硝酸銀滴定液指示劑法測(cè)定獸藥鹽酸氯苯胍中含氯量的方法驗(yàn)證

(浙江匯能生物股份有限公司，浙江 海寧 314422)

鹽酸氯苯胍(Robenidine hydrochloride)又名1,3-雙[(對(duì)氯亞芐基)氨基]胍鹽酸鹽，屬胍鹽衍生物，分子式為C15H13Cl2N5·HCl，分子量為370.66。鹽酸氯苯胍作為廣譜抗球蟲藥被用于預(yù)防和治療雞、兔等動(dòng)物的球蟲病，對(duì)柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲等均有效果[1-3]?！吨袊?guó)獸藥典》(2015版)在鹽酸氯苯胍質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求【檢查】項(xiàng)中規(guī)定了其含氯量的滴定檢測(cè)方法，該方法需使用到兩種化學(xué)檢測(cè)試劑，即二苯偕肼(用作指示劑)和硝酸汞(用作滴定液)。硝酸汞是一種劇毒?；?，在我國(guó)被嚴(yán)格管控，購(gòu)買十分困難，給鹽酸氯苯胍生產(chǎn)或使用單位開展對(duì)該藥的經(jīng)常性質(zhì)量監(jiān)測(cè)帶來極大不便，找出一種能替代硝酸汞滴定法的檢測(cè)方法尤為必要。

目前已有采用硝酸銀滴定法檢測(cè)工業(yè)循環(huán)冷卻水和鍋爐用水中氯離子的方法報(bào)道(GB/T 15453-2008)。雖然硝酸銀屬于易制爆危險(xiǎn)化學(xué)品，但和硝酸汞相比易于購(gòu)買，毒性亦較低。本試驗(yàn)建立了一種以硝酸銀作為滴定液、以熒光黃作為終點(diǎn)指示劑的鹽酸氯苯胍中含氯量的檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法結(jié)果準(zhǔn)確可靠。該方法不僅可替代硝酸汞滴定法，也有利于保障檢驗(yàn)人員的健康。

1 試劑與方法

1.1試劑 硝酸銀滴定液(0.10225 mol·L-1)：取硝酸銀17.5 g，加水適量使溶解成1000 mL，搖勻。取在110℃干燥至恒重的基準(zhǔn)氯化鈉約2.0 g，精密稱定，加水50 mL使溶解，再加糊精溶液5 mL，碳酸鈣0.1 g與熒光黃指示劑8滴，用本液滴定至渾濁液由黃綠色變?yōu)槲⒓t色。每1 mL硝酸銀滴定液(0.1 mol/L)相當(dāng)于5.844 mg的氯化鈉。

硝酸汞滴定液(0.05002 mol·L-1)：取硝酸汞17.2 g，加水400 mL和硝酸5 mL溶解后，濾過，再加水適量使成1000 mL，搖勻。取在110℃干燥至恒重的基準(zhǔn)氯化鈉約0.15 g，精密稱定，加水100 mL使溶解，加二苯偕肼指示液1 mL,在劇烈振搖下使用本液滴定至淡玫瑰紫色。

熒光黃指示劑：取熒光黃0.1 g，加乙醇100 mL使溶解。

糊精：取糊精2.0 g，加100 mL水加熱溶解，冷卻搖勻。

二苯偕肼指示液：取二苯偕肼1.0 g，加乙醇100 mL使溶解，搖勻；使用時(shí)再取上液1 mL，加乙醇至5 mL，搖勻得0.2%二苯偕肼指示劑。

鹽酸氯苯胍樣品來源：樣品1和樣品2來源于浙江匯能生物股份有限公司，樣品3來源于國(guó)內(nèi)某公司。

其余試劑均為分析純，乙醇純度95%，試驗(yàn)用水均為純化水。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 硝酸銀滴定法取干燥至恒重的鹽酸氯苯胍樣品約0.30 g，精密稱量后，加入50 mL乙醇加熱溶解。冷卻后，加入2 mL熒光黃指示劑和5 mL 2% 糊精(m∶v)，用硝酸銀滴定液滴定至終點(diǎn)，每1 mL硝酸銀滴定液(0.1 mol·L-1)相當(dāng)于3.545 mg的Cl。

1.2.2硝酸汞滴定法 按《中國(guó)獸藥典》一部(2015版)的檢測(cè)方法進(jìn)行。取干燥至恒重的鹽酸氯苯胍樣品約 0.30 g，精密稱定，置于50 mL乙醇中加熱使溶解, 冷卻后加入0.2%二苯偕肼指示液2 mL, 用硝酸汞滴定液滴定至溶液顯淺玫瑰紅色。每1 mL硝酸汞滴定液(0.05 mol·L-1)相當(dāng)于3.545 mg的Cl。

2 結(jié)果與討論

2.1方法學(xué)驗(yàn)證

2.1.1回歸方程 參照商軍等[4]的方法進(jìn)行。鹽酸氯苯胍供試品經(jīng)干燥至恒重，每個(gè)樣品稱取7份，使硝酸銀滴定液體積分別達(dá)到滴定管體積的20%、30%、40%、50%、70%、80%和90%(滴定管容積為10 mL)。記錄滴定終點(diǎn)時(shí)所需硝酸銀的體積，以滴定液體積(vi)為縱坐標(biāo)，供試品的質(zhì)量(mi)為橫坐標(biāo)，采用EXCEL表進(jìn)行回歸分析，獲得回歸方程。如圖1所示，三個(gè)樣品回歸方程的相關(guān)系數(shù)平方(R2)均接近1。

