棉花黃萎病生物防治研究進展

徐婭 謝成建 楊星勇

摘要棉花黃萎病是由對寄主有強致病力和優(yōu)勢適應(yīng)性的大麗輪枝菌（Verticillium dahliae）引起的土傳性真菌病害，嚴重影響我國棉花生產(chǎn)可持續(xù)發(fā)展。生物防治在防治土傳病害方面，具有獨特的優(yōu)勢，不僅能夠減輕病害發(fā)生，而且對環(huán)境安全、無污染。該研究將從植物提取物、抗生素、細胞壁降解酶、拮抗微生物（真菌、細菌、放線菌）等幾個方面論述黃萎病生物防治方面的研究進展;同時，還指出棉花黃萎病生物防治存在的問題，并對今后的發(fā)展趨勢進行展望，以期為棉花黃萎病的防治提供參考。

關(guān)鍵詞棉花;黃萎病;生物防治

中圖分類號S476文獻標(biāo)識碼A

文章編號0517-6611（2019）02-0018-05

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.02.006

棉花是紡織工業(yè)中重要的天然纖維作物，是許多發(fā)展中國家的經(jīng)濟支柱。棉花黃萎病是由黃萎病菌大麗輪枝菌（Verticillium dahliae）引起的世界范圍內(nèi)的土傳性病害，1914年首次在美國弗吉尼亞州被報道，隨后蔓延到包括中國在內(nèi)的數(shù)十個國家和地區(qū)[1-3]，對棉花產(chǎn)量造成巨大損失，棉花黃萎病成為棉花高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)的主要障礙[4-5]。

棉花黃萎病的主要防治方法是培育抗病品種，但由于缺乏有效的抗病源，目前尚無成功栽培的高抗病品種?；瘜W(xué)防治沒有有效的殺菌劑，容易造成環(huán)境污染;在生物防治方面已經(jīng)有很多微生物被證實具有生防效果，有的已逐步走向應(yīng)用[6]。許多生防微生物可產(chǎn)生多種抗生素、胞外酶等活性物質(zhì)，加之孢子抗逆性強，在土傳病害防治方面具有較好的應(yīng)用前景，目前主要集中研究生防微生物對黃萎病菌的生防機理、防病促生效果，以及生物防治微生物與黃萎病菌和棉花植物之間的相互作用機制，為控制棉花黃萎病提供高效、多功能的生防微生物，為生物菌活菌制劑的實際應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1植物提取物

植物提取是根據(jù)提取的最終產(chǎn)品的需要使用植物作為原料的物理化學(xué)提取和分離過程。植物提取物是指在植物中定向獲取和濃縮1種或多種活性成分而不改變其活性成分結(jié)構(gòu)而形成的產(chǎn)物，目前枸杞（Lycii Fructus）、茯苓（Poria）、五味子（Schisandra chinensis）的抗氧化作用均已得到試驗證明[7]，植物提取物清除自由基的機理和環(huán)保型殺蟲劑的發(fā)展為尋找新型抗真菌物質(zhì)提供了借鑒。為了驗證各種植物提取物是否具有抗大麗輪枝菌的作用，一些研究者進行嘗試，并有多種植物源活性成分的農(nóng)藥取得登記并成功應(yīng)用。Khaskheli等[8]通過體外試驗篩選了26種抗菌藥用植物，均能降低大麗輪枝菌的菌落生長速率，具有殺菌潛力，其中，梅花（Prunus mume）和漆樹（Rhus verniciflua）提取物的抗菌效果最強，其次是黃連（Coptis chinensis）、黃柏（Cortex phellodendri）和姜黃（Curcuma longa）。最近姜嵐等[9]對56種中藥提取物的抑菌活性及防治效果進行篩選和鑒定，其中有26種在質(zhì)量濃度為10 g/L時對大麗輪枝菌的菌絲生長抑制率達50%以上，五味子提取物可有效抑制大麗輪枝菌引起的棉花維管束褐化癥狀，提高黃萎病的防治效果，并緩解發(fā)病程度。國內(nèi)學(xué)者Wang等[10]研究天麻（gastrodia elata），發(fā)現(xiàn)它含有4種抗真菌蛋白GAFP，GAFP對包括黃萎病在內(nèi)的各種真菌具有良好的抗性。其中GAFP4具有較強的抗菌活性，進一步將GAFP4基因轉(zhuǎn)到陸地棉品種中，發(fā)現(xiàn)GAFP4對不同生理類型的黃萎病菌株具有非常明顯的抗性，預(yù)示其在植物抗真菌病基因工程中具有廣闊的應(yīng)用前景。

