寧夏地區(qū)奶牛副結(jié)核病血清學(xué)調(diào)查

程 成,王文佳,張 凱,馬小靜,李夢瑩,許立華

(寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院,寧夏 銀川 750021)

牛副結(jié)核病是由副結(jié)核分枝桿菌引起的一種慢性消耗性疾病,是多種動(dòng)物共患的二類動(dòng)物疫病。牛副結(jié)核病的主要臨床癥狀表現(xiàn)為漸進(jìn)性消瘦和卡他性腸炎,主要病理變化包括慢性肉芽腫性回腸炎、腸黏膜高度增厚并形成皺褶等。MAP對環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力,在污染的牧場和廄肥中可存活數(shù)月至一年。病原主要經(jīng)消化道感染。新生牛在2歲之前一般為隱性感染,并不表現(xiàn)出臨床癥狀,后期通常表現(xiàn)的癥狀為體重急劇下降以及嚴(yán)重腹瀉。

1895年美國人Johne等首先發(fā)現(xiàn)副結(jié)核病,我國于1953年首次報(bào)道該病的存在。我國大部分地區(qū)都存在該病的流行,且呈現(xiàn)出不斷上升的趨勢,給我國的養(yǎng)牛業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。2014-2015年,孫雨等[2]對河北、山西和青海等7個(gè)省市的牛血清樣品進(jìn)行了牛副結(jié)核抗體檢測,結(jié)果顯示,7個(gè)省市樣品牛副結(jié)核抗體總陽性率為2.29%。結(jié)果表明,我國山西(3.75%)、西藏(3.5%)等省市的牛副結(jié)核分枝桿菌感染率較高。2015年,崔金磊等[3]對自內(nèi)蒙古自治區(qū)、黑龍江省和湖北省等6個(gè)省(區(qū))規(guī)模化牧場的奶牛血清樣品進(jìn)行了副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測。結(jié)果顯示,6個(gè)省(區(qū))樣品牛副結(jié)核抗體總陽性率為2.59%。結(jié)果表明,我國安徽省(8.00%)、四川省(5.23%)等地規(guī)?；翀瞿膛５母苯Y(jié)核分枝桿菌感染率較高。由此可知,我國多個(gè)省市存在副結(jié)核分枝桿菌的感染,感染率因地而異。由于副結(jié)核病潛伏期長、傳播迅速、分離培養(yǎng)困難,因此加強(qiáng)對該病的實(shí)驗(yàn)室診斷研究與流行病學(xué)調(diào)查對防控該病具有十分重要的意義。ELISA技術(shù)是一種開展牛副結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷的有效手段[4]。由于我國大部分省市的牛均未進(jìn)行副結(jié)核疫苗免疫,因此血清抗體陽性表明其已經(jīng)感染[5-7]。寧夏作為國內(nèi)奶牛主要養(yǎng)殖區(qū),已經(jīng)成為我國主要奶牛業(yè)和乳品工業(yè)基地,并且也成為高效發(fā)展畜牧業(yè)的典范。本試驗(yàn)使用美國 IDEXX公司生產(chǎn)的牛副結(jié)核病抗體ELISA試劑盒對寧夏地區(qū)的牛進(jìn)行了副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測,以期了解和掌握寧夏地區(qū)奶牛副結(jié)核病流行情況,為本病的防控提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑盒 副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測試劑盒,購自美國IDEXX公司。

1.2 樣品 采集寧夏地區(qū)9個(gè)牧場中有疑似副結(jié)核癥狀的奶牛的血清樣品189份(均為2歲齡以上,臨床癥狀表現(xiàn)為體重急劇下降,持續(xù)性下痢,糞便惡臭),低速離心后收獲血清,編號(hào)后置于-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3 設(shè)備 酶標(biāo)儀MULTISKAN MK3(賽默飛世爾儀器有限公司),離心機(jī)(德國Sigma公司);微量移液器(德國Eppendorf有限公司);渦旋儀(上海喬躍電子有限公司);微量反應(yīng)板振蕩器(江蘇南通縣電子分析儀器廠);其余均為常規(guī)實(shí)驗(yàn)室器材。

1.4 方法

1.4.1 試劑保存及使用 副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測試劑盒應(yīng)在2℃ ～8℃條件下保存,使用前所有試劑均需恢復(fù)至室溫。

1.4.2 副結(jié)核分支桿菌抗體檢測 具體操作步驟參考試劑盒說明書(ELISA方法)。

1.4.3 結(jié)果判定 陽性對照平均值(PC)≥0.350,且陽性對照平均值(PC)與陰性對照比值(NCA450)的比值≥3.00的條件下,檢測結(jié)果有效,否則試驗(yàn)不成立,需按操作說明書進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

