馬齒莧提取物的制備及質(zhì)量研究

楊春燕，祝曉麗，吳小淵，劉 萍，楊秋男

(安徽新華學(xué)院藥學(xué)院，安徽 合肥 230088)

馬齒莧(Portulaca olerace)又名馬齒草，馬莧，馬齒菜，馬齒龍芽等，為馬齒莧科一年生草本植物，主要成分為生物堿類、黃酮類、多糖類、三萜醇類、有機酸類、兒茶酚胺類，維生素類、微量元素及無機鹽類等，具有清熱解毒、散血消腫，抗菌消炎，降血糖、降血脂、降血壓，抗腫瘤抗氧化，預(yù)防冠心病等多種功效。

國內(nèi)外很多相關(guān)學(xué)者對馬齒莧都有很多的研究，主要從馬齒莧的幾個方面對其進(jìn)行研究，包括化學(xué)成分、藥理作用、開發(fā)以及利用和臨床應(yīng)用。葉梅榮[1]等人的實驗研究中，目前馬齒莧在國內(nèi)的食用仍處于起步階段，大多數(shù)仍是以野生植物為主要資源，栽培利用比較少。因此可以看出國內(nèi)大多數(shù)人對于馬齒莧的了解還是很少，因此我們要充分了解馬齒莧，減少資源浪費尤為重要。從馮彥[2]的論述中，馬齒莧具有廣泛的抗菌作用；預(yù)防和控制高脂血癥和其他心血管疾??；抗擊和抵御細(xì)胞組織衰老；保護人體血管。馬齒莧不僅營養(yǎng)豐富，而且藥用價值頗高。因此，馬齒莧具有很好的發(fā)展前景。從唐紅楓[3]的研究來看，馬齒莧在消化系統(tǒng)疾病中、在心血管疾病中都有很大的臨床應(yīng)用價值。但是，目前有實驗研究得出，馬齒莧的栽培和馴化技術(shù)尚不成熟。近幾年，有部分研究學(xué)者對馬齒莧中的有效成分采用不同方法進(jìn)行提取，郝紅英[4]等人采用乙醇-硫酸銨雙水相萃取馬齒莧總黃酮，總黃酮提取率為7.23。陳國妮[5]分別采用了有機溶劑提取法、超聲波法、微波法、酶解法對馬齒莧中黃酮進(jìn)行提取，效果顯著，大大提高了馬齒莧中黃酮類化合物的提取率。鄭智音[6]等人對馬齒莧中多糖、生物堿和多酚類組分的制備研究中，用樹脂富集馬齒莧多糖、生物堿和多酚，優(yōu)化分離純化工藝。并采用苯酚-硫酸法測定馬齒莧中多糖的含量，采用高效液相色譜法測定生物堿和多酚類物質(zhì)的含量。結(jié)果3類組分均有明顯的降血糖活性，并對三個組成部分整體給予降血糖效果更佳，扈本荃等人[7]采用高效液相色譜法測定馬齒莧中3種有機酸(檸檬酸、L-蘋果酸和琥珀酸)的含量，發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)馬齒莧的質(zhì)量存在差異，有機酸的含量也不同。對馬齒莧提取物的制備以及質(zhì)量研究中，必須對馬齒莧中的化學(xué)成分進(jìn)行深入研究?？赚揫8]歸納總結(jié)出馬齒莧的相關(guān)化學(xué)成分，它主要包括芬酸類、類黃酮、生物堿、蒽醌等。種類多，含量也不相同。就目前查閱到的文獻(xiàn)來看，對于馬齒莧的研究不全面，對提取物的制備以及質(zhì)量的研究不夠深入。因此，本實驗以馬齒莧為研究對象，主要用超聲波提取法制備馬齒莧中重要的成分以及對提取出的成分進(jìn)行質(zhì)量研究，為今后的科研實驗提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

立式電熱鼓風(fēng)干燥箱、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、超聲波清洗器、多功能粉碎機、真空泵抽濾機。

