• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    微小亞歷山大藻amtk-4共附生菌群多樣性及其產(chǎn)毒新種Z1-D的sxtA1基因進(jìn)化研究

    2019-07-03 07:31:06張若男田曉清陸亞男樊成奇張曉玲
    海洋漁業(yè) 2019年3期
    關(guān)鍵詞:新種甲藻亞歷山大

    張若男,田曉清,陸亞男,樊成奇,張 靜,楊 橋,張曉玲

    (1.哈爾濱商業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與環(huán)境科學(xué)研究中心,哈爾濱 150076;2.浙江海洋大學(xué)海洋科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,浙江舟山 316022;3.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所,上海 200090;4.舟山出入境檢驗(yàn)檢疫局綜合技術(shù)服務(wù)中心,浙江舟山 316021)

    赤潮(harmful algal blooms,HABs)是全球性海洋生態(tài)災(zāi)害及重大環(huán)境問(wèn)題[1],其可引發(fā)麻痹性貝類(lèi)毒素(paralytic shellfish poisoning,PSP)等多種生物毒素并通過(guò)食物鏈傳遞而嚴(yán)重危害人體生命健康[2]。現(xiàn)有研究表明,部分海洋甲藻、淡水藍(lán)藻及海洋細(xì)菌均可產(chǎn)生PSP,但其來(lái)源問(wèn)題尚 無(wú) 定 論[3]。藻 菌 關(guān) 系 (algae-bacterial interaction)是揭示PSP產(chǎn)生機(jī)制的關(guān)鍵,而藻際(phycosphere)及藻內(nèi)定植著獨(dú)特的細(xì)菌群落并與藻間形成了復(fù)雜的微生態(tài)關(guān)系,藻共附生菌群多樣性信息的揭示及其可培養(yǎng)菌株的獲得是解析藻菌關(guān)系的首要前提[4]。微小亞歷山大藻(Alexandrium minutum)是一種全球廣布性的代表性赤潮原因藻[5],亦是產(chǎn)生石房蛤毒素(saxitoxin,STX)等多種PSP的主要海洋甲藻,但目前對(duì)其共附生菌群尚缺乏系統(tǒng)性研究[6-7]。本文通過(guò)高通量測(cè)序首次解析了產(chǎn)PSP微小亞歷山大藻amtk-4共附生菌群的物種種類(lèi)及其相對(duì)豐度,比較了不同生長(zhǎng)時(shí)期amtk-4的可培養(yǎng)細(xì)菌種類(lèi)及數(shù)量差異,對(duì)其中獲得的產(chǎn)毒新種Z1-D的PSP合成基因sxtA1進(jìn)行了基因進(jìn)化分析,以期為后續(xù)順利開(kāi)展藻菌關(guān)系研究、闡析PSP來(lái)源奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 藻培養(yǎng)

    微小亞歷山大藻amtk-4由臺(tái)灣大學(xué)周宏農(nóng)教授提供,分離自中國(guó)臺(tái)灣東南海域[8]。使用f/2培養(yǎng)基培養(yǎng),光照強(qiáng)度:4 500~5 000 lx,光照周期:12L/12D,培養(yǎng)溫度25℃。待藻細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,取50 mL藻液于6 000 r·min-1離心收集藻細(xì)胞,使用50 mL PBS緩沖液(pH 7.2)洗滌細(xì)胞沉淀3次后備用[9-10]。

    1.2 基因組DNA抽提及PCR擴(kuò)增

    使用 Stool DNA Kit試劑盒(美國(guó)OMEGA)提取樣品總基因組DNA,具體操作參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行[11]。對(duì)提取到的樣品基因組DNA用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。PCR擴(kuò)增:針對(duì)細(xì)菌16S rRNA基因V3-V4區(qū)設(shè)計(jì)含barcode特異性引物338F/806R,引物序列分別為338F:5′ACTCCTACGGGAGGCAGCAG3′,806R:5′GGACTACHVGGGTWTCTAAT3′。PCR擴(kuò)增反應(yīng)參照文獻(xiàn)[9-10]進(jìn)行,將所獲得的PCR產(chǎn)物通過(guò)2%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè),使用AxyPrepDNA凝膠回收試劑盒(AXYGEN公司)切膠回收PCR產(chǎn)物。

    1.3 Illumina MiSeq高通量測(cè)序

    將回收后的PCR產(chǎn)物送樣至上海美吉生物,進(jìn)行Illumina Miseq文庫(kù)構(gòu)建及高通量測(cè)序。測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量控制參照文獻(xiàn)[10]進(jìn)行:根據(jù)PE讀長(zhǎng)之間相互重疊關(guān)系進(jìn)行序列拼接,同時(shí)對(duì)讀長(zhǎng)質(zhì)量和拼接效果進(jìn)行質(zhì)控分析。過(guò)濾讀長(zhǎng)尾端質(zhì)量值小于20的堿基;最小重疊長(zhǎng)度10 bp;拼接序列重疊區(qū)允許最大錯(cuò)配比率0.2;根據(jù)序列兩端DNA條形碼及引物進(jìn)行樣品區(qū)分;軟件:FLASH及Trimmomatic。

