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    2012-2017年鄭州地區(qū)無償獻(xiàn)血者核酸檢測結(jié)果分析

    2019-06-18 03:12:14楊琳琳王藝芳葛文超方建華
    關(guān)鍵詞:無償獻(xiàn)血者血站獻(xiàn)血者

    楊琳琳,王藝芳,葛文超,方建華

    (河南省紅十字血液中心檢驗(yàn)科,河南 鄭州 450012)

    《衛(wèi)生事業(yè)發(fā)展“十二五”規(guī)劃》明確提出:要完善無償獻(xiàn)血服務(wù)體系,加強(qiáng)血站血液安全保障能力建設(shè),積極推進(jìn)血站核酸檢測工作,提高血站實(shí)驗(yàn)室檢測能力。為了進(jìn)一步提高血液質(zhì)量和保證血液安全,核酸檢測(NAT)技術(shù)已在我國采供血機(jī)構(gòu)大力推廣和應(yīng)用。NAT能大大縮短經(jīng)血液傳播傳染病毒檢測的“窗口期”,降低輸血傳播傳染病毒的風(fēng)險(xiǎn)[1,2]。從2012年5月開始對本血液中心的無償獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行NAT檢測,本文通過對鄭州地區(qū)無償獻(xiàn)血者的NAT結(jié)果分析,以評估核酸檢測的功效。現(xiàn)報(bào)告如下。

    1 材料與方法

    1.1 標(biāo)本來源 2012年5月-2017年12月本中心和集中化七家中心血站采集的無償獻(xiàn)血者標(biāo)本。獻(xiàn)血者均符合國家《獻(xiàn)血者健康檢查要求》中的相關(guān)要求。所有標(biāo)本的采集、離心、運(yùn)輸和保存均按《血站技術(shù)操作規(guī)程2015版》中相關(guān)要求進(jìn)行操作。

    1.2 主要試劑 HBsAg ELISA檢測試劑盒(北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司;珠海麗珠試劑股份有限公司),抗-HCV ELISA檢測試劑盒(北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司;上??迫A生物工程股份有限公司),抗-HIV1/2 ELISA檢測試劑盒(北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司;法國BIO-RAD公司)。乙型肝炎丙型肝炎人類免疫缺陷病毒(I型)核酸檢測試劑 (上海科華生物工程股份有限公司),Cobas TaqScreen MPX text和Cobas TaqScreen MPX 2.0 text(美國羅氏診斷公司);配套耗材均由各試劑公司提供,均在有效期內(nèi)使用。衛(wèi)計(jì)委臨檢中心鑒別確認(rèn)試驗(yàn)試劑為羅氏定量二代 (美國羅氏診斷公司),乙肝血清學(xué)補(bǔ)充試驗(yàn)試劑為雅培化學(xué)發(fā)光試劑(美國雅培公司)。

    1.3 主要儀器 ELISA檢測使用:Hamilton Star全自動(dòng)加樣儀(瑞士HAMILTON公司)和FAME酶免分析儀(瑞士HAMILTON公司)。核酸檢測使用:Hamilton Star全自動(dòng)混樣儀 (瑞士HAMILTON公司),ABI 7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國ABI公司),Cobas AmpLiPrep核酸提取儀和Cobas Taq-Man Analyzer核酸擴(kuò)增檢測儀通過混樣和數(shù)據(jù)管理服務(wù)器(PDM)連接組成羅氏診斷Cobas's 201血液核酸血篩平臺(簡稱CAP/CTM),低溫大容量離心機(jī)KUBOTA 8730(日本KUBOTA公司)。

    1.4 檢測方法 ELISA檢測和NAT檢測嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作和判定結(jié)果[3]。

    1.5 NAT陽性標(biāo)本的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)和血清學(xué)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)采用實(shí)驗(yàn)室的另一種NAT試劑NAT陽性標(biāo)本進(jìn)行確認(rèn),并送衛(wèi)計(jì)委臨檢中心做乙肝血清學(xué)補(bǔ)充試驗(yàn)[3]。

    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,采用χ2檢驗(yàn),P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 NAT檢測結(jié)果 對ELISA檢測陰性(酶免雙試劑陽性標(biāo)本除外)的其中571028例標(biāo)本進(jìn)行NAT結(jié)果,共檢出346例HBV DNA+、2例HCV RNA+和10例HIV RNA+。總的NAT陽性率為0.63‰。見表1。

    2.2 NAT陽性標(biāo)本的再檢結(jié)果 40例NAT陽性標(biāo)本經(jīng)另一種試劑(羅氏二代)確認(rèn),27例為NAT陽性,檢出率為67.50%。見表2。

    2.3 乙肝血清學(xué)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)結(jié)果 38例送檢標(biāo)本乙肝“兩對半”結(jié)果的血清學(xué)模式:5例單純抗-HBs陽性 (13.16%);4例乙肝 “兩對半”結(jié)果為陰性(10.53%);29例抗-HBc陽性(76.31%),其中有 1例HBsAg已轉(zhuǎn)為陽性。見表3。