按照以下公式計(jì)算并進(jìn)行結(jié)果判定：樣品S/P%≤45%,判為MAP抗體陰性;當(dāng)45% ＜S/P% ＜55%,判為可疑;S/P%≥55%,判為MAP抗體陽性。

2 結(jié)果

在采自寧夏地區(qū)9個(gè)奶牛場的189份血清樣品中,檢出副結(jié)核病抗體陽性血樣106份,平均血清陽性率為56.08%,9個(gè)牛場均檢出血清陽性牛,個(gè)體陽性率從20.00% ～86.67%不等,場感染陽性率為100.00%,檢測結(jié)果見表1。

表1 寧夏不同地區(qū)奶牛MAP抗體檢測結(jié)果

3 討論

本試驗(yàn)對采集自寧夏銀川市、吳忠市、中衛(wèi)市等不同地區(qū)9個(gè)規(guī)?；膛龅?89份血清進(jìn)行了副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測,具有一定代表性。檢測結(jié)果顯示,被檢的9個(gè)奶牛場均存在副結(jié)核陽性牛,共檢出副結(jié)核病陽性牛106頭。在檢測的牧場中,牛副結(jié)核病血清陽性率最高可達(dá)86.67%,最低為20%,平均陽性率為56.08% 。歐美和澳大利亞畜群中副結(jié)核病的感染率可達(dá)10% ～55%[8]。黑龍江哈爾濱某轄區(qū)2015年奶牛副結(jié)核病血清學(xué)調(diào)查顯示,該地區(qū)奶牛群的陽性率最高可達(dá)19.1%[9]。該血清學(xué)調(diào)查結(jié)果與上述文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果相比,大部分奶牛場陽性率相對較高,只有個(gè)別奶牛場陽性率較低。由此可見牛副結(jié)核的地方性流行狀況并不容樂觀。

本試驗(yàn)所用試劑盒為美國 IDEXX公司生產(chǎn)的牛副結(jié)核病抗體ELISA試劑盒。該試劑盒中微量反應(yīng)板孔底包被的抗原是副結(jié)核分枝桿菌原液提取物。樣品先和草分枝桿菌提取物預(yù)孵育,中和除去其他非典型分枝桿菌的交叉污染,避免因其他疾病的混合感染對檢測結(jié)果造成影響。ELISA方法具有操作簡單、敏感、快速、主觀因素影響小等優(yōu)點(diǎn)已成為國內(nèi)外動(dòng)物疫病常規(guī)的檢疫方法,是當(dāng)前牛副結(jié)核檢測最常用的方法之一。

副結(jié)核分枝桿菌感染過程極為隱蔽,一年四季均可發(fā)生,通常呈潛伏感染,隱性感染率高,僅有小部分出現(xiàn)臨床癥狀。隱性感染奶?？砷L期向體外排菌,污染環(huán)境,動(dòng)物飲用宿主動(dòng)物污染的水源即可感染該病,因此,病畜是該病重要的傳染源之一。

牛場副結(jié)核病防疫的重點(diǎn)在于對引進(jìn)奶牛嚴(yán)格履行檢疫程序,不從疫區(qū)引進(jìn)奶牛.定期用ELISA方法對奶牛進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查及檢測,連續(xù)檢測2次均為陽性并有臨床癥狀的牛必須淘汰處理。牛場有關(guān)人員應(yīng)當(dāng)重視副結(jié)核病,加強(qiáng)對該病的認(rèn)知程度和防治力度。對表現(xiàn)為持續(xù)性腹瀉癥狀的病牛應(yīng)及時(shí)淘汰,以免造成了污染面擴(kuò)大和同群牛的不斷感染。牛群要定期進(jìn)行監(jiān)測,一般疫區(qū)每年適宜對牛群進(jìn)行3～4次檢疫,且檢出的陽性牛與健康牛完全分離[10]。除水平傳播外,副結(jié)核分枝桿菌還可以通過垂直傳播機(jī)制經(jīng)過胎盤感染胎兒[11]。牛場應(yīng)建立陰性后備牛群,將4月齡以下犢牛與成母牛隔離飼養(yǎng)。

目前,對牛副結(jié)核病尚無有效的治療方法,疫苗接種在許多國家仍然禁止或被嚴(yán)格限制使用?，F(xiàn)階段加強(qiáng)牛副結(jié)核病的檢疫、隔離和淘汰凈化應(yīng)是控制該病的主要方法。因此,應(yīng)對該病給予足夠的重視,及時(shí)采取防控措施,預(yù)防和控制該病的發(fā)生和流行,保障寧夏地區(qū)奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。