1.2 試劑

馬齒莧、無水乙醇、氨水溶液、亞硝酸鈉溶液、硝酸鋁溶液、氫氧化鈉溶液。

2 實驗方法

2.1 馬齒莧黃酮類化合物的提取

稱取0.5g粉末狀的馬齒莧于100mL的錐形瓶中，用20mL的移液管加入15mL95%乙醇，放在室溫的環(huán)境下浸泡，并輕輕地?fù)u勻。將抽濾后的馬齒莧乙醇提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮操作，得到馬齒莧黃銅的濃縮液，最后用保鮮膜進(jìn)行密封保存。

2.2 黃酮類化合物的鑒定

用玻璃棒蘸取少量馬齒莧乙醇提取液于濾紙上，靠近裝有氨水的瓶口中，顯淡淡的黃色，移開濾紙后，3min后，淡黃色逐漸消失，說明存在黃酮。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

用電子天平稱取10mg的標(biāo)準(zhǔn)品蘆丁，放入10mL的容量瓶中，用70%乙醇溶液定容，配置成標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3.1 蘆丁對照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線

用1mL移液管移取1.0mL的提取液于容量瓶(10mL)中。首先加入0.4mL 5%的亞硝酸鈉溶液，靜置6min；然后加入等量的10%硝酸鋁溶液，同樣靜置6min；最后加入上述溶液等量的氫氧化鈉溶液；加入適量的蒸餾水至刻度處，緩慢搖勻，靜置20min左右。把不含黃酮的溶液作為對照溶液，分別依次加入等量的樣品溶液，設(shè)置波長為510nm，測定其吸光度A。用表格繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時，把吸光度(A)作為縱坐標(biāo)y，把蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度(C)橫坐標(biāo)x。如圖1。

圖1 蘆丁對照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線

實驗結(jié)果得出蘆丁的濃度與吸光度的關(guān)系如下公式：C=0.0930A+0.0018，相關(guān)系數(shù)R2=0.8875。

2.3.2 黃酮類化合物提取率的計算

(Y:黃銅的提取率mg/g；C：樣品溶液的質(zhì)量濃度g/L；V：樣品溶液的體積mL；m：樣品的質(zhì)量g)計算黃酮類化合物的量。

2.4 超聲波提取馬齒莧中的黃酮類化合物

準(zhǔn)備三個規(guī)格一致的100mL的錐形瓶，分別標(biāo)記a、b、c，用電子天平精確稱量1.0g粉末狀干燥的馬齒莧分別加入到標(biāo)記好的錐形瓶中，分別在錐形瓶中分別加入75mL、95mL、115mL且不同濃度的乙醇溶液中，分別為70%、75%和80%的乙醇溶液，放在室溫的環(huán)境中浸泡，并每隔幾分鐘進(jìn)行搖勻，a錐形瓶放置15min；b錐形瓶放置30min；c錐形瓶放置45min，浸泡并且緩慢搖勻后，用真空泵進(jìn)行抽濾，抽濾完以后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進(jìn)行濃縮，并將旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器的溫度設(shè)置為70℃，最后得到黃酮類化合物的濃縮液，放入干凈的棕色收集瓶中進(jìn)行保存，并且用保鮮膜進(jìn)行密封，如表1。

表1 馬齒莧提取黃酮類物質(zhì)的因素水平表

2.5 實驗結(jié)果與討論

表2 正交實驗設(shè)計方案以及實驗結(jié)果

由表2分析結(jié)果看出，四個因素A、B、C、D中D因素具有顯著的差異性，因此從上表正交實驗結(jié)果分析得出，各因素對超聲波法提取馬齒莧中黃酮化合物的提取率影響大小為：D(料液比)>C(超聲溫度)>A(超聲功率)=B(超聲時間)。因此最合適的方案為A3B1C3D1,即料液比為1∶ 20，超聲時間為30min，提取溫度為60℃，超聲功率為250W，從馬齒莧中提取出的黃酮類化合物的提取率最高，為6.78%。