黃緣閉殼龜產(chǎn)卵孵化的對(duì)比試驗(yàn)

黃勇 ，郭良鑫 ，畢冠蘭 ，歐陽(yáng)鑫 ，賀勝利

（1.信陽(yáng)市水產(chǎn)技術(shù)推廣站，河南 信陽(yáng) 464031;2.信陽(yáng)市水產(chǎn)科學(xué)研究所，河南 信陽(yáng) 464031）

黃緣閉殼龜（Cuora flavomarginata），別名黃緣盒龜，俗稱夾板龜、斷板龜、金頭龜、黃板龜?shù)龋瑢倥佬芯V，龜鱉亞綱，龜鱉目，曲頸龜亞目，地龜科，閉殼龜屬，其主要食性為雜食性，以動(dòng)物性餌料為主，在野外條件下主要喜食蚯蚓、蛞蝓、蜈蚣、金龜子、蝸牛等，在動(dòng)物性餌料缺乏時(shí)，也食些植物性餌料，如青菜葉、瓜果等；人工養(yǎng)殖可喂些動(dòng)物肉、內(nèi)臟、人工配合飼料以及西紅柿香蕉等水果。黃緣閉殼龜為水陸兩棲龜類(lèi)，以陸棲為主，不能長(zhǎng)時(shí)間生活在干燥的環(huán)境里，喜歡經(jīng)常洗浴和飲水，多生活于山區(qū)丘陵地帶，多見(jiàn)于陰暗潮濕有水的樹(shù)根石縫等處。高溫季節(jié)晝伏夜出，春秋兩季在有陽(yáng)光時(shí)，白天喜出來(lái)曬太陽(yáng)，在氣溫低于10℃左右時(shí)，即進(jìn)入冬眠狀態(tài)。黃緣閉殼龜在野外生長(zhǎng)條件下7—8齡后達(dá)到性成熟，在人工培育條件下可提前1～2年達(dá)到。其發(fā)情交配期在每年5—10月，集中產(chǎn)卵期信陽(yáng)地區(qū)為5月中旬至7月中旬。雌龜正常每年可產(chǎn)卵1～2次，每次產(chǎn)卵1～4枚。近年來(lái)隨著自然生態(tài)環(huán)境的不斷惡化以及人類(lèi)的濫捕濫捉等原因，致使黃緣閉殼龜野生種群數(shù)量急劇減少，因此開(kāi)展黃緣閉殼龜救護(hù)繁殖等方面的研究具有十分重要的意義。作者在2018年對(duì)黃緣閉殼龜野生個(gè)體與人工培育子一代個(gè)體的產(chǎn)卵孵化做了對(duì)比試驗(yàn)，結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 黃緣閉殼龜野生個(gè)體

親龜是2006年來(lái)自信陽(yáng)大別山區(qū)的野生個(gè)體，個(gè)體當(dāng)時(shí)全部達(dá)到性成熟，人工飼養(yǎng)至今。龜齡為20—30齡，產(chǎn)卵12年以上，其中雌龜68只，平均體質(zhì)量為925 g/只；雄龜26只，平均體質(zhì)量為650 g/只。雄龜與雌龜在每年的4月下旬至7月中旬分開(kāi)飼養(yǎng)，待雌龜結(jié)束產(chǎn)卵后合并在一起飼養(yǎng)，雌雄親龜均自然交配，自然產(chǎn)卵。

1.2 黃緣閉殼龜人工培育子一代

親龜是2009年野生個(gè)體繁育的子一代，人工飼養(yǎng)至今。親龜體質(zhì)健壯，體型飽滿，外觀漂亮，無(wú)傷無(wú)病，活潑好動(dòng)，反應(yīng)靈活，已全部達(dá)到性成熟，龜齡為9齡，產(chǎn)卵2～3年，其中雌龜68只，平均體質(zhì)量為784 g/只；雄龜19只，平均體質(zhì)量為532 g/只。雄龜與雌龜在每年的4月下旬至7月中旬分開(kāi)飼養(yǎng)，待雌龜結(jié)束產(chǎn)卵后合并在一起飼養(yǎng)。雌雄親龜均自然交配，自然產(chǎn)卵。