    1.4 測(cè)序數(shù)據(jù)分析

    對(duì)獲得的非重復(fù)序列進(jìn)行操作分類(lèi)學(xué)單元(operational taxonomic units,OTU)聚類(lèi)分析以獲得OTU代表序列,從中選取與代表序列相似度大于97%的序列產(chǎn)生OTU數(shù)據(jù)表。通過(guò)貝葉斯分類(lèi)算法(ribosomal database project,RDP)對(duì) OTU數(shù)據(jù)表進(jìn)行分類(lèi)學(xué)分析,分別在不同分類(lèi)水平上進(jìn)行樣本群落組成統(tǒng)計(jì)分析[9-11]。選取 Silva、RDP、Greengene為細(xì)菌 16S比對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù),使用Qiime平臺(tái)與RDPClassifier分別作為計(jì)算軟件及算法,設(shè)定0.7為置信度閾值。群落豐富度指數(shù)(community richness)采用 Chao指數(shù)和 ACE指數(shù);群落多樣性指數(shù)(community diversity)采用Shannon指數(shù)與Simpson指數(shù)。利用不同測(cè)序深度時(shí)微生物多樣性指數(shù)構(gòu)建測(cè)序樣品的稀釋曲線(rarefaction curve)[12]。

    1.5 Amtk-4可培養(yǎng)菌株分離及分子鑒定

    取1 mL各個(gè)生長(zhǎng)周期amtk-4藻培養(yǎng)液,6 000 r·min-1離心收集藻細(xì)胞,細(xì)胞沉淀用無(wú)菌海水重懸,置于冰浴中通過(guò)超聲波儀(Fisher Scientific 50,Thermo Fisher)60%功率超聲 30 s,用無(wú)菌海水依次進(jìn)行10倍梯度稀釋?zhuān)?00μL稀釋液均勻涂布于不同選擇性培養(yǎng)基平板上,細(xì)菌選擇性分離培養(yǎng)基包括:2216E、ISP 4號(hào)培養(yǎng)基、M2甘油培養(yǎng)基及HV培養(yǎng)基,置于15~28℃培養(yǎng)5~10 d。待生長(zhǎng)出細(xì)菌菌落后,挑取單菌落進(jìn)行劃線分離與純化。細(xì)菌形態(tài)的透射電鏡觀察參考文獻(xiàn)[9-11]進(jìn)行。

    將5 mL對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)菌培養(yǎng)物按照DNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟[9]進(jìn)行細(xì)菌DNA的提取。使用細(xì)菌通用引物27F及1492R,PCR擴(kuò)增參照文獻(xiàn)[9-11]進(jìn)行。PCR產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)[10]。PCR產(chǎn)物送樣至上海美吉進(jìn)行測(cè)序,將獲得的16S rRNA基因序列通過(guò)Ezbiocloud在線數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行細(xì)菌模式種16SrRNA基因序列同源性比對(duì)[9-10]。

    1.6 菌株sxtA1基因進(jìn)化分析

    利用Glimmer 3.02軟件對(duì)Z1-D基因組數(shù)據(jù)中的功能基因進(jìn)行預(yù)測(cè)[13],獲得預(yù)測(cè)基因注釋信息。利用NCBI-Blast程序?qū)δ康幕蛐蛄羞M(jìn)行同源性搜索及比對(duì),利用MEGA7.1軟件構(gòu)建其系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)[9-11]。

    1.7 PSP毒素提取及LC-MS分析

    參照文獻(xiàn)[9-11],取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期發(fā)酵液1 L,6 000 r·min-1離心5 min獲得細(xì)胞,獲得的細(xì)胞沉淀放入-80℃冰箱凍融3次,用pH2.0的80%乙醇溶液超聲提取3次,合并提取液,使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干后,用30%甲酸銨溶液和70%酸化乙腈溶解,參照文獻(xiàn)[7]進(jìn)行PSP的LC-MS分析。分析條件:色譜分析柱:TSK-Gel Amide-80,2.0 mm×250 mm,5μm粒徑;流動(dòng)相 A:甲酸銨緩沖溶液,B:酸化乙腈,梯度洗脫;流速:0.25 mL·min-1;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:20μL;質(zhì)譜條件:離子源:電噴霧離子源;掃描方式:正離子掃描;檢測(cè)方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè);噴霧電壓:4 500 V;離子傳輸毛細(xì)管溫度:300℃;錐孔電壓:-10 V;霧化氣流速:11.7 L·min-1;輔助氣流速:1.7 L·min-1;碰撞氣壓力:1.5 m Torr。PSP標(biāo)準(zhǔn)品石房蛤毒素(STX)購(gòu)自加拿大海洋生物研究所。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 Amtk-4共附生菌多樣性分析