2抗生素

抗生素（antibiotics）是由微生物（包括細菌、真菌、放線菌屬）或高等動植物在生活過程中產(chǎn)生的一類次級代謝產(chǎn)物，對病原體具有抗性，能干擾其他生活細胞發(fā)育功能的化學(xué)物質(zhì)。拮抗微生物抑制大麗輪枝菌，主要是通過向胞外分泌能降解細胞壁、抑制生物合成與能量代謝系統(tǒng)的高活性抑菌物質(zhì)，包括小分子抗生素、大分子拮抗蛋白多肽和細菌素等[11-13]。目前，脂肽類抗生素、表面活性素（Surfactin）、伊枯草菌素（Iturins）和豐原素（Fengycin）報道較多[14-16]。表面活性素分為 3 種類型：Surfactin A、B和C，它具有親水性頭部和親脂性尾部的特定結(jié)構(gòu)，具有阻礙中間纖維的合成、嵌入磷脂雙層以增加質(zhì)膜的滲透性和阻礙腺苷-3'，5'-環(huán)化一磷酸（Cyclic Adenosine monophosphate，cAMP）合成等功能。一些芽孢桿菌（Bacillus）通過產(chǎn)生表面活性素來誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生系統(tǒng)抗性[17]。伊枯草菌素具有很強的拮抗真菌的能力，伊枯草菌素是通過使病菌磷脂雙層的電導(dǎo)率增加、質(zhì)膜成孔率提高和滲透性增加而抗菌。如分離的內(nèi)生真菌解淀粉芽孢桿菌（B.amyloliquefaciens）41B-1菌株對棉花黃萎病具有50%以上的生物防治效果，其培養(yǎng)濾液中存在抗真菌化合物伊枯草菌素，能抑制大麗輪枝菌微菌核的形成，誘導(dǎo)氧化應(yīng)激和絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPKs）等，影響真菌信號傳導(dǎo)途徑，并介導(dǎo)植物對大麗輪枝菌的防御反應(yīng)[18]。豐原素由fenA、B、C、D和E相關(guān)基因簇合成，對絲狀霉菌的拮抗能力很強[19]。Vanittanakom等[20]發(fā)現(xiàn)枯草芽胞桿菌（B.subtilis）F-29-3能產(chǎn)生抗真菌脂肽復(fù)合物豐原素，它能抑制絲狀真菌。

3細胞壁降解酶類

真菌細胞壁的主要成分是幾丁質(zhì)和β-1，3-葡聚糖。幾丁質(zhì)酶可以降解病原真菌細胞壁中的幾丁質(zhì)[21]，破壞細胞新物質(zhì)沉積，導(dǎo)致病原體死亡;同時，降解的細胞壁片段具有誘導(dǎo)作用，能刺激宿主植物的抗病反應(yīng)。植物幾丁質(zhì)酶在體內(nèi)表達定位的不同也導(dǎo)致其抗菌特異性[22]，這是由于成熟真菌菌絲頂部的幾丁質(zhì)酶層外層中存在β-1，3葡聚糖、類脂層等，幾丁質(zhì)酶與β-1，3葡聚糖酶可通過抑制病原菌的孢子萌發(fā)和菌絲生長而起到防御作用[23]。近年來，許多植物中的幾丁質(zhì)酶基因被克隆，已成為抗真菌基因工程研究的熱點之一[24-26]。植物可以分泌幾丁質(zhì)酶和β-1，3-葡聚糖酶，生防微生物也可以合成和分泌幾丁質(zhì)酶和β-1，3-葡聚糖酶，β-1，3-葡聚糖酶可降解大麗輪枝菌菌絲體的細胞壁，導(dǎo)致細胞壁壓力降低，菌絲體的頂端細胞破裂，內(nèi)容物外泄，致使細胞死亡，進而誘導(dǎo)植物的抗病防衛(wèi)反應(yīng);當(dāng)葡聚糖酶與幾丁質(zhì)酶相互作用時，抗菌作用更強[24]。Zhu等[27]通過構(gòu)建表達了PevD1的大腸桿菌，發(fā)現(xiàn)濃度低至4 μg/mL時浸種能夠改善棉花的抗性，接種后第15天病害發(fā)生率降為38.16%。

4拮抗真菌

對棉花黃萎病有防效的真菌種類較多，目前研究較多的是木霉（Trichoderma spp.）和黃色蠕形霉（Talaromyces flavus）[28]， 同時，還有一些內(nèi)生真菌也具有拮抗黃萎病菌的作用。

木霉屬用于防治病害的主要機制可分為5類，即產(chǎn)生抗生素、營養(yǎng)競爭、微寄生、細胞壁分解酵素以及植物抗性的誘導(dǎo)。目前誘導(dǎo)抗性只有在少數(shù)木霉菌株中出現(xiàn)。張海軍等[29]分別從棉田篩選出3株拮抗黃萎病的木霉菌株、木霉GY20菌株，對棉花黃萎病的防效顯著。宋曉妍等[30]篩選到一株木霉SMF菌株，它可分泌多種細胞壁降解酶，抑制大麗輪枝菌的生長。Bot等[31]通過土壤稀釋法分離出30種來自土壤的真菌和23種來自棉花植株的真菌，包括綠色木霉（T.viride）、康氏木霉（T.koningiopsis）、深綠木霉（T.atroviride）等，體外試驗表明它們對大麗輪枝菌表現(xiàn)出很強的抗性。孟娜等[32]分離并篩選到4株木霉，這些木霉菌絲在棉花黃萎病菌絲上平行或波浪式生長，且棉花黃萎病菌絲出現(xiàn)細胞原生質(zhì)濃縮和菌絲斷裂等現(xiàn)象。

