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    雞滑液支原體病的防控應(yīng)引起高度重視

    2019-07-08 22:15:19徐懷英劉星麗秦卓明
    家禽科學(xué) 2019年4期
    關(guān)鍵詞:滑液液囊菌素

    徐懷英 劉星麗 秦卓明

    2.山東師范大學(xué),山東 濟(jì)南? 250014;3.山東省健牧生物藥業(yè)有限公司,山東 濟(jì)南? 250100)中圖分類號:S858.311.33? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A? ? ?文章編號:1673-1085(2019)04-0009-06

    近年來,國內(nèi)外有雞關(guān)滑液支原體(Mycoplasma Synovias,MS)感染雞群發(fā)病的報道屢見不鮮,危害的品種包括商品肉雞、肉種雞,甚至商品蛋雞屢有發(fā)病報道。究竟是什么原因?qū)е翸S肆虐雞群?MS感染率為什么會居高不下?藥物防控和疫苗防控出現(xiàn)了哪些問題?本文從MS的流行現(xiàn)狀、發(fā)病原因、綜合防控等方面進(jìn)行闡述,以使大家得到更多了解。

    1? 對于MS的基本認(rèn)識

    1.1? 病原學(xué)? 雞滑液支原體(MS)隸屬于軟皮體綱、支原體目、支原體屬(屬Ⅰ),含有雙鏈DNA基因組,相對分子量為4.4~12×108Da,接近于非寄生體所需的最小DNA編碼能力極限。其基因組大小為799476bp,G+C含量為28%,有694個ORF(開放閱讀框架),占基因組的91%[1]。

    MS無細(xì)胞壁,僅由胞漿膜包裹,生長需要膽固醇,寄生在人和動物體內(nèi)。對營養(yǎng)要求苛刻。通常需要加入10%~20%人或動物的血清,用于提供膽固醇和其他長鏈脂肪酸[2]。這也是支原體難于進(jìn)行分離和鑒定的重要原因。

    MS支原體直徑約250~500nm,介于病毒和細(xì)菌之間,僅比痘病毒大1~2倍,是立克氏體的1/2,是大腸桿菌的1/5,??梢酝ㄟ^450nm的細(xì)菌濾器。MS是在具有自體繁殖能力和合成自身大分子的微生物中,體積最小、構(gòu)造最簡單、能夠自我復(fù)制(能在無細(xì)胞培養(yǎng)基上生長)的最小的原核生物[3]。支原體和其他微生物的區(qū)別見表1。

    1.2? 對外界環(huán)境的抵抗性? MS是支原體的一種。支原體種屬眾多,廣泛分布于自然界。由于支原體有限的生物合成能力使它們必須依賴寄主而生活。呼吸道、泌尿道、結(jié)膜表面、消化道等是支原體的寄生部位,大多數(shù)支原體是條件性致病菌。

    支原體對外界環(huán)境的抵抗力不強(qiáng),離開禽體即失去活力。一般在pH7.0~8.0時生長較好,低于7.0則被抑制或死亡。對紫外線敏感,不耐干燥,主要存在于人和動物的腔道黏膜。對重金屬鹽、苯酚、常用消毒劑,如乙醇、酚、甲醛、來蘇兒等較細(xì)菌敏感。對一些表面活性劑和脂溶劑極為敏感,這表明常規(guī)的消毒措施對MS均有效。

    1.3? 危害性? MS主要入侵雞關(guān)節(jié)的滑液囊和腱鞘,能夠引起亞臨床呼吸系統(tǒng)疾病、滑膜炎和家禽氣囊炎,能夠造成肉雞生長遲緩、蛋雞產(chǎn)蛋率降低、蛋殼頂端異常以及自身免疫疾病,具有隱秘性、反復(fù)性和亞臨床危害性。MS對不同品種、不同日齡的雞均可危害。雛雞感染多與垂直傳播有關(guān)[4]。雛雞易感性比成年雞高,抵抗力隨年齡的增長而增強(qiáng)。大多數(shù)雞在2~3月齡高發(fā)[5]。

