血液核酸檢測與酶免檢測的誤區(qū)分析

鄧群華　黃友珍

【摘要】 目的：分析核酸檢測與酶聯(lián)免疫檢測在血液病毒檢驗中的應(yīng)用誤區(qū)，探討提高病毒檢測的準(zhǔn)確性的方法。方法：在血站血液樣本檢測中心選取600份血液樣本進行檢測，樣本來自2016年6月-2018年6月來血站獻血的志愿者，分別對600份血液樣本進行核酸檢測和酶免檢測，通過比較兩種檢測方式數(shù)據(jù)，分析不同方法檢測的利弊。結(jié)果：酶聯(lián)免疫法兩種試劑檢測對乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）和人類免疫缺陷病毒（HIV-1/2型）的檢測陽性率分別為：2.33%、1.67%、2.17%，在檢測結(jié)果上均存在一定程度的誤區(qū)，有一定比例的漏檢，其檢測合格樣本在經(jīng)過核酸檢測后又檢出HBV-DNA、HCV-RNA、HIV1/2的比率分別為0.51%、0.34%、0.68%。結(jié)論：核酸檢測和酶免檢測兩種方法各有優(yōu)缺點，在檢測準(zhǔn)確性上對比并無明顯差距，而核酸檢測的成本較高，故而通常情況下血站檢測以酶免檢測優(yōu)先，但在實際的病毒檢測應(yīng)用中，可根據(jù)兩種方法的各自的優(yōu)勢靈活選用。

【關(guān)鍵詞】 核酸檢測; 酶免檢測; 血液; 誤區(qū)

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.04.036 文獻標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2019）04-00-02

輸血能夠通過靜脈注入的方式為患者補充合適類型的血液，挽救患者的生命，自20世紀(jì)初期發(fā)現(xiàn)ABO血型規(guī)律后，成為一種常用的治療方法。輸血模式發(fā)展到現(xiàn)代，已經(jīng)形成了固定的規(guī)模，每個城市都設(shè)有血站，血液來源為無償獻血志愿者所提供，醫(yī)院根據(jù)實際需求與血站建立聯(lián)系[1]。然而，人體的血液中含有許多致病菌和病毒，其中以病毒的威脅性最高，常見的致病致死率較高的病毒如乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）和人類免疫缺陷病毒（HIV）等，在血液采集時需要進行檢測。為了減少因輸血而感染疾病的風(fēng)險，從根源上切斷輸血性病毒感染，多年來醫(yī)學(xué)界一直致力于血液病毒的檢測技術(shù)的完善，自第三代酶免檢測技術(shù)（ELISA）問世以來，為血液病毒的檢測帶來了較大的便利，同時，核酸檢測計數(shù)（NAT）亦可以通過對血液中DNA、RNA的擴增來檢測是否含有病毒核酸從而檢測到病毒[2-3]。在最近的臨床文獻報道中，有不少關(guān)于NAT和ELISA技術(shù)在血液檢測中的誤差報道，為了進一步探討兩種檢測方法存在的優(yōu)缺點，作者對600份血液進行了兩種方法的檢測對比，旨在明晰NAT檢測和ELISA檢測的誤區(qū)，優(yōu)化血液檢查方法。具體研究過程和結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

600分樣本來源于2016年6月-2018年6月來血站自愿獻血的志愿者，將研究的具體過程和內(nèi)容告知志愿者，經(jīng)過志愿者的知情同意后，納入本次研究，最終選擇參與此次研究的志愿者600例。采集志愿者血液，樣本來源的男女比例為347∶253，年齡在18～53歲，平均（38.63±4.29）歲。所有提供血液樣本的志愿者均為自愿獻血，且對本項研究表示支持。

1.2 方法

進行HBV、HCV和HIV-1/2的檢測。所有參與研究的血液樣本均抽取2份，分別保存至5 ml含有分離膠的真空采血抗凝管和7 ml真空負壓EDTA抗凝管中，做好樣本標(biāo)號，采集后放置于4 ℃冰箱暫時保存，集中進行分離檢測操作。

