從進境草籽中截獲剪股穎粒線蟲的體會

王晨

摘要：剪股穎粒線蟲是我國檢疫性有害生物，但該線蟲截獲較難。上?？诎哆B續(xù)2年在進境草籽中截獲該線蟲，現(xiàn)將截獲經(jīng)驗整理總結(jié)，以期為其他口岸提供參考借鑒。

關(guān)鍵詞：剪股穎粒線蟲;牧草種子;截獲

剪股穎粒線蟲（Anguina agrostis）是牧草和草坪上重要的有害生物，被我國列入檢疫性有害生物名錄。1997年～2003年，我國口岸曾數(shù)次在進口草籽中截獲該線蟲，但此后10余年來我國未見有記錄截獲該線蟲。2017～2018年，上海口岸先后2次分別在進境草籽中截獲該線蟲，現(xiàn)將檢疫過程中的體會整理如下，以期為口岸檢疫部門提供技術(shù)參考。

1截獲

2018年3月，上海進口一批美國俄勒岡州細弱剪股穎（Agrostis tenuis）草種，總重11.34t。3月28日在外高橋港口采集樣品并送到實驗室。鑒于美國是剪股穎粒線蟲的分布區(qū)，且剪股穎植物是該線蟲的典型寄主，故對送檢的樣品進行仔細檢查。經(jīng)前期試驗發(fā)現(xiàn)，采用直接挑取蟲癭法分離獲得的粒線蟲數(shù)量較多，故采用直接挑取蟲癭法檢驗該批樣品。獲取蟲癭后，用挑針刺破蟲癭，有大量線蟲逸出。將獲得的線蟲采用形態(tài)學(xué)及分子相結(jié)合的方法進行鑒定，經(jīng)確認該線蟲是剪股穎粒線蟲。

2檢測過程中的體會

2.1加大對重點樣品的檢測力度

近年來，我國草籽進口量越來越大，其中禾本科草籽占多數(shù)。剪股穎粒線蟲的寄主較廣泛，可為害禾本科植物10多個屬，其中黑麥草屬（Lolium s p.）、早熟禾屬（Poa spp.）、羊茅屬（Festuca spp.）等草籽都是我國進口量較大的草籽。據(jù)統(tǒng)計，美國、加拿大、丹麥、新西蘭、荷蘭等國是我國草種進口的主要國家，上述國家均有剪股穎粒線蟲分布，應(yīng)引起檢疫部門高度重視。據(jù)統(tǒng)計，我國口岸曾在彎葉畫眉草、剪股穎、匍匐莖剪股穎（Agrostis stolonKera）、細弱剪股穎（Agrostis tenuis）中截獲剪股穎粒線蟲，口岸若發(fā)現(xiàn)這類樣品應(yīng)重點查驗。

2.2線蟲的分離方法

本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)，對剪股穎草籽、匍匐莖剪股穎、細弱剪股穎等剪股穎屬（Agrostis）草籽類樣品，采用直接挑取蟲癭法分離粒線蟲具有分離數(shù)量大、耗時少的優(yōu)點，故對該類樣品采用直接挑取蟲癭法進行分離。挑取時要注意每次選取的樣品盡量少，以使樣品盡量散開平鋪，互相不重疊。當發(fā)現(xiàn)顏色較深（黑色或棕色）的雜質(zhì)時（見圖1），盡量都挑取出來。進一步置于解剖鏡下觀察。

經(jīng)觀察，典型的剪股穎粒線蟲草籽，頭尾略尖，中間較寬，呈紡錘形;比正常的植物種子大一些（圖2）。對疑似蟲癭的雜質(zhì)，滴入數(shù)滴清水，稍加濕潤后，采用解剖針挑破、刺破，進一步觀察是否有線蟲逸出。

2.3線蟲的鑒定

采用傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)相結(jié)合的方法進行鑒定?？刹捎?8S和ITS區(qū)通用引物擴增線蟲核糖體DNA，將所得PCR產(chǎn)物進行測序，并進行序列比對及系統(tǒng)發(fā)育分析;也可參照國標中的特異引物對線蟲進行PCR擴增，觀察是否產(chǎn)生特異性條帶。

3總結(jié)

近年來，我國牧草及草坪草種子進口量較大。據(jù)統(tǒng)計，2011～2014年，上?？诎哆M境種子數(shù)量達5.373萬t，其中禾本科種子占絕大多數(shù)，占總量的92.87%。剪股穎粒線蟲是禾本科植物非常重要的病原線蟲，口岸應(yīng)加大檢疫力度，以防該線蟲傳人我國。