安徽地區(qū)禽源臨床樣品藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析

沈?qū)W懷,張丹俊,劉 磊,潘曉成,趙瑞宏,胡曉苗,戴 銀,朱 林

(1.安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所,安徽 合肥 230031;2.安徽省霍邱縣畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣站,安徽 霍邱 237400)

禽類疫病中絕大部分都存在原發(fā)或繼發(fā)的細(xì)菌感染,如果細(xì)菌性感染控制不良,可能引發(fā)機(jī)體的菌血癥或敗血癥,增加禽群的死淘率[1]。長(zhǎng)期以來(lái),由于畜牧業(yè)中抗生素的無(wú)序使用,使很多病原菌對(duì)抗生素的敏感性降低,耐藥甚至多重耐藥菌株的出現(xiàn),嚴(yán)重影響了獸醫(yī)臨床治療效果[2]。藥敏試驗(yàn)是篩選敏感抗生素的有效方法,常規(guī)藥敏試驗(yàn)需要把病原菌進(jìn)行分離純化后再進(jìn)行藥敏檢測(cè),不但所需要的時(shí)間長(zhǎng),操作復(fù)雜,而且很多病禽可能同時(shí)感染兩種或兩種以上病原菌,在分離純化過(guò)程中容易發(fā)生漏檢,造成所選用抗生素不能同時(shí)控制多種病原菌。因此,在實(shí)際臨床病例中使用臨床樣品直接藥敏試驗(yàn)?zāi)軌蜻_(dá)到快速篩選出有效抗生素,達(dá)到減少盲目用藥,提高治療效果的目的[3]。本文對(duì)2015-2017年安徽地區(qū)送檢至安徽省獸醫(yī)臨床診斷中心的臨床樣品進(jìn)行直接藥敏試驗(yàn),并對(duì)藥敏結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,旨在為安徽地區(qū)禽病防治過(guò)程中抗生素的選擇提供參考。

1 材料與方法

1.1 禽源臨床病料 病料來(lái)源于2015-2017年安徽不同地區(qū)送檢至安徽省獸醫(yī)臨床診斷中心的365份病禽或病死禽(包括雞、鴨、鵝、鴿和孔雀等)樣品。

1.2 主要試劑 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和一次性培養(yǎng)皿,購(gòu)自北京奧博星生物科技責(zé)任有限公司;阿莫西林(AMX)、氟苯尼考(FLO)、阿米卡星(AMK)、新霉素(NTL)、多西環(huán)素(DOX)、阿奇霉素(AZM)、慶大霉素(GEN)、左氧氟沙星(LEV)、頭孢噻肟(CTX)、磷霉素(FOS)等10種K-B藥敏紙片,均購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.3 方法

1.3.1 臨床樣品的處理 對(duì)送檢的病禽或病死禽進(jìn)行剖檢,無(wú)菌條件下采集具有明顯病變的部分肝臟、脾臟、氣囊、肺臟等組織器官。

1.3.2 臨床樣品的細(xì)菌培養(yǎng)和藥敏試驗(yàn) 在超凈工作臺(tái)中直接用采集病變組織剖面在營(yíng)養(yǎng)瓊脂板上進(jìn)行涂板,并用玻璃棒涂布均勻,藥敏試驗(yàn)按WHO提供的Kirby-Bauer紙片擴(kuò)散方法操作。

1.3.3 結(jié)果判定 貼有藥敏紙片的營(yíng)養(yǎng)瓊脂板在37℃條件下培養(yǎng)16～18 h后取出,以抑菌圈的大小作為評(píng)定臨床推薦用藥的依據(jù)。本文中“推薦用藥”和“首選藥物”是依據(jù)抗生素是否產(chǎn)生抑菌圈和抑菌圈的大小來(lái)判定,推薦用藥為可以產(chǎn)生抑菌圈的抗生素,首選藥物為產(chǎn)生抑菌圈最大的抗生素,并不是通常意義上按WHO標(biāo)準(zhǔn)所判定的敏感、中介或不敏。