對7 ml真空管中的血液樣本進行酶聯(lián)免疫檢測，樣本需在采集后的24 h內(nèi)進行。酶免檢測系統(tǒng)采用澳斯邦生物工程有限公司生產(chǎn)的FAME 24/20全自動檢測系統(tǒng)，使用全自動樣品處理系統(tǒng)加樣后，進入酶免板自動分析系統(tǒng)檢測，出具結(jié)果報告。使用兩種不同廠家生產(chǎn)的酶免試劑盒對血液樣本進行抗HIV-1/2、

抗HCV和HBsAg的檢測，記錄檢測結(jié)果，兩種試劑盒檢測結(jié)果均為陽性時認(rèn)定為陽性，兩種結(jié)果均為陰性時認(rèn)定為陰性，當(dāng)兩種結(jié)果不一致時，進行二次檢測，二次檢測結(jié)果雙孔均為陰性時判定為陰性，若存在單孔或雙孔陽性的情況，則認(rèn)定為陽性。

經(jīng)過兩種不同試劑的酶免檢測，確定陰性樣本為合格樣本，再對這些樣本進行核酸檢測。取合格樣本編號的5 ml真空管中的血液樣本進行核酸檢測，樣本處理需在采集后4 h內(nèi)進行，將樣本從冰箱中取出，檢測系統(tǒng)采用羅氏Cobas s201核酸全自動檢測系統(tǒng)，檢測試劑為與Cobas s201適配的HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-1/2-RNA三聯(lián)核酸檢測試劑盒，應(yīng)用6人份標(biāo)本混樣模式，對血液樣本進行病毒定性檢測。注意加樣過程嚴(yán)格按照操作規(guī)則進行，避免檢測無效，影響判讀結(jié)果。記錄判讀結(jié)果，標(biāo)好血液樣本是否呈現(xiàn)出陽性，挑出表現(xiàn)為陽性的血液樣本，暫時保存至4 ℃冰箱，后續(xù)進行拆分實驗，針對陽性結(jié)果做進一步確定，拆分結(jié)果陽性則認(rèn)定為陽性，拆分結(jié)果為陰性則認(rèn)定為陰性。

1.3 觀察指標(biāo)

記錄兩種方法檢測的結(jié)果，對HBV、HCV、HIV-1/2三項檢測結(jié)果陽性、陰性數(shù)據(jù)進行整理，對比分析檢測結(jié)果，探討兩種檢測方法間的差異。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

將檢測數(shù)據(jù)錄入SPSS 19.0軟件，檢查無誤后進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以（x±s）表示，計數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

對兩種方法檢測HBV、HCV和HIV-1/2的結(jié)果進行分析：兩種試劑酶免檢測血液樣本HBsAg的陽性率為2.33%（14/600），對陰性樣本進行核酸定性檢測，HBV-DNA的陽性率為0.51%（3/586）。酶聯(lián)免疫檢測抗HCV陽性率為1.67%（10/600），核酸檢測陰性樣本中HCV-RNA的陽性率為0.34%（2/590）。酶聯(lián)免疫檢測抗HIV-1/2的陽性率為2.17%（13/600），核酸檢測酶免合格樣本中HIV病毒的陽性率為0.68%（4/587）。酶免檢測對三種病毒檢出陽性率兩兩比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