    微小亞歷山大藻amtk-4共附生菌多樣性高通量測(cè)序質(zhì)控結(jié)果如表1所示。由樣品多樣性指數(shù)包括ACE指數(shù)、Chao指數(shù)、Shannon指數(shù)及Simpson指數(shù)數(shù)據(jù)可見(jiàn),amtk-4測(cè)序樣品包含豐富的共附生菌多樣性。由樣品稀釋曲線(圖1-a)及Shannon-Wiener曲線(圖1-b)可見(jiàn),隨測(cè)序數(shù)據(jù)量的增加,曲線斜率逐漸降低并趨向平坦,表明測(cè)序數(shù)據(jù)量合理,樣品測(cè)序質(zhì)量較好。

    高通量測(cè)序結(jié)果表明,微小亞歷山大藻amtk-4共附生菌包括85個(gè)OTU,其中包括10個(gè)門(mén)、20個(gè)綱、40個(gè)目、59個(gè)科及87個(gè)屬?;贠TU的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)見(jiàn)圖2。在門(mén)水平包括變形菌 (60.0%)、硬壁菌 (14.4%)、擬桿菌(11.1%)、浮霉?fàn)罹?.4%)、放線菌(4.4%)、綠彎 菌 (2.2%)、芽 單 胞 菌 (1.1%)與Verrucomicrobia SHA-109(1.1%)。綱水平以 α-變形菌(35.6%)、γ-變形菌(22.2%)和芽孢桿菌(13.3%)占優(yōu)勢(shì),而 β-變形菌(4.6%)、纖維粘網(wǎng)菌(4.4%)、放線菌(4.4%)、Flavobacteriia(3.3%)及浮霉?fàn)罹?.2%)所占比例較低。目水平以紅細(xì)菌(11.1%)、根瘤菌(8.7%)、芽孢桿菌(8.7%)、紅螺菌(7.8%)及交替單胞菌(7.8%)占優(yōu)勢(shì)??扑揭约t桿菌(10.9%)、紅螺菌(7.6%)及交替單胞菌(7.6%)占優(yōu)勢(shì)。

    其中優(yōu)勢(shì)屬(>5%)6個(gè),包括Phycisphaeraceae科未鑒定屬(11.8%)、Muricauda屬(10.3%)、腐螺旋菌科未鑒定屬(9.1%)、Hyphomonadaceae科未鑒定屬(8.9%)、Haliea屬(5.7%)及紅桿菌科未鑒定屬(5.1%)(圖3)。amtk-4來(lái)源共附生菌群中的未鑒定屬比例高達(dá)53.4%,表明微小亞歷山大藻amtk-4具有發(fā)現(xiàn)藻際生境微生物新種(屬)的巨大潛力,非常值得對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步深入發(fā)掘研究。

    表1 測(cè)序樣品的多樣性指數(shù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)表Tab.1 Alpha-diversity data of high-throughput sequencing samples

    圖1 測(cè)序樣品稀釋曲線(a)與Shannon-Wiener曲線(b)圖Fig.1 Rarefaction(a)and Shannon-Wiener curves(b)of the sample

    圖2 基于OTU的微小亞歷山大藻amtk-4共附生菌群系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)Fig.2 Phylogenetic tree of the bacterial community associated with A.minutum amtk-4 based on OTU

    圖3 微小亞歷山大藻amtk-4共附生菌群多樣性的屬水平分布圖Fig.3 Microbial distribution at genus level of the associated bacterial community of A.minutum amtk-4

    2.2 amtk-4可培養(yǎng)菌株16S r RNA系統(tǒng)發(fā)育分析

    從微小亞歷山大藻amtk-4不同生長(zhǎng)期所分離的細(xì)菌數(shù)量比較數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn),藻生長(zhǎng)延緩期所獲得細(xì)菌種類(lèi)及數(shù)量較少;進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后,細(xì)菌數(shù)量及種類(lèi)增加;穩(wěn)定期細(xì)菌種類(lèi)最多;進(jìn)入衰亡期后,細(xì)菌數(shù)量及種類(lèi)均減少。對(duì)14株可培養(yǎng)細(xì)菌經(jīng)排重后,發(fā)現(xiàn)包括5株細(xì)菌,分別為 Thalassobaculum sp.、Muricauda sp.、Mesorhizobium sp.、亞硫酸桿菌(Sulfitobacter)及Microbacterium sp.,其中菌株Z1-D及Z1-4的16S rRNA基因序列與已有模式種的同源性最高值分別為97.8%及97.3%,其16S rRNA基因鄰接法(neighbor-joining)系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)見(jiàn)圖4,將其分別鑒定為亞硫酸桿菌屬及Mesorhizobium屬新種。對(duì)Z1-D菌株的發(fā)酵代謝產(chǎn)物進(jìn)行了LC-MS分析(圖5),發(fā)現(xiàn)其可產(chǎn)生約 12.6 ng·mL-1石房蛤毒素(STX)產(chǎn)物。