2 結(jié)果

2.1 禽源臨床樣品的種屬來(lái)源分布如表1所示,2015-2017年送檢至診斷中心的365份禽病病例中,2015年有206例,2016年有103例,2017年為56例。種屬來(lái)源分布為雞源的占61.37%(224例),其次是鵝源和鴨源,分別為19.72%(72例)和15.34%(56例),其他禽種(鴿子、孔雀)占3.56%(共13例)。病例種屬的分布與安徽地區(qū)不同禽種養(yǎng)殖估摸有直接關(guān)系,其中水禽(鴨、鵝)所占的也較大(35.06%),這可能與水禽普遍采用散養(yǎng)模式,環(huán)境控制難度相對(duì)較大有關(guān)。

表1 2015-2017年送檢禽源臨床病料的種屬來(lái)源分布

2.2 禽源臨床樣品的藥敏結(jié)果

2.2.1 不同年份藥敏結(jié)果可用抗生素的種類數(shù)如圖1所示,2015-2017年送檢的禽病樣品藥敏結(jié)果以2種和3種可推薦抗生素為主,4種或4種以上可推薦抗生素的樣品比例明顯下降,最多只有6種可推薦藥物,并且只有1種可推薦抗生素樣品比例達(dá)到14.45%,說(shuō)明禽源臨床樣品中的病原菌對(duì)多種抗生素具有耐藥性,實(shí)際臨床治療中可供選擇的抗生素種類有限,這可能也是很多臨床病例在沒(méi)有做藥敏試驗(yàn)的情況下治療效果不理想的主要原因。

圖1 不同年份藥敏結(jié)果推薦抗生素的種類數(shù)

2.2.2 10種常用抗生素作為可推薦藥物和首選藥物的比例如表2所示,2015-2017年禽源臨床樣品藥敏試驗(yàn)結(jié)果中常用的10種獸用抗生素作為推薦用藥的比例存在很大的差異,總體占比而言,頭孢噻肟在所有臨床樣品中作為可推薦藥物的比例最高,為70.14%,其次是阿米卡星和多西環(huán)素,分別為60.27%和49.04%。阿莫西林、氟苯尼考和慶大霉素等作為可推薦藥物的比例占比均低于5%,其中阿莫西林的比例最低,僅為3.56%。不同年份間比較發(fā)現(xiàn),氟苯尼考、慶大霉素、左氧氟沙星和頭孢噻肟作為可推薦藥物的比例逐年升高,而阿莫西林、阿米卡星的比例逐年降低,這種規(guī)律性的變化可能與臨床樣品病原菌耐藥性的變化存在密切的聯(lián)系。2015-2017年10種抗生素在臨床樣品藥敏結(jié)果中作為首選藥物的比例如圖2所示,其中頭孢噻肟的比例最高,為38.36%,其次是阿米卡星和多西環(huán)素,為別為30.96%和16.36%。