1.3 親龜池的建造

野生個(gè)體與人工培育的子一代親龜在自然條件相同的兩個(gè)龜池內(nèi)分開(kāi)飼養(yǎng)。龜池均建在環(huán)境安靜、背風(fēng)向陽(yáng)的地方，池長(zhǎng)12 m，池寬5 m，池高0.6 m，池壁光滑，由水泥和磚塊建成，并附有防逃檐。池底平整，由泥土建成，呈緩坡?tīng)?，坡?0°左右。池內(nèi)植有喬木和灌木，有常青落葉植被，占池內(nèi)總面積的三分之二，有遮蔭降溫作用。龜池內(nèi)建有龜休息區(qū)、產(chǎn)卵場(chǎng)、飲水洗澡區(qū)、活動(dòng)區(qū)等不同的功能區(qū)，整個(gè)養(yǎng)殖區(qū)域模擬仿生態(tài)的自然環(huán)境建設(shè)。

1.4 親龜?shù)娜粘ｏ曫B(yǎng)及管理

待驚蟄后，氣溫穩(wěn)定且平均值達(dá)到16℃以上時(shí)，于2018年4月28日的晴天上午將親龜從越冬池內(nèi)移到消過(guò)毒的飼養(yǎng)池內(nèi)，雌雄親龜分開(kāi)飼養(yǎng)。投喂嚴(yán)格按照“四定”的要求，用浙江產(chǎn)的某牌金龜料、鮮蝦、西紅柿、胡蘿卜、南瓜和珠海某牌龜鱉多蛋素等原料按照一定比例配比而成的餌料，按照體質(zhì)量 1%～3%的日給餌率，于每日 15：00—17：00放入投飼盤(pán)內(nèi)投喂，1 h左右吃完為宜。每天對(duì)飲水洗澡區(qū)進(jìn)行清理，并及時(shí)注入新水，保證水質(zhì)符合漁業(yè)養(yǎng)殖用水標(biāo)準(zhǔn)。每日早、中、晚對(duì)龜池巡視，觀察龜?shù)臄z食、交配、產(chǎn)卵等活動(dòng)，保持良好的生態(tài)環(huán)境，防止敵害生物的入侵、龜?shù)奶右?，檢查龜體有無(wú)病傷，及時(shí)發(fā)現(xiàn)疾病并準(zhǔn)確診斷對(duì)癥下藥，認(rèn)真做好生產(chǎn)日志記錄。親龜從2018年4月28日移出室外飼養(yǎng)至2018年11月15日進(jìn)入越冬房冬眠，全年室外生產(chǎn)管理共計(jì)185 d。

1.5 龜卵的收集

黃緣閉殼龜?shù)淖钸m產(chǎn)卵氣溫是25～35℃。信陽(yáng)地區(qū)為5月中旬至7月中旬，其中6月為產(chǎn)卵高峰期。在產(chǎn)卵期開(kāi)始前，先將產(chǎn)卵場(chǎng)中25 cm厚的細(xì)沙徹底翻動(dòng)一遍，然后噴灑適量的水，使沙層的含水量保持在7%左右。黃緣閉殼龜通常在傍晚產(chǎn)卵，管理人員每天傍晚時(shí)觀察雌龜?shù)漠a(chǎn)卵情況，確定產(chǎn)卵位置。次日清晨，在產(chǎn)卵場(chǎng)找到產(chǎn)卵窩后，用手輕輕扒開(kāi)卵窩上的沙土，將龜卵小心取出輕放在盛卵器中，放置龜卵時(shí)避免龜卵的滾動(dòng)、撞擊、擠壓、陽(yáng)光直射等。采卵結(jié)束后，整理好產(chǎn)卵場(chǎng)，做好產(chǎn)卵記錄。黃緣閉殼龜野生個(gè)體從5月14日產(chǎn)卵開(kāi)始至7月19日結(jié)束，共產(chǎn)卵89窩，收集龜卵232枚；黃緣閉殼龜人工培育子一代從5月14日產(chǎn)卵開(kāi)始至6月28日結(jié)束，共產(chǎn)卵49窩，收集龜卵133枚。

1.6 龜卵的孵化

1.6.1 孵化設(shè)施的前期準(zhǔn)備 孵化房間面積為28 m2，具有良好的保濕保溫效果，內(nèi)裝有排氣扇、自動(dòng)檢測(cè)溫濕度的設(shè)備。孵化箱為規(guī)格50 cm×50 cm×40 cm、底部及箱壁有通氣孔的泡沫箱。孵化基質(zhì)為直徑0.4～0.6 cm的膨化蛭石。房間內(nèi)另配有溫度計(jì)、濕度計(jì)、淋水器、水桶等生產(chǎn)工具。

