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    淺析研究禽流感病毒檢測(cè)方法相關(guān)進(jìn)展

    2019-07-08 03:53:33余新玲
    農(nóng)家科技中旬版 2019年3期
    關(guān)鍵詞:病毒檢測(cè)禽流感方法

    摘 要:禽流感病毒作為一種人類(lèi)致病性病毒,有著變異性強(qiáng)、傳播速度快以及病死率高等特征,對(duì)于人民的健康生命安全也會(huì)造成嚴(yán)重的威脅。全球范圍內(nèi)進(jìn)行禽流感疫病防控的原則在于早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早診斷跟早控制,也就要求相關(guān)部門(mén)進(jìn)行禽流感病毒檢測(cè)模式的不斷優(yōu)化與完善,并需要從病原學(xué)跟血清學(xué)兩方面入手,進(jìn)行現(xiàn)有禽流感病毒檢測(cè)方法的不斷優(yōu)化,本文主要就禽流感病毒檢測(cè)方法進(jìn)行了探究分析。

    關(guān)鍵詞:禽流感;病毒檢測(cè);方法

    禽流感病毒屬于正黏病毒科的一種,可以引起禽類(lèi)呼吸系統(tǒng)到嚴(yán)重全身敗血癥等多種病癥,并能夠直接感染到人體。此外禽流感病毒有著非常強(qiáng)的變異性,若未在第一時(shí)間內(nèi)得到有效的干預(yù)控制,還會(huì)造成非常嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失跟社會(huì)損失。我國(guó)作為一個(gè)人口大國(guó),高致病性的禽流感對(duì)于人民的健康安全跟國(guó)民經(jīng)濟(jì)均會(huì)造成非常大的威脅,也就需要加強(qiáng)對(duì)禽流感病毒檢測(cè)方法的不斷強(qiáng)化與完善,來(lái)獲得良好的禽流感防控效果。

    一、血清學(xué)檢測(cè)

    1.血凝實(shí)驗(yàn)跟血凝抑制實(shí)驗(yàn)

    該試驗(yàn)方法作為WHO在全球范圍內(nèi)常用的一種禽流感檢測(cè)方法,也是我國(guó)現(xiàn)階段禽流感檢測(cè)工作中的常見(jiàn)檢測(cè)手段。在進(jìn)行禽流感病毒的檢測(cè)過(guò)程中,采用血凝實(shí)驗(yàn)方法具備有特異性高以及操作簡(jiǎn)便的應(yīng)用優(yōu)勢(shì),但是在檢測(cè)過(guò)程中需要進(jìn)行NDV等病毒的排除,對(duì)于病毒種類(lèi)也無(wú)法進(jìn)行直接的檢測(cè)。這樣就容易出現(xiàn)假陽(yáng)性的檢測(cè)結(jié)果,使得禽流感檢測(cè)的準(zhǔn)確性無(wú)法得到有效保障。

    2.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

    在禽流感病毒檢測(cè)過(guò)程中采用酶聯(lián)免疫吸附法,還有這面感性高的特征,對(duì)于抗原跟抗體均能夠起到良好的檢測(cè)效果,因此在大批血清樣本的檢測(cè)過(guò)程中也獲得了廣泛的應(yīng)用。近年來(lái)我國(guó)的ELISA檢測(cè)技術(shù)得到了迅速的發(fā)展,診斷時(shí)間以及診斷試劑也得到了一定程度的優(yōu)化。相關(guān)研究人員采用昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)所制定的禽流感病毒HA蛋白,能夠?qū)υ擃?lèi)型的禽流感病毒起到良好的檢測(cè)效果,還具有非常高的重復(fù)性跟穩(wěn)定性。

    3.電化學(xué)發(fā)光免疫法

    元文寶等研究人員選用了釕聯(lián)吡啶對(duì)H9亞型AIV的單克隆抗體進(jìn)行標(biāo)記,并對(duì)生物素化多抗的最佳工作濃度進(jìn)行了優(yōu)化,進(jìn)行了臨界點(diǎn)跟反應(yīng)譜的確定,對(duì)構(gòu)建完成的方向進(jìn)行了試驗(yàn),結(jié)果表明采用電化學(xué)發(fā)光免疫法能夠?qū)εR床上的禽流感病毒起到良好的檢測(cè)效果,對(duì)于H9亞型禽流感病毒的監(jiān)測(cè)以及防控工作也有著非常積極的意義。所有相關(guān)研究人員還需要加強(qiáng)對(duì)該方面的重視力度,為我國(guó)的禽流感病毒檢測(cè)工作提供一定的幫助。

