不同產(chǎn)地5種中藥材安全限量研究
——農(nóng)藥殘留分析

4

1.貴陽中醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽 550025；2.安順市食品藥品檢驗所，貴州 安順 561000；3.貴州廣濟堂藥業(yè)有限公司，貴州 貴陽 550014；4.貴陽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，貴州 貴陽 550001

隨著中藥的國際化發(fā)展，衡量中藥品質(zhì)標準除了自身有效性，還有安全性。其中影響中藥材品質(zhì)的原因包括缺乏規(guī)范性種植以及農(nóng)藥的濫用造成農(nóng)殘超標現(xiàn)象[1-2]。因此改善中藥材的外源性污染是保障中藥安全性，也是中醫(yī)藥國際化的基本要求[3]。有機氯類農(nóng)藥其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，在常規(guī)條件下具有不易揮發(fā)的特點，只能在環(huán)境中通過自身緩慢的降解。因此，在禁用10余年后，仍能在土壤和生物體內(nèi)找到殘留[4]。

2015版《中國藥典》[5]只規(guī)定4種藥材的有機氯農(nóng)藥殘留限度，具有農(nóng)殘限度規(guī)定的藥材品種較少，但農(nóng)殘超標現(xiàn)象普遍存在，嚴重影響中藥市場國際化的發(fā)展?！端幱弥参锛爸苿┩饨?jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標準》[6]是中華人民共和國藥用植物及其制劑在對外經(jīng)濟貿(mào)易活動中重要的外經(jīng)貿(mào)質(zhì)量標準之一，適用于藥用植物原料及制劑的品質(zhì)檢驗，其中對農(nóng)藥殘留限度規(guī)定：六六六(BHC)≤0.1 μg/g；滴滴涕(DDT)≤0.1 μg/g；五氯硝基苯(PCNB)≤0.1 μg/g。氣相色譜法是農(nóng)藥殘留檢測的主要方法，該方法樣品前處理技術(shù)簡便易行，適用于大批量藥材的測定，方法快速、成本較低，結(jié)果良好，在檢測有機氯類農(nóng)藥中占主導(dǎo)地位[7-8]。有學(xué)者采用氣相色譜法對中藥三七中的農(nóng)藥殘留進行了測定，其結(jié)果顯示該方法可行[9]。本實驗所檢測的太子參、魚腥草、茯苓、野菊花等中藥材來源于全國各地，應(yīng)嚴格控制中藥材安全限量檢查。因此本實驗應(yīng)用2015版藥典氣相色譜法，同時選用Rtx-1701彈性石英毛細管進行檢查，結(jié)果顯示此條件下9種農(nóng)藥達到良好的基線分離。因此對不同產(chǎn)地5種中藥材總六六六、總滴滴涕和五氯硝基苯9 種有機氯農(nóng)藥殘留進行測定，提高傳統(tǒng)中藥材的用藥質(zhì)量，為建全和完善中藥材中有機氯農(nóng)藥殘留量檢測方法提供依據(jù)的同時，推進中藥材的規(guī)范化種植，加快中藥的國際化進程。

1 儀器與材料

1.1 實驗藥材 實驗所用三七產(chǎn)于云南、廣西。野菊花產(chǎn)于湖北、四川、山西、貴州、安徽。茯苓產(chǎn)于貴州、安徽、云南。魚腥草產(chǎn)于貴州、四川、重慶。太子參產(chǎn)于貴州、江西、安徽、江蘇、陜西、福建。所有藥材經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院植物栽培教研室魏升華教授鑒定，均符合《中國藥典》2015版一部的要求。

1.2 農(nóng)藥標準品 α-BHC標準品、γ-BHC標準品、β-BHC標準品、δ-BHC標準品、p,p′-DDE標準品、p,p′-DDT標準品、p,p′-DDD標準品、p,p′-DDT標準品、PCNB五氯硝基苯標準品，標準值100 μg/mL；純度均為99%以上(購于：北京中科質(zhì)檢生物技術(shù)有限公司)。

1.3 儀器 2010PIΜS島津氣相色譜儀(島津公司)；TG16WS臺式高速離心機(湘儀離心機儀器有限公司)；KQ3200D.E數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；BSA224S電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)。