在產(chǎn)卵期開(kāi)始前半月，將孵化房間徹底清掃并采取全室噴灑二氧化氯的方式進(jìn)行殺菌消毒，將孵化箱用高錳酸鉀進(jìn)行浸泡后曝曬，將孵化基質(zhì)進(jìn)行曝曬消毒，最大限度營(yíng)造無(wú)菌環(huán)境。

1.6.2 龜卵的人工孵化 孵化前，在每個(gè)泡沫箱內(nèi)裝入4 kg蛭石，并按照每1 kg蛭石淋入0.7 kg純凈水的比例調(diào)配好，放入龜卵后在箱體上用記號(hào)筆標(biāo)注產(chǎn)卵日期、產(chǎn)卵池號(hào)、窩數(shù)、卵編號(hào)等。為了便于觀察龜卵的發(fā)育情況，2018年采用了半裸露孵化法進(jìn)行孵化。將受精卵的動(dòng)物極向上、沒(méi)有顯現(xiàn)受精的卵可隨意平放，輕輕覆上基質(zhì)，使龜卵面的中央部分約1/6裸露在空氣中，然后蓋上箱蓋。在整個(gè)孵化過(guò)程中，孵化箱不采取任何加溫加濕措施，使龜卵在房間中正常孵化直至破殼出苗。

在孵化過(guò)程中，不隨意翻動(dòng)受精卵，以免造成胚胎死亡。室內(nèi)空氣干燥時(shí)，及時(shí)向空氣中噴灑水霧，使室內(nèi)的濕度在孵化期內(nèi)始終保持在75%～99%。每日早、晚各巡視1次，檢查濕度、溫度、空氣流通性、受精卵發(fā)育、破殼出苗等情況，及時(shí)清除霉變、壞死及未受精的卵，防止蛇、鼠等敵害生物的危害，并做好孵化記錄。

1.7 稚龜?shù)氖占?/h3>

受精卵發(fā)育到第6胚胎期時(shí)，胎體各器官基本發(fā)育成形，對(duì)于外界刺激開(kāi)始有反應(yīng)，即將破殼時(shí)，稚龜用喙輕啄蛋殼，啄出小洞再逐漸擴(kuò)大，經(jīng)過(guò)1～2 d可破殼而出。破殼后，稚龜會(huì)迅速鉆入蛭石中。第2天取出稚龜，放入20 g/m3的高錳酸鉀溶液中浸泡10 min，隨后將清洗過(guò)的稚龜，按照每平方米50只的密度放入消過(guò)毒的稚龜飼養(yǎng)箱中進(jìn)行飼養(yǎng)管理。對(duì)于少量卵黃囊吸收不徹底的稚龜，放入無(wú)菌器具中，1～3 d后卵黃囊可自行吸收干凈。

2 結(jié)果

2.1 黃緣閉殼龜野生個(gè)體

野生個(gè)體雌龜68只，雄龜26只，產(chǎn)卵時(shí)間為2018年5月14日至2018年7月18日。在整個(gè)孵化期，孵化室內(nèi)空氣平均濕度為83.6%，空氣平均溫度為29.1℃，野生個(gè)體所產(chǎn)龜卵孵化的有效積溫為2 062～2 308度日。產(chǎn)卵及受精孵化情況見(jiàn)表1。

表1 野生個(gè)體的產(chǎn)卵及受精孵化情況統(tǒng)計(jì)表

2.2 黃緣閉殼龜人工培育子一代個(gè)體

人工培育子一代個(gè)體雌龜68只，雄龜19只，產(chǎn)卵期為2018年5月14日至2018年6月27日。在整個(gè)孵化期，孵化室內(nèi)空氣平均濕度為83.6%，空氣平均溫度為29.1℃，人工培育子一代個(gè)體所產(chǎn)龜卵孵化的有效積溫為2 016～2 336度日。黃緣閉殼龜人工培育子一代個(gè)體產(chǎn)卵及受精孵化情況見(jiàn)表2。