    2.3 sxtA1基因進(jìn)化分析

    SxtA是催化STX生物合成的關(guān)鍵起始基因,包括4個(gè)結(jié)構(gòu)域(sxtAZ1-4,圖6),其中 sxtA1為腺苷甲硫氨酸依賴(lài)性甲基轉(zhuǎn)移酶(Methyltransferase,MTF)[5]。通過(guò) GenBank Blast分析對(duì)Z1-D菌株的全基因組序列進(jìn)行了比對(duì)。結(jié)果表明,該菌株基因組中含有sxtA1同源基因片段(orf-01498)并構(gòu)建了其sxtA1基因系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)(圖6)。表明orf-01498基因片段與水華束絲藻屬(Aphanizomenon)、擬柱胞藻屬(Cylindrospermopsis)等藍(lán)藻進(jìn)化距離較近。暗示sxtA1基因在微小亞歷山大藻amtk-4共附生菌株Z1-D及部分藍(lán)藻之間可能存在著共同進(jìn)化[13-14]。

    表2 不同生長(zhǎng)期微小亞歷山大藻amtk-4所獲得細(xì)菌數(shù)量比較Tab.2 Comparison of number of bacterial strains isolated from A.minutum amtk-4 at different growth phases

    圖4 微小亞歷山大藻amtk-4來(lái)源可培養(yǎng)細(xì)菌的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)Fig.4 Phylogenetic tree of 16S r RNA gene sequences of cultivable bacterial strains from A.minutum amtk-4

    圖5 細(xì)菌新種Z1-D發(fā)酵產(chǎn)PSP的LC-MS分析圖譜Fig.5 LC-MSanalysis of PSP toxins from fermentation products of the novel species strain,Z1-D isolated from A.minutum amtk-4

    圖6 新種Z1-D的sxtA1基因系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)Fig.6 Phylogenetic tree of sxtA1 genes of strain Z1-D

    3 討論

    微小亞歷山大藻及鏈狀亞歷山大藻是亞歷山大藻屬兩種主要產(chǎn)PSP赤潮甲藻。前期對(duì)東海鏈狀亞歷山大藻LZ09共附生菌多樣性進(jìn)行了高通量測(cè)序分析[15]。兩種亞歷山大藻共附生菌多樣性差異比較結(jié)果顯示,微小亞歷山大藻amtk-4及鏈狀亞歷山大藻LZ09共附生菌群中變形菌比例均超過(guò)50%,為兩種藻的共附生菌絕對(duì)優(yōu)勢(shì)門(mén),其中α-變形菌綱所占比例分別為35.6%和21.4%。兩種藻細(xì)菌群落多樣性在科及屬水平上差異較大。紅桿菌(Rhodobacteraceae)、紅螺菌 (Rhodospirillaceae)及 Alteromonadaceae在amtk-4中為優(yōu)勢(shì)科,而在LZ09中比例均低于10%。amtk-4共附生菌包括87個(gè)屬,其中以Phycisphaeraceae科未鑒定屬、Muricauda屬、腐螺旋菌科未鑒定屬、Hyphomonadaceae科未鑒定屬、Haliea屬及紅細(xì)菌科未鑒定屬為優(yōu)勢(shì)屬。而amtk-4共附生菌包括 34個(gè)屬,其中Cryomorphaceae科和Cyanobacteria科未鑒定屬、糖螺菌屬、紅細(xì)菌科未鑒定屬及Maricaulis屬為優(yōu)勢(shì)屬。兩株藻共附生菌群的共有優(yōu)勢(shì)屬為紅細(xì)菌科未知屬。本研究取得的數(shù)據(jù)可為后續(xù)開(kāi)展amtk-4可培養(yǎng)共附生菌株分離策略的優(yōu)化提供科學(xué)參考。

    值得關(guān)注的是,微小亞歷山大藻amtk-4及鏈狀亞歷山大藻LZ09中未鑒定屬細(xì)菌比例均高于50%,表明這兩株產(chǎn)PSP亞歷山大藻蘊(yùn)含從中發(fā)現(xiàn)功能未知微生物新種(屬)的巨大潛力。本文從微小亞歷山大藻amtk-4分離獲得的2株細(xì)菌Z1-D及Z1-4經(jīng)鑒定其分別為亞硫酸桿菌屬(Sulfitobacter)及Mesorhizobium屬新種。亞硫酸桿菌屬于變形菌門(mén)紅桿菌科(Rhodobacteraceae),現(xiàn)包括18個(gè)模式種,在海洋物質(zhì)循環(huán)中扮演重要角色。其分離來(lái)源多樣,包括海洋動(dòng)植物如海星(Stellaster equestris)、海草(Zostera marina)、海水及有毒海洋硅藻[16],而在海洋甲藻中尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。Mesorhizobium屬于1997年首次報(bào)道[17],為專(zhuān)性共生菌,通常在豆科植物根部形成固氮固結(jié)物。該屬是繼根瘤菌之后的第二大類(lèi)植物根瘤共生菌,目前包括39個(gè)模式種,但尚未在海洋甲藻中得到報(bào)道。本文所獲的新的研究結(jié)果表明,微小亞歷山大藻amtk-4蘊(yùn)含獨(dú)特的共生菌新物種資源,非常值得對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步深入挖掘研究。