黃色蠕形霉是一種土居性真菌，分布廣泛，能在植物根際土壤及根部繁衍[33]，該真菌的主要抗病機制是抑菌和重寄生，同時，還產(chǎn)生過氧化氫殺死大麗輪枝菌的微菌核。Fahima 等[33]發(fā)現(xiàn)黃色蠕形霉菌絲可以侵入到大麗輪枝菌的微菌核中，其分泌的代謝物可以在體外和土壤中殺死病菌的微菌核，并且抑制菌絲生長。韋善君等[34]發(fā)現(xiàn)黃色蠕形霉對大麗輪枝菌、刺盤孢菌（colletotrichum spp.）的菌絲生長及分生孢子萌發(fā)和棉立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）、棉枯萎尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）的菌絲生長具有明顯的抑制作用。

目前，已有許多人研究利用植物上的內(nèi)生真菌控制植物病害。如苦參（Sophora flavescens）的一種內(nèi)生真菌土曲霉（Aspergillus terreus）對25種植物病原真菌和14種常見的內(nèi)生細菌有拮抗作用[35]。張蕓等[36]從棉花中分離出200株棉花內(nèi)生真菌，篩選出3株球毛殼菌（Chaetomium globosum）CEF-082、枝頂孢（Acremonium strictum）CEF193和鐮刀菌屬（Fusarium sp.）CEF-559，對黃萎病菌生長有較強的抑制作用，對棉花黃萎病的防治效果60%以上。徐莉莉[37]發(fā)現(xiàn)尖孢鐮孢（F.oxysporum） By125和叢赤殼屬（Nectria haematococca） Bx247能有效地防治黃萎病。Li等[38]在棉花上分離出642株真菌，并從中篩選出7株對棉花黃萎病病菌抑菌作用較高的菌株，小球腔霉屬（Leptosphaeria sp.）CEF-714、黃色蠕形霉CEF-642、赤霉菌（Gibberella intermedia）CEF-026、枝頂孢CEF-193、鐮刀菌屬CEF-325、簡青酶（Penicillium simplicissimum）CEF-818和子囊菌（Ascomycete sp.）CEF-109。Yuan等[39]進一步研究發(fā)現(xiàn)，CEF-818和CET-714菌株處理棉花，可以增加棉花苯丙氨酸酶（PAL）、多酚氧化酶（PPO）和過氧化物（POD）的轉(zhuǎn)錄水平，導(dǎo)致棉花防御反應(yīng)增強。Zhu等[27]從棉花中分離出大麗輪枝菌CVd-WHw和變黑輪枝菌（Gibellulopsis nigrescens） CVn-WHg，其棉花植株的致病性顯著低于大麗輪枝菌CVd-AYb;CVn-WHg和CVd-WHw能對已經(jīng)接種了CVd-AYb的棉花提供交叉保護;其后，Vagelas等[40]證明變黑輪枝菌對由大麗輪枝菌引起的棉花黃萎病具有交叉保護。用無毒或減毒菌株感染棉花植物以誘導(dǎo)系統(tǒng)抗性或交叉保護也是控制黃萎病的重要方法;花椰菜（Brassica oleracea）上的一種弱毒大麗輪枝菌Vt305對西蘭花黃萎病具有抗性[41]，將分離的黃萎病菌CVd-WHw弱毒菌株接種到棉花上[42]，可顯著降低強毒力菌株對棉花的感染。

最近，有研究報道，綠僵菌（Metarhizium anisopliae）和白僵菌（Beauveria bassiana）產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物可以抑制大麗輪枝菌的孢子萌發(fā)、菌絲體生長和微菌核形成[39]。Zhang等[43]通過GC-MS鑒定非致病性尖孢鐮孢CanR-46產(chǎn)生的揮發(fā)性有機化合物（VOC），發(fā)現(xiàn) Fo-VOC具有抗真菌活性，進一步用 Fo-VOC熏蒸污染了大麗輪枝菌的土壤，發(fā)現(xiàn) Fo-VOC能抑制大麗輪枝菌菌絲生長，延遲分生孢子萌發(fā)，抑制胚芽管的伸長，并導(dǎo)致菌絲發(fā)生皺縮和降解。Lan等[44]從中國陜西秦嶺土壤中分離出具有廣譜抗真菌活性的淡紫紫霉屬（Purpureocillium lilacinum） QLP12，發(fā)現(xiàn)其對體外真菌菌絲體生長具有較高的抑制活性，對黃萎病具有顯著的防治效果。

5拮抗細菌

拮抗棉花黃萎病的細菌主要有芽孢桿菌、熒光假單胞菌（Pseudomonas fluorescens）、枯草芽胞桿菌和伯克霍爾德氏菌（Burkholderia spp.）[45]，研究較多的是解淀粉芽孢桿菌和枯草芽胞桿菌[46]，它們不僅拮抗植物病原，而且具有強大的生命力，高定殖率和一定的促生長作用，因此，受到各國研究人員的青睞。

