膜出血。ND傳播迅速，發(fā)病率和死亡率均較高，是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的重要疾病之一，給養(yǎng)殖場(chǎng)帶來(lái)較大的經(jīng)濟(jì)損失， 是我國(guó)的一類動(dòng)物疫病[1-3]。近年來(lái)，非典型新城疫多發(fā)，且較難防治，給雞場(chǎng)生產(chǎn)帶來(lái)較大損失。新城疫作為病毒性疾病，無(wú)特效藥物治療，主要是靠疫苗免疫，因此抗體水平的高低對(duì)該病的防控起到?jīng)Q定性作用。筆者組織人員對(duì)2018年河南省部分地區(qū)的新城疫免疫抗體情況開展調(diào)查，以期對(duì)該病的防控提供參考資料。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1? 樣品來(lái)源? 檢測(cè)所用血液樣品、拭子樣品由當(dāng)?shù)匾呖貦C(jī)構(gòu)人員在各地免疫過(guò)新城疫疫苗的雞場(chǎng)采集，血液樣品采自雞翅靜脈，3000r/min，離心10min后裝于1.5ml離心管中;取無(wú)菌棉拭子在雞口腔和泄殖腔采集后裝于含有PBS的離心管中，共采集178份;血清及拭子樣品均冷凍保存?zhèn)錂z。

1.1.2? 檢測(cè)試劑和設(shè)備耗材? 新城疫血凝抑制試驗(yàn)抗原、陽(yáng)性血清及陰性血清（青島立見診斷技術(shù)發(fā)展中心）;新城疫病毒核酸測(cè)定試劑盒（熒光PCR法）（上海之江生物科技股份有限公司）;熒光PCR儀、核酸提取儀（西安天隆科技有限公司）;離心機(jī)（湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司）;移液器（德國(guó)eppendorf），一次性聚丙乙烯反應(yīng)板等。

1.2? 方法

1.2.1? 新城疫抗體檢測(cè)? 采用血凝抑制試驗(yàn)（HI）方法進(jìn)行，按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/16550-2008進(jìn)行。

反應(yīng)板中每孔加入0.025ml PBS;第1孔中加入0.025ml血清;在反應(yīng)板上將血清做橫向0.025ml的對(duì)倍稀釋，至第10孔;在第1孔至第11孔中，每孔加入0.025ml的4HAU抗原，室溫下（20～25℃）靜置30min或2～8℃ 45～60min;每孔加入0.025ml 1%（V/V）的雞紅細(xì)胞懸液，輕晃混勻后，室溫（20～25℃）靜置20～40min或2～8℃ 45～60min，當(dāng)對(duì)照孔紅細(xì)胞呈顯著紐扣狀時(shí)判定結(jié)果。

結(jié)果判定：以完全抑制4HAU抗原的最高血清稀釋倍數(shù)判為該血清的HI效價(jià)。當(dāng)陽(yáng)性血清的HI效價(jià)與已知效價(jià)誤差不超過(guò)1個(gè)滴度，陰性血清效價(jià)不高于1：4時(shí)，試驗(yàn)方可成立。被檢樣品HI效價(jià)≤1：4判為陰性;等于1：8判為可疑（可疑樣品應(yīng)重檢，重檢效價(jià)≥1：8判為陽(yáng)性，<1：8判為陰性）;≥1：16判為陽(yáng)性。

1.2.2? 新城疫病原學(xué)檢測(cè)? 采用新城疫病毒核酸測(cè)定試劑盒檢測(cè)采集的雙拭子樣品中是否含有新城疫病毒，具體操作參照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.2.3? 檢測(cè)結(jié)果分析? 根據(jù)ND抗體檢測(cè)結(jié)果，分析不同地區(qū)、不同規(guī)模雞場(chǎng)新城疫抗體水平;根據(jù)ND病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果分析各地是否有新城疫病毒感染。

2? 檢測(cè)結(jié)果與分析

2.1? 不同地區(qū)雞場(chǎng)新城疫抗體檢測(cè)情況? 從表1可以看出，4個(gè)地市共檢測(cè)219個(gè)雞場(chǎng)、樣品6438份，合格率為91.64%，遠(yuǎn)超過(guò)國(guó)家規(guī)定的70%的合格率標(biāo)準(zhǔn);4個(gè)地市抗體合格率均在80%以上，其中信陽(yáng)地區(qū)最高為99.78%，最低的濟(jì)源為83.53%。

2.2? 不同規(guī)模雞場(chǎng)新城疫抗體檢測(cè)情況? 從表2可以看出，4個(gè)地市規(guī)模雞場(chǎng)平均合格率為94.32%，高于散養(yǎng)戶（82.04%）12個(gè)百分點(diǎn);其中，規(guī)模場(chǎng)的抗體合格率中，信陽(yáng)和焦作的最高，為為100%，濟(jì)源最低為87.62%;散養(yǎng)戶抗體合格率，信陽(yáng)最高為99.16%，最低的濟(jì)源僅為70.19%。