    研究發(fā)現(xiàn):從氣囊病變分離的MS菌株較易引起氣囊炎,而從滑膜分離的MS菌株較易引起滑膜炎。接種ND-IB疫苗或呼吸道感染可加重氣囊炎病情。IBV與MS共同感染時,氣囊炎的嚴(yán)重程度與IBV的毒力有關(guān)[6]。環(huán)境溫度低促進(jìn)了氣囊病變。IBD可引起雞的免疫抑制,與MS雙重感染會導(dǎo)致更嚴(yán)重的氣囊病變。

    1.4? 致病機(jī)理? MS主要寄生在呼吸道、關(guān)節(jié)和結(jié)膜等表面,可引起多個部位的急性或慢性感染。

    支原體的致病機(jī)制與細(xì)菌不同,詳見圖1。在大多數(shù)情況下,MS不侵入組織和血液,只能粘附在呼吸道、關(guān)節(jié)或泌尿生殖道的上皮細(xì)胞[7]。支原體粘附于宿主細(xì)胞上是成功定殖、感染和致病的先決條件,也被認(rèn)為是重要的毒力因子。從宿主細(xì)胞吸收營養(yǎng),從細(xì)胞膜獲得脂質(zhì)和膽固醇,進(jìn)而引起宿主細(xì)胞的損傷。這種粘附性具有特異性,只能吸附在宿主細(xì)胞表面的受體上。支原體可粘附的細(xì)胞很廣,除上皮細(xì)胞外,還可粘附于紅細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和精子表面等[8]。支原體在粘附后,可進(jìn)一步通過不同的機(jī)制引起細(xì)胞損傷。

    MS的致病作用可能與其產(chǎn)生的神經(jīng)氨酸苷酶、過氧化氫、溶血素、溶菌酶或外毒素有關(guān),MS以其小泡狀體經(jīng)過宿主細(xì)胞的葉酸受體后吸附于上皮細(xì)胞并侵入固有層,上述物質(zhì)使上皮細(xì)胞纖毛脫落,停止活動,上皮細(xì)胞逐漸退化死亡,出現(xiàn)炎癥反應(yīng)。在關(guān)節(jié),特別是趾關(guān)節(jié)和跗關(guān)節(jié),可見有異嗜性白細(xì)胞和纖維素浸入關(guān)節(jié)腔或沿腱鞘浸潤。滑液囊因絨毛形成、淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在滑膜下層彌散性或結(jié)節(jié)性浸潤而增生。此間,軟骨表面變色、變薄或變成凹陷,從而形成程度不一的關(guān)節(jié)炎癥狀。

    2? MS的流行現(xiàn)狀

    2.1? 流行病學(xué)? 在自然條件下,只有雞和火雞易感染MS。不同日齡的雞和火雞均可感染,日齡越低易感性越強(qiáng)。急性感染通常見于4~16周齡的雞和10~24周齡的火雞。慢性感染可見于任何日齡。

    馬爽等(2016)調(diào)查顯示,在2010年3月~2015年10月,我國11個省市均有發(fā)病,且在6個省市具有明顯的上升趨勢。雞群發(fā)病日齡多見于1~4月齡,平均發(fā)病日齡為62日齡,發(fā)病率5.75%~25.77%,發(fā)病雞死亡率為4.09%~15.68%。血清學(xué)陽性率為30.23%~54.67%。一年四季均有發(fā)生,冬春季節(jié)最易發(fā),且呈逐年上漲趨勢,這表明滑液支原體在我國雞群中有蔓延趨勢[9]。

    Xue等(2017)利用ELISA檢測了2010~2015年中國21個省的44395份雞血清,MS的陽性率為24.7%~57.2%,平均陽性率高達(dá)41.19%[10]。

    嘉云禽病檢測顯示,2017年,MS在我國蛋雞的發(fā)病率為5.19%,僅次于大腸桿菌(11.7%),高于雞毒支原體4.92%,同時高于禽沙門氏菌4.99%。2018年前9個月中,MS在3月、4月、5月、7月、8月的發(fā)病率分別為35.48%、20%、18%、18%、15%和9.52%,與大腸桿菌的發(fā)病率相當(dāng)。