芽孢桿菌的生物防治作用主要在于其誘導(dǎo)植物抗病性、競爭和拮抗作用。競爭作用主要是營養(yǎng)和空間位點的競爭，芽孢桿菌因為抗逆性強，能夠在土壤、植株體表和體內(nèi)大量繁殖和定殖，進而阻止和干擾黃萎病菌在棉花上的定殖和侵染。營養(yǎng)競爭只在少數(shù)菌株中發(fā)現(xiàn)。陳英化等[47]從棉花中篩選到的內(nèi)生菌解淀粉芽孢桿菌 L-4-2，不僅定殖能力強，而且對棉花黃萎病有較好的防治效果。Tehrani等[48]從土壤中分離到高效拮抗黃萎病菌的假單胞桿菌2株、芽孢桿菌2株，其菌劑應(yīng)用于大田防治棉花黃萎病獲得較好的防效，且棉花的產(chǎn)量也獲得不同程度的提高。此外，還從棉花中分離到解木聚糖類芽孢桿菌（Paenibacillus xylanilyticus）YUPP-1[49]、多粘類芽孢桿菌（P.polymyxa）YUPP-8、枯草芽孢桿菌YUPP-2，其定殖棉株后，棉花苗期黃萎病感染率大大降低。拮抗作用主要通過產(chǎn)生抗菌物質(zhì)來抑制病原的生長或直接殺死病原體，李術(shù)娜等[50]以及Stein[51]和 Latha等[52]報道表明，芽孢桿菌可以產(chǎn)生多種抑制植物病原體生長的生物活性因子，如細菌素、幾丁質(zhì)酶、抗菌肽和酚類。細菌素屬于抗菌肽類型，具有強堿性、熱穩(wěn)定性好和廣譜抗菌等特點[53];酶類及蛋白抑菌機制主要包括抑制病原菌孢子產(chǎn)生和萌發(fā)，使病原菌細胞壁溶解和原生質(zhì)泄露。新抗菌蛋白的獲得為抗菌基因的克隆和轉(zhuǎn)抗菌蛋白基因植物的研究奠定了理論和實踐基礎(chǔ)。王奕丁等[54]研究發(fā)現(xiàn)，芽孢桿菌ZL2-70抗菌蛋白抑菌譜廣，理化性質(zhì)穩(wěn)定，初步推斷該抗菌蛋白通過多糖酶活力破壞大麗輪枝菌的細胞壁和抑制病原菌的孢子萌發(fā)而起到抑菌作用，趙君潔[55]通過質(zhì)譜鑒定和平板試驗發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌J-15抑菌物質(zhì)通過抑制孢子萌發(fā)，菌絲伸長，造成大麗輪枝菌的抗氧化系統(tǒng)和膜系統(tǒng)的損傷來防治棉花黃萎病。聶太禮[56]、田紹仁等[57]分離的芽孢桿菌C-02菌株分泌的抗菌蛋白可以溶解病原體大麗輪枝菌VD-11的細胞壁，抑制其致萎毒素的分泌，并提高防御酶活性，具有較好的棉花黃萎病防治效果。李社增等[58]從棉花中分離到一株枯草芽孢桿菌NCD-2菌株，其分泌的胞外抗菌物質(zhì)能夠抑制大麗輪枝菌的生長，該菌株已被開發(fā)為控制棉花黃萎病的微生物農(nóng)藥[59]，并于2015年正式注冊。此外，還有4株枯草芽孢桿菌（EB03，MB1600，QST713和FZB2）已獲得環(huán)境保護局（EPA）的許可[60]，用于商業(yè)化生產(chǎn)。

誘導(dǎo)植物抗病性主要是誘導(dǎo)病程相關(guān)蛋白PRP的產(chǎn)生和相關(guān)防御酶活性的增強，寄主防御酶主要包括PAL、POD、PPO。蠟狀芽孢桿菌（Bacillus cereus）YUPP-10[61]通過直接抑制病原菌的生長，同時誘導(dǎo)植物防御反應(yīng)來抑制病原菌的侵染和擴展，具有良好的應(yīng)用前景，Erdogan等[62]發(fā)現(xiàn)假單胞菌、沙雷氏（Serratia）也有助于黃萎病的防治，并改善棉田的生長參數(shù)，但對其防治機制尚不清楚。另外，功能性微生物群和微生態(tài)有機肥的結(jié)合可以顯著降低棉花根際土壤中的黃萎病菌數(shù)量，控制棉花黃萎病的效果明顯[63]。目前關(guān)于熒光假單胞菌的研究相對較少，Prieto等[64]從橄欖根中分離出一株熒光假單胞菌PICF7菌株，它具有拮抗體外黃萎病菌的作用;通過對PICF7菌株全基因組序列的測定和基因組分析表明[65]，分泌系統(tǒng)、鐵載體、解毒化合物或揮發(fā)性成分合成等功能基因?qū)卓裹S萎病菌具有重要作用;其進一步研究將有助于深入了解生防微生物在宿主組織中的定殖過程、與根內(nèi)生菌的相互作用以及控制病害發(fā)生的分子機制。