    3 討論

    由于病毒抗原、抗體蛋白結(jié)構(gòu)的變異,造成“窗口期”漏檢的存在,常規(guī)的酶免檢測對經(jīng)血傳播傳染疾病的風(fēng)險(xiǎn)不能完全避免[2]。而核酸檢測技術(shù)(NAT)敏感性較高,在病毒感染后數(shù)天即能檢出標(biāo)本中的極微量的病毒核酸,可大大縮短 “窗口期”,發(fā)現(xiàn)隱匿性病毒感染,減少因ELISA漏檢而造成的輸血后病毒感染[3,4]。

    在獻(xiàn)血者血液篩查中引入NAT,其主要目的是檢測出原有ELISA可能漏掉的具有感染性的獻(xiàn)血者樣本。從2012年5月到2017年12月采用科華核酸檢測系統(tǒng)共檢測了571028例標(biāo)本,共檢出346例 HBV DNA+、2例 HCV RNA+和 10例 HIV RNA+??偟腘AT陽性率為0.63‰和上海0.63‰[5]一致,低于西安 0.66‰[6]、 杭州 2.00‰[7]、 合肥1.62‰[8]、烏魯木齊 1.10‰[9]和南京 0.94‰[10]。 總有效拆分率56.38%也高于實(shí)驗(yàn)室之前報(bào)道該試劑的33.33%[3]。除2012年外,不同年份間NAT陽性率和不同年份拆分陽性率之間有差異。2012年沒有NAT陽性標(biāo)本檢出,2013年和2014年NAT陽性率和拆分陽性率保持在一個(gè)比較平穩(wěn)的狀態(tài),分析可能原因:在開展核酸檢測的第1年,實(shí)驗(yàn)室各方面條件還不夠成熟,工作人員對儀器和試劑的性能不夠了解,操作不夠熟練。隨著標(biāo)本量的增加以及工作人員的操作逐漸熟練,陽性率相對平穩(wěn)。和2013年和2014年相比,2015年和2016年NAT陽性率和拆分陽性率都有上升,查看實(shí)驗(yàn)記錄后發(fā)現(xiàn):在2015年上半年只用該系統(tǒng)檢測了兩萬份左右標(biāo)本,陽性率和拆分陽性率與之前持平,在2015年11月開展了核酸集中化檢測直到2016年底結(jié)束。分析原因可能是:7個(gè)血站的標(biāo)本全部送到血液中心集中檢測,檢測前大批量的標(biāo)本處理,可能會造成一些假陽性;各個(gè)單位血液篩查實(shí)驗(yàn)室的酶免檢測HBsAg/抗-HCV/抗-HIV1/2所用試劑、設(shè)備和人員操作水平以及地區(qū)流行病學(xué)特點(diǎn)也不盡相同,可能在某種程度上提升了NAT陽性率。2017年NAT陽性率下降可能與所檢測無償獻(xiàn)血人群標(biāo)本HBV、HCV、HIV的感染率有關(guān)。40例NAT陽性標(biāo)本經(jīng)羅氏二代試劑檢測,確認(rèn)檢出率為67.50%。NAT陽性標(biāo)本的確認(rèn)對科華核酸檢測系統(tǒng)的檢出率起到了監(jiān)控作用,本實(shí)驗(yàn)室已開始對確認(rèn)結(jié)果不一致的獻(xiàn)血者進(jìn)行追蹤隨訪并將其血漿標(biāo)本送檢第三方實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)。

    表1 2012~2016年核酸檢測結(jié)果(n=571028)

    表2 NAT陽性標(biāo)本的再檢確認(rèn)結(jié)果(n=40)

    表3 NAT陽性標(biāo)本的乙肝“兩對半”血清學(xué)模式(n=38)

    目前,鄭州地區(qū)無償獻(xiàn)血者的HBV感染率較高,輸血傳播HBV殘余風(fēng)險(xiǎn)明顯高于HCV和HIV,HBV DNA陽性346例,占96.80%。筆者對38例HBV DNA陽性標(biāo)本進(jìn)行了血清學(xué)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):5例單純抗-HBs陽性(13.16%);4例乙肝“兩對半”結(jié)果為陰性(10.53%),這4例可能為“窗口期”感染;29例為抗-HBc陽性(76.31%),其中有1例HBsAg已轉(zhuǎn)為陽性,其余標(biāo)本若證實(shí)為隱匿性HBV感染(OBI),說明鄭州地區(qū)輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)主要來自于OBI。目前,本實(shí)驗(yàn)室已建立了ELISA陰性NAT陽性獻(xiàn)血者追蹤隨訪程序,便于適時(shí)監(jiān)測輸血傳染病的血清轉(zhuǎn)化情況。在追蹤的獻(xiàn)血者中,其中1例HCV RNA陽性的獻(xiàn)血者,在追蹤第6周時(shí)獻(xiàn)血者抗-HCV完全轉(zhuǎn)為陽性[11]。

    綜上所述,NAT能從ELISA檢測陰性的無償獻(xiàn)血者標(biāo)本中檢出漏檢的病毒感染者,降低輸血感染病毒的風(fēng)險(xiǎn),是ELISA檢測的有力補(bǔ)充。核酸檢測應(yīng)用于鄭州地區(qū)血液篩查是十分可行且有效地保障了臨床輸血安全。

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