1.4 試劑 氮氣純度>99.99%(安順光大氣廠)，氯化鈉、無水硫酸鈉、石油醚、二氯甲烷、濃硫酸、丙酮均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 氣相色譜條件 參照2015版《中國藥典》第四部農(nóng)藥殘留量測定法第一法項下“9種有機氯類農(nóng)藥殘留量測定法”，以Rtx-1701彈性石英毛細管柱(30 m×0.32 mm×0.25 μm)，Ni～ECD電子捕獲檢測器。進樣口溫度230 ℃，檢測器溫度300 ℃，不分流進樣。程序升溫：初始100 ℃，每分鐘10 ℃升至220 ℃；每分鐘8 ℃，升至250 ℃，保持10 min。

2.2 混合對照品制備 精密稱取六六六 (α-BHC，β-BHC，γ- BHC，δ-BHC)、滴滴涕(p,p′-DDE，p,p′-DDD，o,p′-DDT，p,p′-DDT) 及五氯硝基苯(PCNB)農(nóng)藥對照1 mL，標準值100 μg/mL。用石油醚(60～90 ℃)分別制成每1 mL約含2～3 μg的溶液，即得各對照品貯備溶液；精密量取上述各對照品貯備液1 mL，置25 mL量瓶中，用石油醚(60～90 ℃)稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品制備 參照2015版《中國藥典》第四部農(nóng)藥殘留量測定法第一法項下“9種有機氯類農(nóng)藥殘留量測定法”，同法制備樣品，即得。具體操作如下所述：取供試品，粉碎成粉末(過3號篩)，取約2 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，加水20 mL浸泡過夜，精密加丙酮40 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用丙酮補足減失的重量，再加氯化鈉約6 g，精密加二氯甲烷30 mL，稱定重量，超聲15 min，再稱定重量，用二氯甲烷補足減失的重量，靜置分層后，取有機相移入100 mL裝有適量無水硫酸鈉的錐形瓶中，放置4 h。精密量取35 mL，在40 ℃水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油醚(60～90 ℃)如前反復(fù)操作3次將二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚(60～90 ℃)溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL具塞刻度離心管中，精密稀釋至5 mL，小心加入硫酸l mL，振搖1 min，離心(3000 rpm)10 minn，精密量取上清液2 mL，置具刻度的1 mL容量瓶中，用氮氣將溶液濃縮至適量，并精密稀釋至l mL，即得。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 專屬性實驗 分別精密吸取各對照品貯備溶液1 μL，進行分析得到9種有機氯保留時間如下表1所示，色譜圖如圖1、2所示。

圖1 混合對照品溶液色譜圖氣相色譜圖

圖2 空白樣品色譜圖

表1 9種有機氯農(nóng)藥對照品的保留時間

2.4.2 精密度試驗 按“2.1”項色譜條件，精密吸取混合對照品溶液1 μL，連續(xù)進樣6次，測定各有機氯峰面積，并記錄結(jié)果。通過統(tǒng)計顯示9種有機氯的RSD為2.26%～4.52% ，表明儀器精密度良好，符合要求。

2.4.3 重復(fù)性試驗 參照“2.3”項下的供試品溶液的制備方法，平行制備6份樣品溶液，將樣品溶液進行檢測并計算其RSD在6.45%～7.82%，表明該方法重復(fù)性良好，符合要求。

2.4.4 線性考察 吸取混合對照品儲備液，制成濃度為0、1、5、10、50、100 μg/L的溶液，進樣1μL，按“2.1”項色譜條件測定，得到9種有機氯的線性R2均大于0.995，符合要求。最低檢測限在0.00012～0.00057。線性關(guān)系方程見表2。

表2 9種有機氯對照品回歸方程

2.4.5 空白加樣回收實驗 通過檢測發(fā)現(xiàn)中藥中有機氯含量均低，且有些農(nóng)殘成分未被檢出，通過精密度實驗得知實驗穩(wěn)定性良好。因此本實驗采用空白溶劑加標準品后，按“2.2”項制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液1 μL，按“2.1”項色譜條件，得到實驗的回收率：總六六六為94.35%～105.09%；總滴滴涕為93.18%～101.44%；五氯硝基苯為77.90%～117.83%；表明該方法合理，可用于有機氯農(nóng)藥殘留量的測定，實驗結(jié)果見表3。

表3 空白加樣回收率試驗結(jié)果 (n=6)

2.5 樣品的測定 按“2.2”項制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液1 μL，按“2.1”項色譜條件測定，結(jié)果顯示三七中農(nóng)殘含量最高是p,p′-DDT為0.775 μg/g，野菊花中農(nóng)殘含量最高是p,p′-DDE為0.2 μg/g，茯苓中農(nóng)殘含量最高是β-BHC為0.057 μg/g，其中不同產(chǎn)地的太子參中只含o,p′-DDT農(nóng)殘最高為0.325 μg/g，魚腥草中農(nóng)殘含量最高是δ-BHC為0.264 μg/g，詳見表4。