安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)2019年

6拮抗放線菌

放線菌在棉花黃萎病的生物防治中起著十分重要的作用。目前，應(yīng)用廣泛的主要放線菌是5406，其菌粉拌種或浸種能很好地防治棉花黃萎病[66]。研究者分別從土壤、棉花根部或棉花植株內(nèi)分離到多種放線菌用于棉花黃萎病的控制。王蘭英等[67]從土壤中分離篩選出28株放線菌，并通過抑菌圈試驗篩選出4株具有較強拮抗作用的菌株，它們的發(fā)酵原液對大麗輪枝菌的拮抗作用明顯強于發(fā)酵濾液和菌絲體提取物。Xue等[68]分離并篩選了4株拮抗黃萎病菌株鏈霉菌（Streptomyces），其分泌的真菌細胞壁降解酶和蛋白酶能導(dǎo)致黃萎病菌生長被阻斷甚至死亡;4株菌都具有較強的定殖能力，防治率達到18.7%～65.8%。劉大群等[69]從土壤中分離的27株鏈霉菌菌株中篩選出3株高效拮抗大麗輪枝菌的菌株，其分泌物可使黃萎病菌菌絲膨大破裂。Cao等[70]從患病棉花的根中分離的內(nèi)生放線菌菌株 DHV3-2，其受感染棉花的根中具有較高的根定殖能力。它對大麗輪枝菌和其他致病真菌有較強的抑制作用。

7生防微生物防治效果的影響因素

生防微生物防治效果的影響因素主要是生防微生物的定殖效率，土質(zhì)、土壤溫度、土壤容重和鹽堿度等，生防微生物定殖效率是決定防治效果的首要因素 ，土壤溫度是生防微生物定殖的決定性因素。 通過向生防微生物中添加一系列的微量元素（ Fe2+、Zn2+、Mg2+等）和有機質(zhì)[71]，可以顯著提高生防微生物的生物防治效果和抗病能力。此外，微生物對碳源和氮源的利用率、根際土壤中營養(yǎng)競爭的優(yōu)勢等因素對生防效果有一定的影響。如果生防微生物不能在根際土壤中成功定殖，那么所有其他抑菌機制都沒有真正的生防價值[72]。

8展望

生物防治的優(yōu)勢在于多抗性、持久性、整體性。誘導(dǎo)抗病是非特異性的、不穩(wěn)定的，同時對人畜無害，可以最大程度地降低農(nóng)藥的使用，減輕農(nóng)藥的環(huán)境污染，目前已經(jīng)篩選出一些具有較好防病效果的微生物，但仍然存在一些限制因子，如：①大多數(shù)生防微生物與植物之間的營養(yǎng)競爭，導(dǎo)致植物從生殖中轉(zhuǎn)移能量，使得植物的產(chǎn)量不比健康植株高，但是也有一些微生物如枯草芽孢桿菌4-2、Muc-7[73]能促進棉花幼苗的生長，但是它是否能夠提高棉產(chǎn)量還有待進一步證實。②會導(dǎo)致次生代謝產(chǎn)物的積累，對植物細胞造成毒害。③可能會導(dǎo)致病害流行。④理想的生防微生物較少。生防機制還存在許多空白有待深入揭示，一些生防微生物制劑開發(fā)較慢，效果也有待提高。針對以上問題，今后應(yīng)加強生防微生物篩選、生防機制、生防效果穩(wěn)定性等研究，將生物防治與遺傳學(xué)、栽培學(xué)、分子生物學(xué)和生態(tài)學(xué)方法相結(jié)合，以明確防病機理，加快抗性品種和基因的篩選，應(yīng)用時注重其他防治方法與生物防治的結(jié)合，取長補短，相互協(xié)調(diào)，從而尋求真正高效、綠色、性能穩(wěn)定的綜合防治方法。

參考文獻

[1] HAMPTON R E，WULLSCHLEGER S D，OOSTERHUIS D M.Impact of verticillium wilt on net photosynthesis，respiration and photorespiration in field-grown cotton （Gossypium hirsutum L.）[J].Physiological and molecular plant? pathology，1990，37（4）：271-280.

[2] WANG J Y，CAI Y，GOU J Y，et al.Vdnep，an elicitor from? Verticillium dahliae，induces cotton plant wilting[J].Applied and environmental microbiology，2004，70（8）：4989-4995.

[3] ELDON S，HILLOCKS R J.The effect of reduced phytoalexin production on the resistance of upland cotton （Gossypium hirsutum） ?to Verticillium and Fusarium wilts[J].Annals of applied biology，1996，129（2）：217-225.

[4] 徐理，朱龍付，張獻龍.棉花抗黃萎病機制研究進展[J].作物學(xué)報，2012，38（9）：1553-1560.

[5] 朱荷琴，馮自力，尹志新，等.我國棉花黃萎病菌致病力分化及 ISSR 指紋分析[J].植物病理學(xué)報，2012，42（3）：225-235.