    高通量測(cè)序結(jié)果揭示了微小亞歷山大藻amtk-4具有豐富共附生菌物種多樣性信息,但通過(guò)純培養(yǎng)(culture-dependent)分離目前僅獲得數(shù)株可培養(yǎng)細(xì)菌菌株,遠(yuǎn)未體現(xiàn)出其豐富物種多樣性原貌。究其原因,絕大多數(shù)海洋微生物種群為活的不可培養(yǎng)狀態(tài)(viable but none-cultivable,VBNC),而微生物可培養(yǎng)性 (microbial cultivability)是海洋微生物研究的一個(gè)關(guān)鍵瓶頸[18]。因此,若要最大限度還原海洋復(fù)雜生態(tài)體系細(xì)菌群落生態(tài)學(xué)功能原貌,必須組合利用宏基因組學(xué)、新興單細(xì)胞基因組學(xué)(single cell genomics,SCG)等免培養(yǎng)(culture-independent)研究技術(shù)[19],以突破傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)方法的局限,為解析復(fù)雜海洋特殊生境微生物菌群多樣性及其生態(tài)學(xué)功能提供研究新思路[20-21]。

    海洋甲藻包括亞歷山大藻屬(Alexandrium)、裸甲藻屬(Gymnodinium)及 Pyrodinium屬等;淡水浮絲藻屬(Planktothrix)及藍(lán)藻(cyanobacteria)包 括 Cylindrospermopsis raciborskii、Anabaena circinalis、Aphanizomenon、Raphidiopsis brookii及Lyngbya wollei等均可產(chǎn)生PSP[22-24]。除上述產(chǎn)毒藻以外,存在于自然海水、藻際(phycosphere)及藻內(nèi)細(xì)菌包括如弧菌(Vibrio)、對(duì)極鞭毛菌(Alteromonas)、毗鄰單胞菌(Plesiomonas)、假單胞菌(Pseudomonas)、變形菌(Proteus)、莫拉氏菌(Moraxella)等,同樣可產(chǎn)生 PSP[25]。甲藻、藍(lán)藻及細(xì)菌產(chǎn)PSP的跨界分布(cross-kingdom)是否蘊(yùn)含某種內(nèi)在規(guī)律?而藻共附生菌群在PSP產(chǎn)生機(jī)制中究竟扮演何種角色?具有哪些潛在應(yīng)用價(jià)值?這些問(wèn)題的解答目前均缺乏足夠研究數(shù)據(jù)積累,亟待系統(tǒng)發(fā)掘。藻內(nèi)共生菌在長(zhǎng)期自然選擇進(jìn)化過(guò)程中,與甲藻形成了復(fù)雜的生態(tài)體系,構(gòu)建了復(fù)雜的化學(xué)防御系統(tǒng)[25-26]。藻共附生菌群與甲藻之間既存在多種代謝產(chǎn)物(化學(xué)防御物質(zhì)、群體感應(yīng)物質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、生長(zhǎng)因子等)相互交流,亦有重要遺傳物質(zhì)(包括PSP合成基因)在不同物種及種屬間的基因水平轉(zhuǎn)移與融合[26]。本研究發(fā)現(xiàn),分離自微小亞歷山大藻amtk-4可產(chǎn)生STX細(xì)菌新種Z1-D的sxtA1基因與產(chǎn)毒水華束絲藻屬、擬柱胞藻屬等藍(lán)藻聚類(lèi),推測(cè)其可能存在著共同進(jìn)化[22-26]。