2.6 箱型圖統(tǒng)計分析 由于測定樣品數(shù)量較大，數(shù)據(jù)結(jié)果較為分散，為更好地統(tǒng)計數(shù)據(jù)結(jié)果，采用SPSS 22.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，可看出5種藥材的不同有機氯農(nóng)殘數(shù)據(jù)分布較集中，少數(shù)出現(xiàn)異常值，其中有8個極端異常值大于0.1 μg/g，為農(nóng)藥殘留超標。不同中藥品種同種農(nóng)殘的箱型圖，如圖3所示。

表4 9種中藥材中9種有機氯殘留量 /μg/g

2.7 樣品各元素超標現(xiàn)象 現(xiàn)行《藥用植物及制劑進出口綠色行業(yè)標準》和《中國藥典》2015版限量指標綜合為：總六六不得超過0.1 μg/g；總滴滴涕不得超過0.1 μg/g；五氯硝基苯不得超過0.1 μg/g。對9種中藥材中總六六六(α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC)、總滴滴涕(p,p′-DDE、p,p′-DDD、o,p′-DDT、p,p′-DDT)和五氯硝基苯(PCNB)的9種有機氯農(nóng)藥殘留量進行測定，進行統(tǒng)計，從藥材品種分析，其中全草類藥材魚腥草3批，花類藥材野菊花有2批，根莖類藥材三七、太子參共2批超標；所有樣品超標情況及對相應(yīng)樣品種類見表5。

表5 9種中藥材農(nóng)殘超標數(shù)量及超標率

3 討論

中藥農(nóng)藥殘留具有普遍性，其中農(nóng)藥有機氯在中藥材中超標率和檢出率較高[10]。本研究采用氣相色譜法對9 種有機氯農(nóng)殘進行測定，結(jié)果顯示：5種藥材都不同程度的存在有機氯農(nóng)藥殘留，參考《中國藥典》和《藥用植物及制劑外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標準》收載的品種項下“農(nóng)藥殘留量”部分檢查限度，50批中藥材有機氯農(nóng)藥檢出率為50%，但普遍含量低，其中總六六和總滴滴涕超標率分別為10%和6%，50批中藥材整體合格率達84%。從藥材品種上分析，花類藥材如野菊花，全草類藥材如魚腥草，多年生根和根莖類藥材如三七農(nóng)藥殘留污染比較其他藥材嚴重。其中茯苓農(nóng)藥殘留只有痕量檢出，并無超標；野菊花有批2超標，魚腥草有3批超標，可能在種植過程中，農(nóng)藥直接噴灑于植株的花，葉上造成污染，且花類和全草類中藥炮制簡單、貯藏期短，使農(nóng)藥殘留沒有得到代謝；太子參只有1批藥材檢出農(nóng)殘，由農(nóng)戶幫忙于野生太子參采收，再按2015版藥典標準炮制成符合要求飲片，采收加工無明顯接觸農(nóng)殘過程，因此農(nóng)藥殘留幾乎沒有；三七1批超標，農(nóng)殘含量最高是p,p′-DDT為0.775μg/g，在不同藥用部位的農(nóng)藥污染程度不同，三七由于栽培年限長(2～3年)，且又生長于蔭蔽高濕的栽培環(huán)境下，三七病害較多且蔓延迅速，因此農(nóng)殘污染相對嚴重。綜上所述，發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥在藥用植物體內(nèi)的分布隨藥材種類、產(chǎn)地和藥用部位不同而各異。由于中藥材使用前多經(jīng)復(fù)雜炮制、貯藏，很多農(nóng)藥已大部分代謝，因此殘留水平并不高。在中藥種植和生產(chǎn)過程中，如土壤、水源、大氣等污染，在中藥材采收、加工、保存、運輸過程中也會造成的農(nóng)藥污染。

對中藥材農(nóng)藥殘留量進行監(jiān)測是較復(fù)雜的技術(shù)，因此制訂科學(xué)、有效的檢測技術(shù)平臺是控制中藥外源性有害殘留物首要措施。研究對有關(guān)中藥農(nóng)殘控制中的應(yīng)用進行了簡要概述，對中藥農(nóng)藥殘留分析中的應(yīng)用做了有益的探討，從而為構(gòu)建中藥質(zhì)量體系提供參考，并提升中藥材的國際形象。