    事實(shí)上,第十八屆世界禽病大會(2013)曾經(jīng)做出論斷,MS在未來對雞群的危害可能要超過MG(雞敗血支原體)[11]。我們實(shí)驗(yàn)室在臨床樣品中發(fā)現(xiàn),MS的分離率明顯高于MG。圖2顯示的是2014~2017年間山東農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所送檢樣品MG和MS各自的發(fā)病數(shù)量。很顯然,MG(雞敗血支原體)呈現(xiàn)明顯的上升趨勢。

    2.2? 臨床危害? MS感染初期病雞表現(xiàn)為采食量輕度減少,精神不振,隨著感染時間的增加,經(jīng)呼吸道感染的雞出現(xiàn)慢性亞臨床呼吸道癥狀,由全身感染引起滑膜炎的雞表現(xiàn)為跗關(guān)節(jié)、趾關(guān)節(jié)、翅關(guān)節(jié),爪墊出現(xiàn)腫脹,部分病雞龍骨外側(cè)皮膚手感增厚、腫脹。除此之外,還表現(xiàn)為食欲不振,羽毛粗亂,生長遲緩,雞冠蒼白萎縮,排綠色稀便,胸部皮下滑膜囊腫,行走困難,跛行,行動不便影響采食飲水。發(fā)病后期,病雞極度消瘦,呈現(xiàn)營養(yǎng)不良癥狀,最終可能導(dǎo)致衰竭死亡[12]。

    2.3? 剖檢病變? 發(fā)病雞初期無病變。發(fā)病中期,病雞胸骨的滑液囊、跗關(guān)節(jié)周圍腱鞘的滑液囊中可見有淡黃色的清亮的膠凍樣粘液,隨患病時間增加,逐漸變成渾濁粘稠的乳酪樣黃白色滲出物。慢性病例的關(guān)節(jié)表面有橘黃色干酪樣物,隨病情進(jìn)展在關(guān)節(jié)或其附近的腱鞘和肌肉間,爪墊內(nèi)有淺黃色滲出物、黃色糊狀或干酪狀物。個別伴有呼吸道發(fā)病的病雞有時可見氣囊炎。

    3? 高發(fā)原因分析

    3.1? 種源問題? MS傳播的主要途徑就是垂直傳播(經(jīng)種蛋傳播)。美國、歐盟等養(yǎng)禽發(fā)達(dá)國家和地區(qū)對該病主要采用種源凈化,并取得了較好的凈化效果。而我國尚未開展該病的種雞凈化。

    Xue等(2017)調(diào)查表明,在我國463個雞群中,375個雞場呈現(xiàn)MS陽性(占80.99%),足見MS感染之嚴(yán)重[10]。Sun(2017)對中國2010~2012年16個省的地方品種雞進(jìn)行抗體檢查,結(jié)果顯示血清陽性率平均為63.2%,而雞胚病原分離率高達(dá)16.29%,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于養(yǎng)禽發(fā)達(dá)國家的“零”容忍[13]。

    2014年以來,以美國為首的養(yǎng)殖發(fā)達(dá)國家先后發(fā)生高致病性禽流感,我國重要的種雞來源被取消,取而代之的是自繁自養(yǎng)。在這種情況下,家禽的部分垂直傳播性疾病紛紛抬頭,不斷放大,導(dǎo)致上述疾病“雪上加霜”。種雞污染可能是最近幾年我國MS污染直線上升的主要原因。

    3.2? 疫苗免疫覆蓋率低? 我國的大多數(shù)雞群未進(jìn)行MS的疫苗免疫。主要原因是國內(nèi)外對MS的研究滯后,開發(fā)出的疫苗品種相對較少。而疫苗除澳大利亞研發(fā)的弱毒活疫苗外,很少再有其他品種,滅活疫苗處于實(shí)驗(yàn)室階段[14]。從理論上講,只有疫苗的免疫覆蓋率超過80%,疫病發(fā)生的概率才會大大降低。