    猜你喜歡
    新種甲藻亞歷山大
    亞歷山大·弗萊明:青霉素,那是我偶然發(fā)現(xiàn)的
    甲藻甾醇在海洋和湖泊古環(huán)境重建中的應(yīng)用
    多個(gè)蘭科植物新種被發(fā)現(xiàn) 等
    一株分離自四川溫泉的嗜熱鞘絲藻新種鑒定
    我國(guó)科學(xué)家發(fā)現(xiàn)蕎麥屬新種
    西藏發(fā)現(xiàn)植物新種
    亞歷山大的消暑之物
    亞歷山大訴耶魯大學(xué):美國(guó)依據(jù)第九條提起的校園性騷擾第一案
    養(yǎng)只恐龍當(dāng)寵物
    學(xué)與玩(2019年8期)2019-10-29 03:32:16
    學(xué)齡前期兒童患“亞歷山大Ⅱ型”1例
    国产黄色免费在线视频| 国产在线男女| 日韩成人伦理影院| 91久久精品电影网| 精品午夜福利在线看| 日日干狠狠操夜夜爽| 成年人午夜在线观看视频 | 九草在线视频观看| 日本与韩国留学比较| 99久久中文字幕三级久久日本| 哪个播放器可以免费观看大片| 精华霜和精华液先用哪个| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| av福利片在线观看| 国产又色又爽无遮挡免| 99久久精品一区二区三区| 波多野结衣巨乳人妻| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产伦理片在线播放av一区| 中文资源天堂在线| 伦精品一区二区三区| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲最大成人中文| 色网站视频免费| 久久久久精品久久久久真实原创| 好男人视频免费观看在线| 成人性生交大片免费视频hd| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲av中文av极速乱| 色综合亚洲欧美另类图片| 欧美日韩在线观看h| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 又大又黄又爽视频免费| 国产 亚洲一区二区三区 | 国产真实伦视频高清在线观看| 国产精品久久久久久精品电影| 一级毛片电影观看| 2021少妇久久久久久久久久久| 亚洲不卡免费看| 秋霞伦理黄片| 天天一区二区日本电影三级| 波野结衣二区三区在线| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 黑人高潮一二区| 亚洲自偷自拍三级| 国产精品爽爽va在线观看网站| av在线天堂中文字幕| 免费观看无遮挡的男女| 卡戴珊不雅视频在线播放| 美女cb高潮喷水在线观看| 嫩草影院入口| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲精品成人久久久久久| 国产熟女欧美一区二区| 国产乱人视频| 看非洲黑人一级黄片| 国产 亚洲一区二区三区 | 亚州av有码| 有码 亚洲区| 国产人妻一区二区三区在| 联通29元200g的流量卡| av在线观看视频网站免费| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 免费黄色在线免费观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 在线观看av片永久免费下载| 亚洲最大成人av| 亚洲精品成人av观看孕妇| 18+在线观看网站| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 99热这里只有是精品在线观看| 中文资源天堂在线| 国产伦精品一区二区三区视频9| 欧美成人a在线观看| 欧美高清性xxxxhd video| 国产精品1区2区在线观看.| 草草在线视频免费看| 亚洲精品影视一区二区三区av| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产熟女欧美一区二区| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 麻豆av噜噜一区二区三区| 91狼人影院| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲av免费高清在线观看| 国产片特级美女逼逼视频| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 日韩一区二区视频免费看| h日本视频在线播放| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 欧美性感艳星| 中文字幕亚洲精品专区| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲av免费在线观看| 老司机影院成人| 直男gayav资源| 久久久精品免费免费高清| 99久久精品国产国产毛片| 在线观看美女被高潮喷水网站| 夫妻午夜视频| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 日韩电影二区| 免费大片黄手机在线观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 五月伊人婷婷丁香| 免费电影在线观看免费观看| 国产视频首页在线观看| 大片免费播放器 马上看| 欧美高清性xxxxhd video| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产 亚洲一区二区三区 | 日本一二三区视频观看| 国产淫语在线视频| 精品久久久久久久久亚洲| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产午夜福利久久久久久| 少妇的逼好多水| 99热6这里只有精品| 免费看光身美女| 国产伦精品一区二区三区视频9| 免费观看的影片在线观看| 国产免费又黄又爽又色| 在线观看av片永久免费下载| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产大屁股一区二区在线视频| 1000部很黄的大片| 淫秽高清视频在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 成年女人看的毛片在线观看| 18禁在线播放成人免费| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久热精品热| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 哪个播放器可以免费观看大片| 好男人视频免费观看在线| 天堂网av新在线| 日韩av不卡免费在线播放| 日韩成人av中文字幕在线观看| 亚洲图色成人| 国产精品综合久久久久久久免费| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 精品久久久久久久久久久久久| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 欧美人与善性xxx| 欧美日韩精品成人综合77777| 一区二区三区免费毛片| 国产精品人妻久久久久久| 日韩伦理黄色片| 2021少妇久久久久久久久久久| 久久久欧美国产精品| 看非洲黑人一级黄片| 男插女下体视频免费在线播放| 中文字幕av在线有码专区| 久久国产乱子免费精品| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | av又黄又爽大尺度在线免费看| 久久人人爽人人片av| www.av在线官网国产| 亚洲av免费在线观看| 午夜激情欧美在线| 九九在线视频观看精品| 男女边吃奶边做爰视频| 久久久久久久大尺度免费视频| 全区人妻精品视频| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲人成网站在线播| 国产成人精品久久久久久| 乱人视频在线观看| 午夜久久久久精精品| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲国产精品专区欧美| 插阴视频在线观看视频| 真实男女啪啪啪动态图| av在线观看视频网站免费| 好男人视频免费观看在线| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲国产av新网站| 