東北地區(qū)狐源大腸桿菌耐藥性的檢測

安富宇,楊金雨,馮 濤,劉偉石,薛 原

(1.東北林業(yè)大學野生動物資源學院,黑龍江 哈爾濱 150040;2.中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所,黑龍江 哈爾濱 150069)

由于抗菌藥物的大范圍使用,細菌的耐藥水平愈發(fā)增高和耐藥譜愈發(fā)擴大,導致耐藥水平增加,甚至超級細菌的出現(xiàn),使動物疾病的防治面臨嚴峻挑戰(zhàn)。目前已成為影響?zhàn)B殖業(yè)正常發(fā)展的主要因素之一。同時,大腸桿菌由于廣泛存在于動物體內(nèi)環(huán)境中,是細菌耐藥基因儲存庫和重要傳播中轉(zhuǎn)站,國際上將其確定為耐藥性檢測的標定菌株[1]。已報道感染大腸桿菌病的野生哺乳動物包括：犬、狐貍、水貂、毛絲鼠、鹿、刺猬、虎等。本試驗以東北地區(qū)的狐源性大腸桿菌為研究對象,進行了有關耐藥性的測定。探究大腸桿菌在東北地區(qū)狐貍養(yǎng)殖場的流行情況,從而為狐貍養(yǎng)殖及正確使用抗菌藥提供依據(jù)和科學指導。

1 材料與方法

1.1 試驗菌株 藥敏質(zhì)控菌株大腸桿菌 ATCC 25922,購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。124株大腸桿菌是2016年6-12月從黑龍江、吉林、遼寧的狐貍養(yǎng)殖場分離所得臨床菌株。各個分離菌株用于后期的藥敏試驗。

1.2 培養(yǎng)基 普通瓊脂和水解酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基(Mueller-Hinton,MH),購自杭州天和微生物試劑有限公司,批號為151023。

1.3 藥敏紙片 共22種藥敏紙片,均購自杭州天和微生物試劑有限公司和 OXIOD公司。包括 β-內(nèi)酰胺類：阿莫西林/克拉維酸鉀(AMC)、阿莫西林(AMX)、氨芐西林(AMP)、氨曲南(ATM)、頭孢他啶(CAZ)、頭孢噻吩(KF)、亞胺培南(IPM);氨基糖苷類：阿米卡星(AK)、慶大霉素(CN)、卡那霉素(K)、新霉素(NEO)、安普霉素(APR);喹諾酮類：諾氟沙星(NOR)、恩諾沙星(ENR)、環(huán)丙沙星(CIP)、氧氟沙星(OFX);四環(huán)素類：強力霉素(DO)、四環(huán)素(TE);磺胺類：復方新諾明(SXT);氯霉素類：氯霉素(C)、氟苯尼考(FFC);多肽類：多黏菌素PB。

1.4 方法

1.4.1 藥敏試驗 采用WHO提倡的Kirby-Bauer法[2]。依據(jù)CLSI有關標準,只有當質(zhì)控菌株的抑菌圈直徑在允許范圍內(nèi)測試菌株結果才具有科學有效性。

1.4.2 判定標準 按抗菌藥物敏感性試紙片擴散法標準[3]判定各菌株的敏感度,對所分離的細菌進行藥敏試驗。以敏感(Susceptible)、中介(Intermediate)、耐藥(Resistant)3種程度來對抑菌圈大小作出判定。

2 結果

2.1 大腸桿菌的耐藥性 124株狐源大腸桿菌均可產(chǎn)生耐藥性。對氨芐西林、頭孢噻吩、卡那霉素、四環(huán)素、氯霉素、強力霉素和復方新諾明的耐藥率均在60%以上;對阿米卡星、多黏菌素B敏感率在80%以上,而對亞胺培南敏感率在90%以上,見表1。

2.2 大腸桿菌的多重耐藥性 124株受試狐源大腸桿菌對22種抗菌藥物均存在耐藥性。10耐菌株所占比例最大為21.6%。分離菌株存在耐藥現(xiàn)象,最多為18種,見圖1。

表1 狐源性大腸桿菌對22種抗微生物藥的體外藥敏試驗結果 /%

圖1 狐源性大腸桿菌的耐藥性

3 討論

由于抗菌藥普遍應用,細菌出現(xiàn)耐藥性變異的情況愈發(fā)增多。目前國內(nèi)大腸桿菌耐藥性的復雜與嚴重愈發(fā)突出,并大量出現(xiàn)了對多種抗生素抵抗耐藥的現(xiàn)象。狐貍等毛皮動物多種耐藥性菌株的生成與抗生素的普遍應用相關,使用亞治療劑量的抗菌藥易導致耐藥性菌株的出現(xiàn)[4]。狐源性大腸桿菌出現(xiàn)多種耐藥的情況,這和狐貍養(yǎng)殖場的不合理使用抗菌藥物有關。

124株受試狐源大腸桿菌對22種抗菌藥物均存在耐藥性。10耐菌株所占比例最大為21.6%。分離菌株存在1～18耐藥現(xiàn)象,最多為18種。124種耐藥大腸桿菌中耐8種抗生素的比例占12%。對四環(huán)素、氨芐西林、鏈霉素、恩諾沙星 、氧氟沙星的耐藥率較高。這與孫玉國等報道相似[5]。另外Brien O T F也有報道耐藥質(zhì)?？梢詫⒋竽c桿菌的耐藥基因通過轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導和結合方式在菌間相互轉(zhuǎn)移,從而使大腸桿菌的耐藥性迅速傳播,這也是在養(yǎng)殖場中的畜禽出現(xiàn)耐藥性的原因之一[6]。大腸桿菌的耐藥性機制有：(1)抗生素作用位點的改變或新作用位點的發(fā)生;(2)酶對抗生素的修飾和破壞;(3)增加抗生素從大腸桿菌向細胞外的主動排出作用;(4)細菌外膜通透性的改變;(5)質(zhì)粒介導的耐藥性。一種耐藥機制可以對多種抗生素表現(xiàn)為抗性,同一種抗生素也常常出現(xiàn)多種耐藥性機制共同抑制的現(xiàn)象[7]。

2002中國已經(jīng)禁止氯霉素用于食品動物,但試驗中卻出現(xiàn)高達60.8%的檢測菌株對氯霉素耐藥,這一方面可能是這個耐藥表型的流行可能與攜帶cmlA基因的質(zhì)粒廣泛傳播相關[8]。另一方面可能從養(yǎng)殖場的不合理用藥導致。敏感的藥物嚴格按說明足量足療程使用或根據(jù)藥物的配伍禁忌聯(lián)合用藥;一方面可以使抗菌藥之間的協(xié)同作用表現(xiàn)出來,增加療效;另一方面可以防止細菌長時間和某種藥物作用,增加產(chǎn)生耐藥性機率[9]。在臨床用藥或在飼料添加藥物時,應該盡量不要長期使用同幾種藥物,從而減少細菌耐藥性的發(fā)生,保障養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。