[6] SHABAN M，MIAO Y H，ULLAH A ，et al.Physiological and molecular mechanism of defense in cotton against? Verticillium dahliae[J].Plant physiology and biochemistry，2018，125：193-204.

[7] 孫麗萍，王大仟，張智武.11種天然植物提取物對DPPH自由基的清除作用[J].食品科學(xué)，2009，30（1）：45-47.

[8] KHASKHELI M I，SUN J L，HE S P，et al.Chinese medicinal plants：An alternative approach for management of Verticillium wilt of cotton[J].Phytopathologia mediterranea，2016，55（3）：323-336.

[9] 姜嵐，龐金環(huán)，肖偉烈，等.56種中藥提取物對棉花黃萎病的防治效果研究[J].生物技術(shù)通報，2018，34（2）：128-134.

[10] WANG Y Q，LIANG C Z，WU S J，et al.Significant improvement of cotton Verticillium wilt resistance by manipulating the expression of Gastrodia antifungal proteins[J].Molecular plant，2016，9（10）：1436-1439.

[11] SAVCHUK S，DILANTHA FERNANDO W G.Effect of timing of application and population dynamics on the degree of biological control of Sclerotinia sclerotiorum by bacterial antagonists[J].FEMS Microbiology Ecology，2004，49（3）：379-388.

[12] JASIM B，SREELAKSHMI K S，MATHEW J，et al.Surfactin，iturin，and fengycin biosynthesis by endophytic Bacillus sp.from Bacopa monnieri[J].Microbial ecology，2016，72（1）：106-119.

[13] GONG A D，LI H P，YUAN Q S，et al.Antagonistic mechanism of iturin a and plipastatin a from Bacillus amyloliquefaciens S763 from wheat spikes against Fusarium graminearum[J].Plos One，2015，10（2）：1-18.

[14] HATHOUT Y，HO Y P，RYZHOV V，et al.Kurstakins：A new class of lipopeptides isolated from Bacillus thuringiensis[J].Journal of? natural products，2000，63（11）：1492-1496.

[15] ONGENA M，JACQUES P.Bacillus lipopeptides：Versatile weapons for plant disease biocontrol[J].Trends in microbiology，2008，16（3）：115-125.

[16] PERTOT I，PUOPOLO G，HOSNI T，et al.Limited impact of abiotic stress on surfactin production in planta and on disease resistance induced by Bacillus amyloliquefaciens S499 in tomato and bean[J].FMES Microbiology Ecology，2013，86（3）：505-519.

[17] CAWOY H，MARIUTTO M，HENRY G，et al.Plant defense stimulation by natural isolates of Bacillus depends on efficient surfactinproduction[J].Molecular plant-microbe interactions，2014，27（2）：87-100.

[18] HAN Q，WU F L，WANG X N，et al.The bacterial lipopeptide iturins induce? Verticillium dahliaecell death by affecting fungal signalling pathways and mediate plant defence responses involved in pathogen associated molecular pattern triggered immunity[J].Environmental microbiology，2015，17（4）：1166-1188.

[19] KAMILOVA F，VALIDOV S，AZAROVA T，et al.Enrichment for enhanced competitive plant root tip colonizers selects for a new class of biocontrol bacteria[J].Environmental microbiology，2005，7（11）：1809-1817.

[20] VANITTANAKOM N，LOEFFLER W，KOCH U，et al.Fengycin：A novel antifungal lipopeptide antibiotic produced by Bacillus subtilis F293[J].The journal of? antibiotics，1986，39（7）：888-901.

[21] 李華，劉開啟，王革.微生物幾丁質(zhì)酶在植物病害生物防治中的應(yīng)用[J].仲愷農(nóng)業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報，2003，16（1）：54-60.

[22] 唐明娟，郭順星.菌根增強植物抗病性機理的研究進展[J].微生物學(xué)通報，2000，27（6）：446-449.

[23] 劉朋，葉波平.微生物幾丁質(zhì)酶研究進展及應(yīng)用現(xiàn)狀[J].科學(xué)技術(shù)創(chuàng)新，2018（12）：52-53.

[24] 余賢美，鄭服叢，艾呈祥，等.β-1，3-葡聚糖酶在植物抗真菌病基因工程中的研究進展[J].生命科學(xué)研究，2004，8（S2）：53-57.

[25] 馮自力，李志芳，師勇強，等.轉(zhuǎn)雙價幾丁質(zhì)酶和葡聚糖酶基因?qū)γ藁ㄖ饕∠x害及天敵發(fā)生的影響[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報，2013，22（12）：62-67.

[26] 邱紅林.轉(zhuǎn)幾丁質(zhì)酶基因和 β-1，3-葡聚糖酶基因抗病棉花的安全評估研究[D].石河子：石河子大學(xué)，2013.

[27] ZHU H Q，F(xiàn)ENG Z L，LI Z F，et al.Characterization of two fungal isolates from cotton and evaluation of their potential for biocontrol of Verticillium wilt of cotton[J].Journal of phytopathology，2013，161（2）：70-77.