    3.3? 藥物效果較差? 支原體存在于細(xì)胞內(nèi),加上它本身缺乏細(xì)胞壁,與宿主細(xì)胞膜具有特殊的親和關(guān)系,再加上氣囊和關(guān)節(jié)部位血管較少,藥物很難到達(dá),因此,對支原體有特效的藥物相對較少。

    支原體對影響細(xì)胞壁合成的抗生素,如β-內(nèi)酰胺類、萬古霉素等完全不敏感,對多黏菌素、利福平和磺胺類藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性及常用于支原體感染的抗生素是四環(huán)素類(如四環(huán)素、多西環(huán)素等)、大環(huán)內(nèi)酯類(如泰樂菌素、紅霉素、阿奇霉素和泰萬菌素等)、氯霉素類(氟苯尼考等)、雙萜烯類(泰妙菌素等)及一些氟喹諾酮類藥物(如氧氟沙星、加替沙星等)。與MG相比,MS分離株似乎對紅霉素有耐藥性。在體外,用低水平抗生素培養(yǎng)MS,能夠很快產(chǎn)生對紅霉素和泰樂菌素的高水平的耐藥性,但對恩諾沙星耐藥性產(chǎn)生較慢。沒有發(fā)現(xiàn)滑液支原體產(chǎn)生泰妙菌素和土霉素耐藥性。但是,藥物無法根除家禽體內(nèi)的MS感染[15]。

    3.4? 生物安全意識淡薄? 我們是一個養(yǎng)殖大國,但不是養(yǎng)殖強(qiáng)國。具體表現(xiàn)在:規(guī)模大、水平低、管理差,疫病發(fā)生高。聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織(FAO)根據(jù)生物安全等級,將養(yǎng)殖場分為4類,其中第Ⅰ類和第Ⅱ類均是指具有較高生物安全水平的工業(yè)化家禽生產(chǎn)系統(tǒng)。第Ⅲ類(中級)是僅有中等生物安全水平的商業(yè)化畜禽生產(chǎn)系統(tǒng)。第Ⅳ類(最低級)是僅有最低生物安全水平的庭院式家禽飼養(yǎng)。值得關(guān)注的是,發(fā)達(dá)國家如美國、荷蘭等的養(yǎng)殖業(yè)均以高級別生物安全水平(Ⅰ和Ⅱ)的大型集約化飼養(yǎng)系統(tǒng)為主,甚至像巴西和泰國等發(fā)展中國家的養(yǎng)禽業(yè),其主體也是Ⅰ和Ⅱ類。根據(jù)這一分類原則,我國大多數(shù)的養(yǎng)殖企業(yè)處在生物安全水平較低的Ⅲ類,僅有少數(shù)企業(yè)能達(dá)到Ⅰ和Ⅱ類的生物安全標(biāo)準(zhǔn),疫病防控的壓力較大。

    4? 對MS的綜合診斷

    4.1? 病原的分離與鑒定? MS的分離培養(yǎng)和鑒定是最可靠和最經(jīng)典的“金標(biāo)準(zhǔn)”。從急性病禽分離MS并不難,但在慢性感染階段,病變組織中含有MS活菌較少,特別是與其他支原體或病毒混合感染時,MS的分離鑒定工作費(fèi)時費(fèi)力,難度大。

    4.1.1? 直接鏡檢? 在無菌條件下取病雞囊腫滲出液或者囊內(nèi)液體,姬姆薩染色于油鏡下觀察,能夠看到大量呈球點(diǎn)狀的紫色菌體,少數(shù)呈鏈球狀排列,并存在大量白細(xì)胞以及粉紅色的網(wǎng)狀物質(zhì)。