免费在线观看成人毛片| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲久久久久久中文字幕| 亚洲av日韩在线播放| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 精品久久久久久久久久久久久| 男女边摸边吃奶| 91久久精品国产一区二区成人| 国产成人精品一,二区| 街头女战士在线观看网站| av国产久精品久网站免费入址| 日韩一区二区视频免费看| 欧美日韩精品成人综合77777| 在现免费观看毛片| 高清视频免费观看一区二区 | 看黄色毛片网站| 精品国产三级普通话版| 人妻系列 视频| 黄色日韩在线| 激情五月婷婷亚洲| 日本一本二区三区精品| 3wmmmm亚洲av在线观看| 久久久久精品性色| 女人久久www免费人成看片| 精品久久久久久久久av| 99久久人妻综合| 男人舔奶头视频| 性插视频无遮挡在线免费观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 又大又黄又爽视频免费| 欧美丝袜亚洲另类| 成人毛片60女人毛片免费| 搡老妇女老女人老熟妇| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲国产av新网站| 三级经典国产精品| 深爱激情五月婷婷| 久久这里有精品视频免费| 久久这里只有精品中国| 人妻系列 视频| av.在线天堂| 一个人免费在线观看电影| 十八禁国产超污无遮挡网站| 91aial.com中文字幕在线观看| 大香蕉97超碰在线| av天堂中文字幕网| 亚洲精品久久午夜乱码| 别揉我奶头 嗯啊视频| 欧美日韩综合久久久久久| 中文天堂在线官网| 亚洲精品一二三| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 2022亚洲国产成人精品| 97在线视频观看| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 国产亚洲5aaaaa淫片| 少妇丰满av| 性插视频无遮挡在线免费观看| 中文字幕制服av| 国内精品一区二区在线观看| 热99在线观看视频| 美女cb高潮喷水在线观看| 婷婷色av中文字幕| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 精品久久久久久成人av| kizo精华| 婷婷色av中文字幕| 亚洲在久久综合| 日韩制服骚丝袜av| 在线免费十八禁| 特级一级黄色大片| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲av电影不卡..在线观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 色吧在线观看| 97热精品久久久久久| 欧美高清性xxxxhd video| 亚洲在久久综合| 久久久久久九九精品二区国产| 国产成年人精品一区二区| av国产久精品久网站免费入址| 午夜久久久久精精品| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 一级毛片我不卡| 丝袜喷水一区| 日本黄大片高清| 久久久久久久午夜电影| 免费黄色在线免费观看| 成人一区二区视频在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 91久久精品国产一区二区三区| 青春草国产在线视频| 三级国产精品欧美在线观看| 国产亚洲精品久久久com| 免费无遮挡裸体视频| 欧美性感艳星| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲国产欧美人成| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲国产精品专区欧美| 亚洲国产成人一精品久久久| 日本午夜av视频| 久久精品夜色国产| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲四区av| 亚洲av二区三区四区| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产在线男女| 一级毛片电影观看| 99久久精品一区二区三区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 免费看日本二区| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲精品国产av成人精品| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国产高清国产精品国产三级 | 少妇人妻精品综合一区二区| 精品一区二区三区人妻视频| 久久久色成人| 免费观看在线日韩| 好男人视频免费观看在线| 亚洲最大成人中文| 亚洲精品国产成人久久av| 中文字幕久久专区| 2018国产大陆天天弄谢| 日韩视频在线欧美| 亚洲18禁久久av| 亚洲精品一区蜜桃| 久久久久久伊人网av| 午夜福利成人在线免费观看| 国产黄频视频在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 国产亚洲5aaaaa淫片| 精品人妻熟女av久视频| 男女啪啪激烈高潮av片| 免费黄色在线免费观看| 午夜福利在线在线| 人妻系列 视频| 男女边摸边吃奶| 成人av在线播放网站| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 老师上课跳d突然被开到最大视频| 欧美bdsm另类| 亚洲av电影不卡..在线观看| 成人国产麻豆网| 亚洲av不卡在线观看| av播播在线观看一区| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲精品aⅴ在线观看| 禁无遮挡网站| 三级国产精品欧美在线观看| 午夜爱爱视频在线播放| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 在现免费观看毛片| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 搞女人的毛片| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 久久久欧美国产精品| 色综合站精品国产| 看黄色毛片网站| 色综合站精品国产| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 一级a做视频免费观看| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 一夜夜www| 日日啪夜夜爽| 国产av在哪里看| 一本久久精品| a级一级毛片免费在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 午夜久久久久精精品| 99热网站在线观看| 国产成人a区在线观看| 在线免费观看的www视频| 观看免费一级毛片| 天堂√8在线中文| 国产极品天堂在线| 亚洲人与动物交配视频| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲精品第二区| 国产免费福利视频在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 插逼视频在线观看| 国产亚洲精品久久久com| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产乱人视频| 国产亚洲一区二区精品| av国产免费在线观看| 久热久热在线精品观看| 热99在线观看视频| 免费黄网站久久成人精品| 精品国产三级普通话版| 欧美成人精品欧美一级黄| 边亲边吃奶的免费视频| 亚洲成人av在线免费| 在线观看av片永久免费下载| 天美传媒精品一区二区| 亚洲av在线观看美女高潮| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 69av精品久久久久久| 99热这里只有是精品50| 亚洲自拍偷在线| 99久国产av精品国产电影| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 久久这里只有精品中国| 午夜激情福利司机影院| 三级经典国产精品| 