    4.納米熒光檢測(cè)方法

    為了實(shí)現(xiàn)對(duì)禽流感病毒的有效檢測(cè),相關(guān)研究人員還采用納米熒光方法進(jìn)行了H9亞型AIV的檢測(cè)體系,結(jié)果表明該類(lèi)型的禽流感病毒在納米熒光檢測(cè)模式中能夠獲得良好的檢測(cè)效果。此外構(gòu)建完成的H9亞型納米熒光檢測(cè)具備有良好的檢測(cè)特異性,跟其他的亞型AIV病毒也無(wú)交叉性,檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確,可以在H9亞型禽流感病毒的檢測(cè)工作中得到有效應(yīng)用。

    二、分子生物學(xué)診斷方法

    1.多重PCR檢測(cè)法

    在結(jié)合GenBank上已經(jīng)登錄的AIV的M基因以及NDV的F基因所合成的2對(duì)引物,能夠采用優(yōu)化反應(yīng)條件的模式,來(lái)對(duì)這幾種禽流感病毒進(jìn)行PCR檢測(cè),并且就該檢測(cè)方法的敏感性、重復(fù)性以及特異性進(jìn)行了檢驗(yàn)。結(jié)果表明通過(guò)多重PCR檢測(cè)法的應(yīng)用,能夠?qū)@兩種病毒起到迅速準(zhǔn)確的鑒別效果,并能夠在臨床上完成這兩種病原的鑒別診斷工作,因此值得在臨床診斷上進(jìn)行應(yīng)用跟推廣。

    2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR

    該檢測(cè)方法是在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中,采用熒光物質(zhì)對(duì)每次的PCR循環(huán)產(chǎn)物量進(jìn)行測(cè)定,在此基礎(chǔ)上進(jìn)行禽流感病毒的檢測(cè)工作。通過(guò)對(duì)NCBL數(shù)據(jù)庫(kù)中的亞型AIV的HA基因序列進(jìn)行分析,在此基礎(chǔ)上進(jìn)行特異性引物的針對(duì)性設(shè)定,隨后構(gòu)建針對(duì)該禽流感病毒的熒光定量PCR檢測(cè)方法,能夠?qū)υ撉萘鞲胁《酒鸬搅己玫脑\斷效果。相關(guān)研究表明采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)法,還具備有非常高的檢測(cè)敏感度,對(duì)于各種AIV病毒的檢測(cè)也能夠提供良好的技術(shù)支持,還可以實(shí)現(xiàn)對(duì)外來(lái)AIV的有效監(jiān)測(cè),避免禽流感病毒所造成的各種影響。

    3.環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

    該技術(shù)在測(cè)定過(guò)程中不需要采用大型的儀器設(shè)備,并且具備有操作簡(jiǎn)單、成本低廉以及檢測(cè)速度快的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)。跟常規(guī)分子生物學(xué)方法進(jìn)行對(duì)比,該辦法具備有更高的靈敏性以及特異性,適合在基層的獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室以及養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)進(jìn)行應(yīng)用跟推廣。此外在該反應(yīng)體系中,還能夠采用優(yōu)選的凍干保護(hù)劑來(lái)進(jìn)行冷凍干燥處理,并且可以直接進(jìn)行試劑盒的制作,對(duì)后續(xù)的檢驗(yàn)工作提供良好的幫助。

    三、結(jié)語(yǔ)

    近年來(lái)我國(guó)的禽流感病毒檢測(cè)技術(shù)得到了迅速的發(fā)展,禽流感檢測(cè)手段也變得越來(lái)越多。但是不同檢測(cè)方法在應(yīng)用過(guò)程中還存在有一定的局限性,比如養(yǎng)殖場(chǎng)或者疫情爆發(fā)地就可以采用膠體金診斷試紙來(lái)進(jìn)行禽流感病毒的篩選工作,從而滿足禽流感病毒檢測(cè)工作的具體需求。因此在實(shí)際工作中還需要結(jié)合當(dāng)?shù)厍闆r,進(jìn)行檢測(cè)方法的合理選擇,促進(jìn)我國(guó)養(yǎng)殖行業(yè)得到更進(jìn)一步的發(fā)展。

    參考文獻(xiàn):

    [1]王璟.禽流感病毒檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J].畜禽業(yè),2018,29(11):19,21.

    [2]王瀟,曹琛福,黃超華, 等.禽流感病毒H7亞型RT-exoRPA檢測(cè)方法的建立[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2018,39(11):1-7.

    [3]張杰,任寶紅,婁亞坤, 等.禽流感病毒H7N9亞型三重?zé)晒釶CR檢測(cè)方法研究[J].畜禽業(yè),2018,29(9):1-2.

    作者簡(jiǎn)介:余新玲(1977-07-)女,河南確山人,本科,中級(jí)獸醫(yī)師。工作內(nèi)容及方向:動(dòng)物檢疫及動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督執(zhí)法。

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