    4.1.2? 病原分離和鑒定? 無菌狀態(tài)下用拭子取疑似感染的腫脹跗關(guān)節(jié)液及內(nèi)容物于改良的Fery基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入10%滅活血清以及0.01%NAD,37℃培養(yǎng),連續(xù)傳代三次獲得待檢測的純培養(yǎng)物。初代分離時,因樣品中可能存在組織抗原、毒素和抗體,可采用小量培養(yǎng)的方法進(jìn)行轉(zhuǎn)移培養(yǎng),也可用肉湯接種物提高分離率。當(dāng)肉湯培養(yǎng)物培養(yǎng)至酚紅指示劑的顏色從紅色變?yōu)殚偌t或黃色時(通常需要3~7d),應(yīng)將培養(yǎng)物進(jìn)行傳代。MS對低pH較敏感,當(dāng)培養(yǎng)基酚紅指示劑的顏色變黃后(pH<6.8)再培養(yǎng)幾小時,就可能死亡。接種平板3~5d后,顯微鏡放大約30倍可觀察到平板上的支原體菌落[16]。

    4.2? 血清學(xué)診斷? 最常用的血清學(xué)檢測方法包括血清平板凝集試驗(yàn)(SPA)、血凝抑制試驗(yàn)(HI)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)等。SPA快捷、方便,適合在生產(chǎn)中應(yīng)用,但該方法存在交叉污染和交叉反應(yīng),并存在非特異性反應(yīng),出現(xiàn)假陽性,特別是曾接種油乳劑疫苗的雞群和其他細(xì)菌混合感染的雞群[17]。HI方法特異、準(zhǔn)確,主要檢測血清中的IgG抗體,一般在感染后7d出現(xiàn),不適合早期診斷。ELISA是一種在生產(chǎn)中較為常用的抗體檢測方法。這三種方法具有不同的特異性和敏感性。Luciano等(2011)發(fā)現(xiàn)這三種方法檢測結(jié)果一致性不顯著,最好與病原分離鑒定或分子診斷等有機(jī)結(jié)合起來[18]。

    進(jìn)行血清學(xué)診斷時,務(wù)必采用發(fā)病前和發(fā)病后雙份血清對比檢測。只有抗體滴度上升或感染比例增加時,方能確定感染。

    4.3? 分子核酸鑒定? 隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,滑液支原體的診斷方法已建立了核酸探針[19]、限制性酶切分析、細(xì)胞蛋白分析及PCR等試驗(yàn)技術(shù),可用于滑液支原體感染的早期診斷,其敏感性和特異性較血清學(xué)方法高,并且可用于雞毒支原體和滑液支原體的鑒別診斷[20]。

    5? 綜合防控

    MS感染的防治應(yīng)該以預(yù)防為主,應(yīng)采取以加強(qiáng)生物安全措施、種雞凈化、疫苗預(yù)防和藥物治療在內(nèi)的綜合管理措施[21]。

    5.1? 生物安全是降低MS感染的重要措施? MS的發(fā)病與環(huán)境因素密切相關(guān)。首先,應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,降低飼養(yǎng)密度,注意通風(fēng),保持舍內(nèi)空氣新鮮,防止過熱過冷、濕度過高,定期清糞,防止氨氣、硫化氫等有毒有害氣體的刺激等;其次,應(yīng)堅持“全進(jìn)全出”制,最大限度地避免多日齡雞群混養(yǎng);再次,定期帶雞消毒和環(huán)境消毒,加強(qiáng)衛(wèi)生、消毒防范;最后,要合理分配日糧,定期添加維生素來加強(qiáng)機(jī)體自身的免疫力。

    5.2? 做好種源凈化? 種源凈化是控制支原體發(fā)病的核心和關(guān)鍵。美國自1930年就開始其種源凈化行動,1970年之后,美國家禽支原體的發(fā)病率已降至0,成效顯著。統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明:支原體凈化后的雞群,每只母雞在其一個產(chǎn)蛋期內(nèi)比普通母雞可以多產(chǎn)蛋8~20個,經(jīng)濟(jì)效益顯著提高。