2.3? 新城疫病毒檢測(cè)情況? 由圖1和表3可以看出，采集的178份雙拭子樣品中未檢出新城疫病毒。

3? 討論與分析

現(xiàn)階段，新城疫不是國(guó)家強(qiáng)制免疫疫病，但由于該病的危害性較大，國(guó)家十分重視該病的防控工作，部分省市也將該病納入強(qiáng)制免疫范圍，由政府免費(fèi)為養(yǎng)殖戶提供疫苗，各級(jí)畜牧獸醫(yī)部門檢查評(píng)估時(shí)新城疫抗體水平也是必須檢測(cè)的。從本次調(diào)查結(jié)果看，4個(gè)地市的新城疫抗體水平均在80%的以上，超過(guò)國(guó)家要求的70%的合格率標(biāo)準(zhǔn)，其中信陽(yáng)、周口、焦作3個(gè)地市的抗體合格率均在90%以上，只有濟(jì)源市的為83.53%。國(guó)內(nèi)其他地區(qū)新城疫抗體水平調(diào)查情況：張登基調(diào)查2016～2017年甘肅金昌金川區(qū)的抗體水平為97.07%[4]、謝偉調(diào)查2015～2017年四川樂山的抗體合格率為89.15%[5]、蘇琪調(diào)查西安市抗體合格率為93%[6]。從表2可以看出不同規(guī)模雞場(chǎng)的抗體合格率有差異，從調(diào)查結(jié)果來(lái)看，規(guī)模場(chǎng)的抗體合格率高于散養(yǎng)戶的抗體合格率，分析原因：一是規(guī)模場(chǎng)制定免疫程序合理，新城疫免疫次數(shù)較多，散養(yǎng)戶免疫意識(shí)淡薄，免疫次數(shù)少或免疫劑量不足;二是規(guī)模場(chǎng)定期檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)的抗體水平開展補(bǔ)免補(bǔ)防，散養(yǎng)戶較少進(jìn)行檢測(cè)。

做好新城疫的防控，要采取綜合性的防控措施[7-8]：一是加強(qiáng)疫苗免疫。制定科學(xué)合理的免疫程序，雛雞要在7日齡、21日齡滴鼻免疫，以后每隔2～3個(gè)月，加強(qiáng)免疫一次;二是實(shí)時(shí)檢測(cè)雞群新城疫抗體水平，如果抗體合格率低于70%或者抗體滴度低于5log時(shí)，盡快補(bǔ)免補(bǔ)防;三是做好飼養(yǎng)管理，提高雞群的抵抗力。雞舍及活動(dòng)場(chǎng)地要定期清糞、消毒，消滅病原體;天氣驟變或者有應(yīng)激因素時(shí)，要給予雞群電解質(zhì)，提高其抗應(yīng)激能力;四是定期給雞群投喂保健性藥物，特別是雞群發(fā)生細(xì)菌性或者呼吸道疾病時(shí)，避免新城疫的發(fā)生。

參考文獻(xiàn)：

[1]? Jia YQ， Wang XL， Wang XW， et al. Common microRNA-mRNA Interactions in Different Newcastle Disease Virus-Infected Chicken Embryonic Visceral Tissues[J].Int J Mol Sci. 2018;19（5）：1291.

[2]? 陳溥言.獸醫(yī)傳染病學(xué)（第六版）[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2015：367-372.

[3]? 李悅，劉思當(dāng).雞新城疫的流行現(xiàn)狀及防控[J].家禽科學(xué)，2018（05）：33-34.

[4]? 張登基，李曉霞，賈寧.金昌市金川區(qū)2016年-2017年雞新城疫的檢測(cè)與分析[J].國(guó)外畜牧學(xué)（豬與禽），2018，38（12）：53-55.

[5]? 謝偉，唐眉，趙國(guó)芝，等.2015-2017年四川樂山市家禽禽流感（H5）和新城疫免疫抗體檢測(cè)與分析[J].養(yǎng)殖與飼料，2018（12）：14-16.

[6]? 蘇琪，李小麗.西安市雞新城疫免疫抗體水平調(diào)查與分析[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2017，38（06）：102-106.

[7]? 于瑞菊，張春平，劉玉山，等.山東省新城疫流行概況及綜合預(yù)防[J].家禽科學(xué)，2012（09）：30-32.

[8]? 費(fèi)強(qiáng).禽流感與新城疫的綜合防控措施[J].家禽科學(xué)，2012（11）：30-32.

收稿日期：2019-03-17

作者簡(jiǎn)介：胡從勝（1975-），男，河南光山人，獸醫(yī)師，大專，主要從事動(dòng)物疾病診斷與檢測(cè)。