表2 10種常用抗生素在禽源臨床樣品藥敏試驗(yàn)結(jié)果中作為可推薦藥物的比例/%

圖2 10種常用抗生素在禽源臨床樣品藥敏試驗(yàn)結(jié)果中作為首選藥物的比例

3 討論

抗生素在治療人類感染性疾病、防治動(dòng)物疫病、提高養(yǎng)殖效益以及保障公共衛(wèi)生安全中,發(fā)揮了重要作用,由于在治療人類和動(dòng)物疾病中抗生素的長(zhǎng)期大劑量使用,導(dǎo)致許多病原菌對(duì)常用抗生素的耐藥性逐漸增強(qiáng),多重耐藥性問(wèn)題日益嚴(yán)重[4-6]。近幾年,陸續(xù)有關(guān)于安徽地區(qū)禽源病原菌耐藥性的研究報(bào)道。白灝等[7]對(duì)江蘇和安徽禽致病性大腸桿菌進(jìn)行耐藥性檢測(cè),分離株對(duì)氨芐青霉素、頭孢噻吩、阿莫西林、洛美沙星、氯霉素、四環(huán)素和卡那霉素,耐藥性達(dá)到50%以上,頭孢他啶和頭孢吡肟的耐藥率最低,分別為7.14%和14.29%。賈雪波等[8]對(duì)山東、安徽2016年部分地區(qū)禽致病性大腸桿菌進(jìn)行耐藥性檢測(cè),結(jié)果表明,90%以上的菌株對(duì)包括紅霉素、新霉素、四環(huán)素、阿奇霉素、氯霉素、環(huán)丙沙星、復(fù)方新諾明和氨芐西林在內(nèi)的抗生素耐藥;75%以上的分離菌株對(duì)壯觀霉素和頭孢曲松耐藥。査華等[9]報(bào)道,江蘇和安徽地區(qū)鵝源沙門菌對(duì)羧芐青霉素、氨芐西林、鏈霉素和磺胺異噁唑也具有很高的耐藥性,而對(duì)頭孢曲松、頭孢西丁和卡那霉素耐藥性較低。沈?qū)W懷等[10]對(duì)安徽地區(qū)禽源沙門菌分離菌耐藥性檢測(cè),發(fā)現(xiàn)其對(duì)阿米卡星、左氧氟沙星和環(huán)丙沙星的耐藥率均低于20%,而對(duì)氨芐西林、鏈霉素、大觀霉素、復(fù)方新諾明和多西環(huán)素耐藥率達(dá)50%以上。以上研究報(bào)道均顯示,安徽地區(qū)禽源病原菌存在較為嚴(yán)重的耐藥率和多重耐藥性,耐藥菌株的產(chǎn)生和耐藥性變化給獸醫(yī)臨床防治過(guò)程中抗生素的選擇帶來(lái)困擾。

在實(shí)際生產(chǎn)中,采用臨床樣品直接進(jìn)行藥敏試驗(yàn)是快速篩選有效抗生素的重要手段,其藥敏結(jié)果與常規(guī)分離純化病原菌后再進(jìn)行藥敏試驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果并沒(méi)有明顯差異[3]。本文就2015-2017年安徽部分地區(qū)禽源臨床樣品的直接藥敏試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果顯示,在10種常用抗生素中以2、3種可推薦抗生素為主,最多有6種可推薦抗生素,只有1種可推薦抗生素比例達(dá)到14.45%,表明安徽地區(qū)禽源臨床樣品中的致病菌存在嚴(yán)重的多重耐藥性,這與已報(bào)道的研究結(jié)果一致。藥敏結(jié)果顯示,頭孢噻肟、阿米卡星和多西環(huán)素在作為可推薦藥物和首選藥物的比例明顯高于其他抗生素,而阿莫西林、氟苯尼考和慶大霉素等作為可推薦藥物的比例占比均低于5%。這一結(jié)果與趙素華等[11]在2017年報(bào)道的對(duì)皖北地區(qū)禽源大腸桿菌的耐藥性分析結(jié)果基本一致。研究結(jié)果表明,細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性與細(xì)菌本身的生物特性的改變、耐藥基因的產(chǎn)生和抗生素的使用等多種因素有關(guān)[5,12-14]。除此之外,本研究發(fā)現(xiàn),氟苯尼考、慶大霉素、左氧氟沙星和頭孢噻肟作為可推薦藥物的比例逐年升高,而阿莫西林、阿米卡星的比例逐年降低,這種規(guī)律性變化趨勢(shì)是否有持續(xù)性,又是否與本地區(qū)抗生素的使用、細(xì)菌耐藥基因的產(chǎn)生和遷移有關(guān),都值得進(jìn)一步觀察和分析研究。

4 小結(jié)

本研究分析結(jié)果表明,安徽地區(qū)禽源臨床樣品中的病原菌具有很強(qiáng)的耐藥率和多重耐藥性,在10種常用抗生素中以2、3種可推薦抗生素為主,推薦和首選的抗生素為頭孢噻肟,其次是阿米卡星和多西環(huán)素,不推薦使用阿莫西林、氟苯尼考和慶大霉素。本分析結(jié)果對(duì)安徽地區(qū)禽源臨床病原菌防治用藥的選擇具有重要的參考意義。