[28] ZHENG Y，XUE Q Y，XU L L，et al.A screening strategy of fungal biocontrol agents towards Verticillium wilt of cotton[J].Biological control，2011，56（3）：209-216.

[29] 張海軍，李澤方.綠色木霉 GY20 對棉花枯萎病菌的抑菌作用[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報，2012，21（3）：193-197.

[30] 宋曉妍，陳秀蘭，孫彩云，等.棉花黃萎病菌拮抗木霉的篩選及其抑菌機制的研究[J].山東大學(xué)學(xué)報 （理學(xué)版），2005，40（6）：98-102.

[31] BOT P J，KHASKHELI M I，LING J，et al.Fungal diversity associated with Verticillium wilt of cotton[J].Pakistan journal of botany.2014，46（4）：1225-1236.

[32] 孟娜，湯斌，黃曉東，等.4 種木霉菌對棉花黃萎病菌抑制作用的測定[J].生物學(xué)雜志，2007，24（4）：58-61.

[33] FAHIMA T，HENIS Y.Quantitative assessment of the interaction between the antagonistic fungus Talaromyces flavus and the wilt pathogen Verticillium dahliae on eggplant roots[J].Plant and soil，1995，176（1）：129-137.

[34] 韋善君，李國慶，姜道宏，等.黃色蠕形霉對棉花上幾種病原菌拮抗作用的研究[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，1999，18（1）：16-19.

[35] 何璐.苦參內(nèi)生真菌抑菌物質(zhì)純化鑒定及作用機制研究[D].沈陽：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)，2011.

[36] 張蕓，馮自力，馮鴻杰，等.內(nèi)生球毛殼屬真菌 CEF-082 對棉花黃萎病的控制作用[J].植物病理學(xué)報，2016，46（5）：697-706.

[37] 徐莉莉.棉花黃萎病生防真菌的篩選策略研究及防效驗證[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

[38]LI Z F，WANG L F，F(xiàn)ENG Z L，et al.Diversity of endophytic fungi from different Verticilliumwiltresistant Gossypium hirsutum and evaluation of antifungal activity against? Verticillium dahliae in vitro[J].Microbiol Biotechnol，2014，24（9）：1149-1161.

[39]YUAN Y，F(xiàn)ENG H J，WANG L F，et al.Potential of endophytic fungi isolated from cotton roots for biological control against Verticillium wilt disease[J].PLoS One，2017，12（1）：e0170557.

[40]VAGELAS I，LEONTOPOULOS S.Crossprotection of cotton against Verticillium wilt by Verticillium nigrescens[J].Emirates journal of food and agriculture，2015，7（9）：687-691.

[41] TYVAERT L，F(xiàn)RANCA S C，DEBODE J，et al.The endophyte Verticillium VT305 protects cauliflower against Verticillium wilt[J].Journal of applied microbiology，2014，116（6）：1563-1571.

[42] SUN C，SHAO Y Q，VAHABI K，et al.The beneficial fungus Piriformospora indica protects Arabidopsis from Verticillium dahliae infection by downregulation plant defense responses[J].BMC Plant Biology，2014，14（1）：1-16.

[43] ZHANG Q H，YANG L，ZHANG J，et al.Production of antifungal volatiles by nonpathogenic Fusarium oxysporum and its efficacy in suppression of Verticillium wilt of cotton[J].Plant and soil，2015，392（1/2）：101-114.

[44] LAN X J，ZHANG J，ZONG Z F，et al.Evaluation of the biocontrol potentialof Purpureocillium lilacinum QLP12 against? Verticillium dahliae in eggplant[J].Biomed Res Int，2017（2）：1-8.

[45] LI C H，SHI L，HAN Q，et al.Biocontrol of Verticillium wilt and colonization of cotton plants by an endophytic bacterial isolate[J].Journal of applied microbiology，2012，113（3）：641-651.

[46] JI S H，PAUL N C，DENG J X，et al.Biocontrol activity of Bacillus amyloliquefaciens Cnu114001 against fungal plant diseases[J].Mycobiology，2013，41（4）：234-242.

[47] 陳英化，李愛霞，馮麗娜，等.棉花黃萎病內(nèi)生拮抗細菌 L-4-2 的鑒定及定殖[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報，2012，21（2）：68-71.

[48] TEHRANI A S，DISFANI F A，HEDJAROUD G A，et al.Antagonistic effects of several bacteria on? Verticillium dahliae the causal agent of cotton wilt[J].Mededelingen，2001，66（2）：95-101.

[49] 但紅俠，董寧，萬素梅，等.枯草芽孢桿菌對棉花枯、 黃萎病的抑制作用研究[J].新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，47（11）：2221-2225.

[50] 李術(shù)娜，馬平，胡明，等.棉花黃萎病拮抗細菌篩選與 B-101 菌株抗菌蛋白分離[J].植物病理學(xué)報，2008，38（4）：445-448.

[51] STEIN T.Bacillus subtilis antibiotics：Structures，syntheses and specific functions[J].Molecular microbiology，2005，56（4）：845-857.