2.1.2成比例的系統(tǒng)誤差分析 根據(jù)前述回歸方程，計(jì)算試驗(yàn)獲得的回歸系數(shù)(bobs)與理論值“btheory”。對(duì)于指示劑法，測(cè)定的“bobs”與理論值“btheory”之間的相對(duì)偏差應(yīng)不得超過0.5%[5]。根據(jù)所用硝酸銀滴定液的摩爾濃度和鹽酸氯苯胍的相對(duì)分子量計(jì)算得出btheory=26.385 mL·g-1。根據(jù)所獲得的線性回歸方程可知，3個(gè)樣品的回歸系數(shù)bobs分別是26.455、26.47和26.514，按[(bobs-btheory)/btheory]×100%公式計(jì)算測(cè)定值與理論值之間的相對(duì)偏差分別為0.265%、0.322%和0.489%，均不超過0.5%(表1)。

2.1.3額外的系統(tǒng)誤差分析 指示劑法獲得的回歸方程截距(aobs)應(yīng)不得超過預(yù)期或目標(biāo)滴定體積“VT”的0.6%[5]。本方法規(guī)定供試品取樣量為0.3 g，預(yù)期或目標(biāo)滴定VT為7.92 mL(VT=26.385×0.3)。根據(jù)線性回歸方程，樣品1、樣品2和樣品3測(cè)定的回歸曲線的aobs分別為0.0442、0.0347和0.0194，按(aobs/VT)×100%計(jì)算，額外的系統(tǒng)誤差分別為0.558%、0.438%和0.245%(表2)，均未超過0.6%。

表1 成比例的系統(tǒng)誤差分析結(jié)果

2.1.4精密度分析 精密度即統(tǒng)計(jì)學(xué)誤差，采用指示劑法時(shí)，統(tǒng)計(jì)學(xué)誤差應(yīng)不超過0.5%[5]。計(jì)算公式如(1)、(2)和(3)所示：

(1)

(2)

Sdd=∑(Vi-aobs-bobs×mi)

(3)

式中SD為標(biāo)準(zhǔn)偏差估計(jì)值；Vi為消耗的滴定液體積；mi為供試品的稱樣量，n為滴定的次數(shù)。

按上述公式計(jì)算，三個(gè)供試品的SD分別為0.01006、0.00775和0.00988，統(tǒng)計(jì)學(xué)誤差分別為0.127%、0.098%和0.125%(表2)，均未超過0.5%。

2.1.5回收率試驗(yàn) 取樣品1進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)氯選用110℃干燥至恒重的基準(zhǔn)氯化鈉。前述檢測(cè)表明該樣品中含氯量為9.7%，試驗(yàn)中向該樣品中添加分別相當(dāng)于其含氯量的80%、100%和120%的氯，采用硝酸銀滴定法檢測(cè)氯含量，計(jì)算氯的回收率。檢測(cè)結(jié)果表明，樣品中氯的平均回收率達(dá) 99.4%(表3)，表明該檢測(cè)方法成立。

表2 額外的系統(tǒng)誤差和精密度分析結(jié)果

表3 加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2硝酸銀滴定法與硝酸汞滴定法檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 用《中國(guó)獸藥典》一部(2015版)要求的方法和本試驗(yàn)建立的方法分別對(duì)鹽酸氯苯胍樣品1和樣品3進(jìn)行5次平行測(cè)定，測(cè)得的氯含量見圖2。結(jié)果表明，兩種滴定方法測(cè)得的氯含量無顯著差異(P>0.05)。表明本試驗(yàn)建立的硝酸銀滴定法可用于檢測(cè)鹽酸氯苯胍中氯含量。

A:《中國(guó)獸藥典》(2015版)要求的檢測(cè)方法；B：本試驗(yàn)建立的方法。NS：差異不顯著(P>0.05)(n=5)圖2 樣品氯含量?jī)煞N方法檢測(cè)結(jié)果的比較

3 結(jié)論

綜上，本試驗(yàn)通過成比例的系統(tǒng)誤差、額外的系統(tǒng)誤差、統(tǒng)計(jì)學(xué)誤差和加標(biāo)回收試驗(yàn)分析，證實(shí)所建立的以硝酸銀為滴定液、以熒光黃作為終點(diǎn)指示劑的鹽酸氯苯胍中氯含量的滴定檢測(cè)方法精密度高、重復(fù)性好、方法可靠。此外，本試驗(yàn)建立的硝酸銀滴定法與《中國(guó)獸藥典》一部(2015版)要求的硝酸汞滴定法對(duì)同一樣品的檢測(cè)結(jié)果無顯著差異。上述結(jié)果表明，本試驗(yàn)建立硝酸銀滴定法可以替代硝酸汞滴定法用于鹽酸氯苯胍中氯含量的檢測(cè)。