3 討論

HBV、HCV和HIV是嚴(yán)重威脅人類健康的致病原，一旦感染，個人和家庭的經(jīng)濟和生命安全造成極大的傷害，亦是社會公共衛(wèi)生事業(yè)的重點防治問題[4-5]。血液傳播是病毒感染的三大途徑之一，也是最主要的傳播途徑，多年以來，傳染性疾病的輸血傳播一直是困擾公共衛(wèi)生事業(yè)的難題。由于病毒由感染到檢測存在一定的“窗口期”，在這一階段，由于血液中的病毒含量低，不足以被醫(yī)學(xué)技術(shù)手段檢測出來，因而處在這一階段的志愿者所提供的血液成為感染病毒的一大因素。根據(jù)美國衛(wèi)生部門的調(diào)查，有75%以上的美國丙型肝炎病毒感染者和90%以上的乙型肝炎病毒和人類免疫缺陷病毒感染者均是因窗口期攜帶者的無償獻血所感染[6]。核酸檢測技術(shù)和酶免檢測是兩種常用的抗原、抗體篩查方法，通過對獻血者的血液篩查，可大大降低輸血的風(fēng)險。NAT是利用PCR擴增的原理[7]，將血液樣本中的病毒核酸進行擴增，使其含量增加到可以檢測出的水平的方法，若血液中存在未知病毒，則可通過核酸檢測技術(shù)檢測出病毒的存在，應(yīng)用以來，由于其靈敏度較高，特異性好，在臨床廣為應(yīng)用，但NAT技術(shù)對檢測人員的操作水平和血液樣本要求較高，出現(xiàn)假陽性的比例較大，而ELISA檢測則是通過抗體-抗原的特異性反應(yīng)，檢出制定病毒的存在，但ELISA檢測抗體有一定的濃度要求[8]，病毒進入人體后機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，需經(jīng)歷一段時間的病毒復(fù)制和抗體的產(chǎn)生才能被檢出，因此，該方法的檢測“窗口期”相對長一些[9]。在此次實驗研究的數(shù)據(jù)中可以看出，在酶免檢測的結(jié)果中存在一定程度的檢查誤區(qū)，考慮是由于病毒感染后存在一段時間的窗口期，病毒復(fù)制較為活躍但抗體量不足以被酶免吸附檢出。但三種病毒檢出陽性率兩兩比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），說明酶免檢測的誤漏和病毒種類無關(guān)。在血液檢測的實際應(yīng)用中，不管是ELISA方法還是NAT技術(shù)均會存在一定的誤漏，分析其原因，NAT核酸檢查雖然能夠縮短檢測“窗口期”，但由于其檢測原理可能存在一定的假陽性概率，而ELISA檢測雖然準(zhǔn)確性較高，但因檢測“窗口期”較長，可能存在被感染時間尚短無法檢出的情況，因而核酸檢測的病毒陽性例數(shù)相對酶免檢測要高一些。

根據(jù)以上的分析，核酸檢測雖近年來因可縮短窗口期時間逐漸被醫(yī)院和體檢人員所接受，這也證實了核酸檢測技術(shù)的必要性，但因其操作的復(fù)雜性和技術(shù)性，在基層檢測機構(gòu)還未完全普及，因而不能完全替代酶免檢測?，F(xiàn)階段我國血站的檢測流程主要為首先使用兩種以上的酶免試劑對血液樣本進行酶免檢測，確定為合格的樣本再進行一種試劑的核酸檢測，這種方法不僅能夠避免因試劑間差異和靈敏度不同造成的誤漏，而且能夠檢測出因處于窗口期病毒抗體量少造成的漏檢問題，同時，核酸檢測的成本較高，先使用酶免檢測進行篩查也能夠一定程度上節(jié)約試劑成本。還要注意的是，檢測血液中病毒核酸時，一定要將血液第二次酶免檢測保留，確認(rèn)檢測結(jié)果。另一方面，檢測人員應(yīng)加強對酶免檢測的重視，加強檢測技術(shù)和知識的學(xué)習(xí)與培訓(xùn)，通過豐富的檢測經(jīng)驗合理利用兩種檢測技術(shù)，不斷提高血液檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，確保血液供給的安全。

綜上所述，兩種檢測方法各有優(yōu)缺點，酶免檢測由于對窗口期階段的抗原-抗體反應(yīng)靈敏度較差，在檢測時存在漏檢誤區(qū)，而核酸檢測因其PCR原理具有較高的靈敏度，但也容易出現(xiàn)假陽性，且核酸檢測的試劑價格相對較高，因此，在實際的血站樣本檢測中，實施先酶免檢測定性，再對合格樣本進行核酸檢測定性的樣本檢測模式較為合理，同時應(yīng)提高操作人員的技術(shù)水平和理論知識，提高檢測準(zhǔn)確度，在實際的病毒檢測應(yīng)用中，可根據(jù)兩種方法的各自優(yōu)勢靈活選用。

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