[52] LATHA P，ANAND T，PRAKASAM V，et al.Combining Pseudomonas，Bacillus and Trichoderma strains with organic amendments and micronutrient to enhance suppression of collar and root rot disease in physic nut[J].Applied soil ecology，2011，49：215-223.

[53] 顧覺奮，何文杰.Lantibiotic：一類新穎的抗菌肽研究進展[J].國外醫(yī)藥（抗生素分冊），2001，22（6）：272-276.

[54] 王奕丁，姜婷婷，王全.棉花黃萎病拮抗細菌Bacillus subtilis ZL2-70抗菌蛋白的理化性質(zhì)和抑菌機理[J].棉花學(xué)報，2017，29（6）：560-569.

[55] 趙君潔.棉花黃萎病拮抗芽孢菌的篩選及其活性物質(zhì)研究[D].烏魯木齊：新疆師范大學(xué)，2017.

[56] 聶太禮.棉花黃萎病拮抗菌 C-02 的篩選、鑒定和防病增產(chǎn)效果研究[D].太原：山西大學(xué)，2011.

[57] 田紹仁，聶太禮，王夢亮，等.拮抗細菌 C-02 防治棉花黃萎病的機理研究[J].棉花學(xué)報，2015，24（5）：420-426.

[58] 李社增，鹿秀云，馬平，等.棉花黃萎病生防細菌NCD-2抑菌物質(zhì)提取初步研究[J].棉花學(xué)報，2004，16（1）：62-63.

[59] 鹿秀云，李社增，馬平，等.棉花黃萎病生防細菌NCD-2抑菌物質(zhì)提取研究（英文）[J].山東科學(xué)，2005（3）：22-25.

[60] 王星云，宋卡魏，張榮意.枯草芽孢桿菌菌劑的開發(fā)應(yīng)用[J].廣西熱帶農(nóng)業(yè)，2007（2）：32-35.

[61] 周京龍，馮自力，馮鴻杰，等.棉花內(nèi)生蠟狀芽孢桿菌YUPP-10對棉花黃萎病的防治作用及機制[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，50（14）：2717-2727.

[62] ERDOGAN O，BENLIOGLU K.Biological control of Verticillium wilt on cotton by the use of fluorescent Pseudomonas spp.under field conditions[J].Biological control，2010，53（1）：39-45.

[63] LI S Q，ZHANG N，ZHANG Z H，et al.Antagonist Bacillus Subtilis HJ5 controls Verticillium wilt of cotton by root colonization and biofilm formation[J].Biology and fertility of soils，2013，49（3）：295-303.

[64] PRIETO P，NAVARRORAYA C，VALVERDECORREDOR A，et al.Colonization process of olive tissues by? Verticillium dahliae and its in planta interaction with the biocontrol root endophyte Pseudomonas fluorescens PICF7[J].Microbial biotechnology，2009，2（4）：499-511.

[65] MARTNEZGARCA P M，RUANOROSA D，SCHILIR E，et al.Complete genome sequence of Pseudomonas fluorescens strain PICF7，an indigenous root endophyte from olive （Olea europaea L.） and effective biocontrol agent against? Verticillium dahliae[J].Standards in genomic sciences，2015，10（1）：1-7.

[66] 尹莘耘，荀培琪，邱桂英，等.5406號 抗生菌肥料作用機制的研究I.5406抗生菌產(chǎn)生刺激物質(zhì)的分析研究[J].微生物學(xué)報，1965，11（2）：259-269.

[67] 王蘭英，宗兆鋒，劉正坪.大麗輪枝孢和灰葡萄孢生防放線菌的分離篩選[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2005，33（S1）：153-156.

[68] XUE L，XUE Q H，CHEN Q，et al.Isolation and evaluation of rhizosphere actinomycetes with potential application for biocontrol of Verticillium wilt of cotton[J].Crop protection，2013，43：231-240.

[69] 劉大群，楊文香，祁碧菽，等.拮抗鏈霉菌Men-myco-93-63及其發(fā)酵液對棉花黃萎病菌生長的影響[J].河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，1999，22（4）：79-82.

[70] CAO P，LIU C X，SUN P Y，et al.An endophytic Streptomyces sp.strain Dhv32 from diseased root as a potential biocontrol agent against ?Verticillium dahliae and growth elicitor in tomato （Solanum lycopersicum） [J].Antonie van leeuwenhoek，2016，109（12）：1573-1582.

[71] 張冬冬，劉濤，高同國，等.棉花黃萎病拮抗細菌Z-5菌株的定殖能力檢測[J].棉花學(xué)報，2013，25（6）：510-516.

[72] 吳藹民，夏正俊，陸郝勝，等.長江下游棉花落葉型黃萎病發(fā)生消長與氣象因子關(guān)系分析[J].棉花學(xué)報，1999，11（6）：284-289.

[73] 羅靜靜.連作棉田PGPR菌株的定殖性能及抗菌活性物質(zhì)研究[D].烏魯木齊：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)，2015.