    種源凈化是一項造福我國家禽產(chǎn)業(yè)的長遠(yuǎn)工程。對于需要凈化的雞群,不允許有疫苗免疫,否者,會干擾凈化結(jié)果的檢測。在開產(chǎn)前,對全群不少于10%雞群進(jìn)行SPA血清學(xué)檢測,應(yīng)全部陰性;在此后不超過90d的間隔中,對產(chǎn)蛋雞至少150只雞進(jìn)行檢測,抗體應(yīng)為陰性;對其后代雛雞進(jìn)行檢測,應(yīng)全部陰性。淘汰所有陽性雞和可疑雞。以此為基礎(chǔ)建立后備雞群,經(jīng)過反復(fù)多次檢測均為陰性的雞群可以確定為無MS感染雞群。對凈化后的雞群應(yīng)嚴(yán)格生物安全管理。

    此外,在生產(chǎn)過程中,必須選擇使用SPF弱毒活疫苗,避免疫苗污染而感染雞群,這是一個非常重要的技術(shù)措施。

    5.3? 疫苗接種? 在種源不能凈化、支原體污染嚴(yán)重的地區(qū),疫苗接種是減少和預(yù)防支原體感染的有效方法,這是由我國的基本國情決定的。支原體的疫苗主要有兩種:弱毒疫苗和滅活疫苗,前者主要用于商品雞和蛋雞,后者主要用于種雞的免疫。

    弱毒菌苗:澳大利亞研發(fā)出一株溫度敏感性滑液支原體活菌疫苗株(MS-H株),其安全性和有效性在實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)和田間試驗(yàn)中均得到證實(shí),其免疫劑量為4.8×105CFU,具有保護(hù)作用;除溫度敏感型之外,其他因子似乎也與MS-H疫苗株的致弱有關(guān)。這種疫苗已在澳大利亞廣泛應(yīng)用。我國部分種雞場已推廣使用該疫苗[22]。

    滅活疫苗:世界上已有商品化生產(chǎn)的MS油佐劑滅活菌苗問世。我國尚缺乏合法的疫苗產(chǎn)品。丁美娟等(2015)利用雞滑液支原體HN01株研制滅活苗用于預(yù)防MS[23]。

    免疫程序:種雞群應(yīng)弱毒疫苗和滅活疫苗聯(lián)合使用,先用弱毒疫苗,再用滅活疫苗。開產(chǎn)前免疫滅活疫苗。

    抗體監(jiān)控:活疫苗免疫1月后,抗體陽性率應(yīng)在80%以上;滅疫疫苗免疫1月后,抗體陽性率應(yīng)在70%以上。如果陽性率在40%以下,需要重新免疫。

    5.4? 藥物防控? 藥物治療不能根除體內(nèi)的滑液支原體,其藥物敏感性和雞毒支原體相同,對很多藥敏感。如在體外對泰萬菌素、泰樂菌素、氯霉素、林肯霉素、土霉素、壯觀霉素、螺旋霉素、四環(huán)素、硫粘菌素等敏感。其中,在臨床上,泰萬菌素、泰妙菌素對治療MS具有較好的臨床效果。適當(dāng)?shù)乃幬飳︻A(yù)防本病有作用,但對已出現(xiàn)癥狀的病雞治療效果有限[24]。下面的用藥僅供參考。

    泰妙菌素:飲水中加入泰妙菌素(0.006%~0.025%),連用5d,對預(yù)防雞的氣囊炎和滑膜炎有效。嚴(yán)重者,可連續(xù)2個療程。

    泰樂菌素或利高霉素:飲水中加入250~500mg/L,連用5d,具有治療效果。

    泰萬菌素:飲水中加入250mg/L,連用5d,具有治療效果。

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    收稿日期:2019-03-15

    *基金項目:山東省自然科學(xué)基金(ZR2017MC038);國家重點(diǎn)研發(fā)計劃(2016YFD0500800);山東省重點(diǎn)研發(fā)計劃(2018GNC110020)。

    作者簡介:徐懷英(1976-),女,漢族,山東冠縣人,博士,主要從事家禽傳染病防控研究,E-mail:hyingxu@163.com。

    通訊作者:秦卓明,E-mail:qinzm1997@163.com。

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