循環(huán)miRNA-21在急性冠脈綜合征早期診斷中的表達(dá)水平及其臨床意義研究

microRNAs是一類進(jìn)化上高度保守的非編碼小分子單鏈RNA，在轉(zhuǎn)錄水平負(fù)性調(diào)控靶基因表達(dá)，在細(xì)胞與組織之間傳遞信息[1]，研究表明其參與調(diào)控動(dòng)脈粥樣硬化的形成與發(fā)展。miRNA不僅存在于細(xì)胞內(nèi)，更可穩(wěn)定存在于血液循環(huán)中，這為臨床檢測(cè)提供了有利條件。在心血管病領(lǐng)域中多角度的miRNA-21相關(guān)研究顯示，其與冠心病發(fā)生發(fā)展存在諸多關(guān)聯(lián)[2-4]。本研究測(cè)定臨床實(shí)際中急性起病的ACS病人和非心源性胸痛病人間血漿miRNA-21的含量變化情況，旨在闡明急性冠脈綜合征(ACS)病人與miRNA-21表達(dá)水平的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 入選2016年11月—2017年3月就診于山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院胸痛中心的ACS病人，臨床確診后將病人分為3組，急性心肌梗死(AMI)組、不穩(wěn)定型心絞痛組(UA組)和非心源性胸痛組(對(duì)照組)，各30例。分組的理論依據(jù)為第3版的心肌梗死全球定義[5]、中國(guó)急性ST段抬高型心肌梗死診斷和治療指南(2015)[6]和非ST段抬高型急性冠狀動(dòng)脈綜合征診斷和治療指南(2016)[7]。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡20～85歲，性別種族不限；發(fā)病時(shí)間在12 h內(nèi)病人。排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡<20歲，>85歲；各種疾病晚期病人；既往有心肌梗死、心肌病、結(jié)構(gòu)性心臟病、惡性心律失常、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入術(shù)(PCI)、冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)(CABG)史；急性心力衰竭；急性心包炎；病毒性心肌炎；感染性心內(nèi)膜炎；急重癥感染；各種腫瘤性疾??；嚴(yán)重的風(fēng)濕免疫性疾?。粐?yán)重心、肝、腎功能不全者；精神失常者。

1.2 方法 受試者于發(fā)病入院即刻抽取肘靜脈血5 mL，EDTA抗凝后冷藏，8 h內(nèi)分離血漿并于-80 ℃凍存。經(jīng)miRcute 血清/血漿miRNA 提取分離試劑盒高效提取血漿中小片段RNA，采用加尾法對(duì)目標(biāo)基因進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄形成cDNA，每份樣品中外加1 ng線蟲(chóng)miRNA-39作為內(nèi)參基因，依據(jù)SYBR Green原理行q-PCR檢測(cè)各組血漿內(nèi)的miRNA-21水平，結(jié)果以2(CT[miRNA-21]- CT[cel-miRNA-39])呈現(xiàn)。同時(shí)抽取的血樣進(jìn)行心肌肌鈣蛋白I(cTnI)和N末端腦鈉肽前體(NT-proBNP)檢測(cè)，該數(shù)據(jù)均來(lái)自山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院檢驗(yàn)科標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)定結(jié)果。病人診療期間完善一般資料。

2 結(jié) 果

2.1 各組臨床資料比較 各組間年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)及取樣時(shí)血壓、心率記錄等方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見(jiàn)表1。

表1 各組一般資料比較

注：1 mmHg=0.133 kPa

2.2 miRNANA-21、cTnI和NT-proBNP水平比較 miRNA-21等指標(biāo)不符合正態(tài)分布，以四分位間距表示。組間比較同樣使用非參數(shù)檢驗(yàn)，結(jié)果顯示：AMI組相比于UA組、對(duì)照組，miRNA-21的表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；UA組和對(duì)照組相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，兩組間miRNA-21的表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見(jiàn)表2。

表2 各組miRNA-21、cTnI和NT-proBNP檢測(cè)值比較(四分位間距)

與AMI組比較，1)P<0.001；與對(duì)照組比較，2)P<0.05

2.3 Pearson檢驗(yàn)進(jìn)行相關(guān)性分析 AMI組的miRNA-21、cTnI和NT-proBNP采用Pearson檢驗(yàn)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果示miRNA-21與cTnI呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為r=0.851；miRNA-21與NT-proBNP呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為r=0.421。經(jīng)ROC曲線分析得到，miRNA-21的曲線下面積為0.879，P<0.01，95%CI為(0.784，0.974)；cTnI的曲線下面積為0.982，P<0.01，95%CI為(0.943，1.000)。詳見(jiàn)圖1。

圖1 ROC曲線分析圖

3 討 論

本研究表明，AMI組較對(duì)照組miRNA-21的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，miRNA-21和急性心肌梗死發(fā)病具有密切的關(guān)系，目前，國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究結(jié)論不一致[10]。急性心肌梗死后miRNA-21表達(dá)上調(diào)，可推測(cè)miRNA-21具有作為新的心肌損傷標(biāo)志物的潛力；UA組miRNA-21的表達(dá)相較對(duì)照組也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可見(jiàn)miRNA-21對(duì)不穩(wěn)定型心絞痛有一定的預(yù)測(cè)作用；本研究中AMI組miRNA-21和cTnI呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為r=0.851，可以說(shuō)是高度相關(guān)的兩組指標(biāo)，據(jù)此推測(cè)在急性心肌梗死中，miRNA-21升高和cTnI升高的作用機(jī)制可能有相似或者相近之處，或是miRNA-21表達(dá)與cTnI的含量變化存在關(guān)聯(lián)；但UA組較對(duì)照組中miRNA-21有差異性表達(dá)，最終的臨床診療證實(shí)UA組冠狀動(dòng)脈造影顯示均有嚴(yán)重的冠狀動(dòng)脈狹窄，證明了疾病存在，推測(cè)miRNA-21較cTnI在診斷UA中更有優(yōu)勢(shì)。根據(jù)ROC曲線計(jì)算結(jié)果，miRNA-21可以作為診斷急性心肌梗死的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)；而相比cTnI的曲線下面積，miRNA-21對(duì)急性心肌梗死的檢驗(yàn)效能不及cTnI，cTnI在檢測(cè)急性心肌梗死準(zhǔn)確性更高。本結(jié)果還顯示miRNA-21與NT-proBNP呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)并不高(r=0.421)，推測(cè)急性心肌梗死引起miRNA-21表達(dá)上調(diào)的因素中，NT-proBNP相關(guān)的心力衰竭因素也起到了一定作用，但不是主要相關(guān)因素。

ACS病人急性起病時(shí)，其循環(huán)miRNA-21的表達(dá)水平是上升的，miRNA-21在ACS的早期診斷有一定價(jià)值。