表2 人工培育子一代個(gè)體的產(chǎn)卵及受精孵化情況統(tǒng)計(jì)表

3 討論

由表1可知，野生黃緣閉殼龜雌龜共計(jì)產(chǎn)卵232枚，平均每只雌龜產(chǎn)卵3.41枚，平均每枚龜卵體質(zhì)量16.87 g。由表2可知，人工培育子一代雌龜共計(jì)產(chǎn)卵133枚，平均每只雌龜產(chǎn)卵1.96枚，平均每枚龜卵體質(zhì)量11.32 g。對(duì)比發(fā)現(xiàn)，無(wú)論在雌龜平均產(chǎn)卵數(shù)量還是在產(chǎn)卵平均體質(zhì)量方面，野生個(gè)體雌龜都要優(yōu)于人工培育子一代個(gè)體雌龜，說(shuō)明野生個(gè)體雌龜?shù)纳芰h(yuǎn)優(yōu)于人工培育子一代個(gè)體雌龜。造成這一現(xiàn)象的原因可能有以下3個(gè)方面：一是野生個(gè)體被捕獲時(shí)已達(dá)性成熟，體質(zhì)健壯，生命力頑強(qiáng)，人工培育子一代個(gè)體由野生個(gè)體交配所產(chǎn)，經(jīng)人工培育而達(dá)性成熟，故在物種基因遺傳繁育性方面有一定差別；二是野生個(gè)體的平均體質(zhì)量為828 g/只，人工培育子一代個(gè)體的平均體質(zhì)量為729 g/只，野生個(gè)體的平均體質(zhì)量大于人工培育子一代個(gè)體；三是野生個(gè)體龜齡為20—30齡，都產(chǎn)卵10年以上，可能正處于產(chǎn)卵較理想的龜齡；人工培育子一代個(gè)體龜齡為9齡，才產(chǎn)卵2年左右，可能正處于初產(chǎn)期，野生個(gè)體的生殖系統(tǒng)比人工培育子一代個(gè)體的生殖系統(tǒng)更加成熟穩(wěn)定。

野生黃緣閉殼龜所產(chǎn)卵的受精率為73.71%。人工培育子一代黃緣閉殼龜所產(chǎn)卵的受精率為48.12%。對(duì)比發(fā)現(xiàn)，野生個(gè)體所產(chǎn)卵的受精率要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于與子一代個(gè)體所產(chǎn)卵的受精率。這種現(xiàn)象可能由以下3種原因造成：一是野生個(gè)體雄龜與雌龜?shù)呐浔葹?.0：2.6，人工培育子一代個(gè)體雄龜與雌龜?shù)呐浔葹?.0：3.6，野生個(gè)體的雌雄配比更為合理；二是野生個(gè)體的雄龜和雌龜在一起飼養(yǎng)10年以上，群體結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定不變，雄龜和雌龜間的信息交流更為順暢；三是野生個(gè)體雄龜?shù)纳诚到y(tǒng)發(fā)育成熟穩(wěn)定，個(gè)體平均體質(zhì)量更大，其精子的結(jié)和力更強(qiáng)更有旺盛。

野生黃緣閉殼龜所產(chǎn)卵的孵化率為88.30%，人工培育子一代黃緣閉殼龜所產(chǎn)卵的孵化率為89.06%。二者所產(chǎn)卵的孵化率基本接近，但孵化率仍然不高?？赡苡梢韵?個(gè)原因造成：①雄龜?shù)捏w質(zhì)不夠強(qiáng)壯，精子質(zhì)量欠佳，致使卵子出現(xiàn)弱精或不受精的現(xiàn)象；②受精卵在室內(nèi)自然孵化，較易受外界溫度、濕度等因子的變化影響；③工作人員的生產(chǎn)管理操作不規(guī)范，造成受精卵的受傷、滾動(dòng)、破損、細(xì)菌感染等情況的發(fā)生。

綜上，可以從以下5個(gè)方面來(lái)提高黃緣閉殼龜?shù)漠a(chǎn)卵量、受精率及孵化率：①科學(xué)引進(jìn)種龜。選擇種龜時(shí)盡量選擇個(gè)體大，活力強(qiáng)，基因純正的個(gè)體，不要選擇雜種和近親繁育個(gè)體；②加強(qiáng)親龜?shù)呐嘤?。營(yíng)造良好的仿生態(tài)環(huán)境，合理投喂全價(jià)配合飼料，及時(shí)做好疾病的診治和預(yù)防，保證親龜?shù)慕洋w質(zhì)；③合理搭配雌雄配比。盡量使雄龜和雌龜?shù)呐浔缺３衷?：2左右，最大限度保證雌龜和雄龜?shù)慕慌湫?；④確保雄龜和雌龜搭配的穩(wěn)定性。保證龜池內(nèi)群體結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定，不要隨意引進(jìn)和替換新龜；⑤掌握孵化關(guān)鍵技術(shù)。在人工孵化過(guò)程中，準(zhǔn)確把握好所需溫度、濕度，保證孵化室的通氣性，做到精細(xì)管理，減少生態(tài)因子的變化對(duì)胚胎發(fā)育所造成的刺激。