一级a做视频免费观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 天天躁日日操中文字幕| 中文字幕av在线有码专区| 久久久久久伊人网av| 人妻系列 视频| 国内精品美女久久久久久| 久久6这里有精品| www.av在线官网国产| 性插视频无遮挡在线免费观看| 在线a可以看的网站| 久久国内精品自在自线图片| 国产精品综合久久久久久久免费| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲精品日韩av片在线观看| 99久久人妻综合| 97超视频在线观看视频| 国产欧美日韩精品一区二区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 免费看光身美女| 性插视频无遮挡在线免费观看| 高清午夜精品一区二区三区| 国产成人aa在线观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 一级av片app| 热99在线观看视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 国产成人a∨麻豆精品| 国产老妇女一区| 日本欧美国产在线视频| 久久精品人妻少妇| 男人狂女人下面高潮的视频| 精品久久久久久电影网| 成人综合一区亚洲| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 九草在线视频观看| 久久久久九九精品影院| 国产乱人视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 七月丁香在线播放| 80岁老熟妇乱子伦牲交| av在线播放精品| 欧美区成人在线视频| 国产精品嫩草影院av在线观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 亚洲一区高清亚洲精品| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 精品久久久噜噜| 色综合站精品国产| 黄色配什么色好看| 午夜福利视频1000在线观看| 日韩一本色道免费dvd| 麻豆成人午夜福利视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲人与动物交配视频| 黄片wwwwww| 免费黄频网站在线观看国产| 丰满乱子伦码专区| 国内精品一区二区在线观看| 免费观看的影片在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 欧美极品一区二区三区四区| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 赤兔流量卡办理| 亚洲精品久久午夜乱码| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| av国产免费在线观看| 国产 一区 欧美 日韩| 97在线视频观看| 日本熟妇午夜| 国内精品宾馆在线| 国产亚洲5aaaaa淫片| 精品久久久久久成人av| 国产av不卡久久| 久久久久免费精品人妻一区二区| 毛片一级片免费看久久久久| 中文天堂在线官网| 如何舔出高潮| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 毛片一级片免费看久久久久| av网站免费在线观看视频 | 人妻一区二区av| av卡一久久| 日韩欧美 国产精品| 日本黄色片子视频| 国产精品一及| 18+在线观看网站| 久久韩国三级中文字幕| 精品一区二区三区人妻视频| 欧美丝袜亚洲另类| 国产成人91sexporn| 成人欧美大片| 久久99热这里只频精品6学生| 99视频精品全部免费 在线| 午夜激情欧美在线| 久久久久精品久久久久真实原创| 精品一区二区三卡| 国产高清有码在线观看视频| 寂寞人妻少妇视频99o| 日本黄色片子视频| 最近最新中文字幕免费大全7| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 免费观看无遮挡的男女| 1000部很黄的大片| 女的被弄到高潮叫床怎么办| av又黄又爽大尺度在线免费看| av在线亚洲专区| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 三级国产精品欧美在线观看| 国产一级毛片在线| 亚州av有码| 高清视频免费观看一区二区 | 只有这里有精品99| videos熟女内射| 激情 狠狠 欧美| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产人妻一区二区三区在| 美女主播在线视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 中文资源天堂在线| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 日日啪夜夜撸| videos熟女内射| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 国产精品一区二区性色av| 免费看av在线观看网站| av又黄又爽大尺度在线免费看| 欧美激情国产日韩精品一区| 日本欧美国产在线视频| 亚洲成人中文字幕在线播放| 日韩电影二区| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲精品自拍成人| 色尼玛亚洲综合影院| 淫秽高清视频在线观看| 精品国产露脸久久av麻豆 | 精品人妻偷拍中文字幕| 国产久久久一区二区三区| a级毛片免费高清观看在线播放| h日本视频在线播放| 午夜激情欧美在线| 日日撸夜夜添| 高清视频免费观看一区二区 | 亚洲自拍偷在线| 国产一区有黄有色的免费视频 | 赤兔流量卡办理| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 精品久久久久久久久久久久久| 听说在线观看完整版免费高清| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产精品伦人一区二区| 少妇的逼好多水| 国产黄片美女视频| 久久久久性生活片| 日韩三级伦理在线观看| 久久久久国产网址| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲av.av天堂| 欧美+日韩+精品| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲精品成人久久久久久| 老女人水多毛片| 有码 亚洲区| 久久久久久久久久成人| 日韩av免费高清视频| 日韩欧美一区视频在线观看 | 嫩草影院入口| 人妻夜夜爽99麻豆av| 麻豆av噜噜一区二区三区| 精华霜和精华液先用哪个| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 一级a做视频免费观看| 国产午夜精品论理片| 丝袜美腿在线中文| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产一区二区三区av在线| 国产久久久一区二区三区| 美女黄网站色视频| 中文字幕av在线有码专区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 永久网站在线| 国产中年淑女户外野战色| 看非洲黑人一级黄片| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲内射少妇av| 久久久久久久久久成人| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲真实伦在线观看| 欧美极品一区二区三区四区| 国产 亚洲一区二区三区 | 一级爰片在线观看| 一级毛片电影观看| 国产成人freesex在线| 午夜福利在线观看吧| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产69精品久久久久777片| 日韩精品有码人妻一区| 99热这里只有是精品50| 国产高清国产精品国产三级 | 99热这里只有是精品在线观看| 在线观看一区二区三区| 国产成人精品一,二区| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 网址你懂的国产日韩在线| 成年人午夜在线观看视频 | 色播亚洲综合网|