中青年復(fù)發(fā)性腦梗死與高尿酸血癥及亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性相關(guān)性研究

劉晶 李曉華 姜巖 張偉 董齊 劉宏斌 張昊 王鳳嬌

【摘 要】 目的：探討高尿酸血癥及亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）基因C677T位點多態(tài)性與中青年復(fù)發(fā)性腦梗死的關(guān)系。方法：2014年1月至2016年10月，選擇在齊醫(yī)三附院神經(jīng)內(nèi)科治療的140例中青年復(fù)發(fā)性腦梗死患者作為復(fù)發(fā)組，同時選擇同期首次發(fā)病的140例中青年腦梗死患者為首發(fā)組，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制片段長度多態(tài)性法檢測分析MTHFR基因C677T位點多態(tài)性;采用高效液相色譜法測定血漿尿酸（UA）、同型半胱氨酸（Hcy）水平，采用全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測血漿維生素B12、葉酸水平。結(jié)果：兩組患者血尿酸水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），但復(fù)發(fā)組血尿酸水平高于首發(fā)組，在MTHFR基因C677T位點的基因型分布比較中差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;與首發(fā)組比較，復(fù)發(fā)組患者T等位基因頻率升高（P<0.05）。復(fù)發(fā)組TT、CC基因型患者血漿Hcy水平明顯升高（P<0.05）;在兩組患者中血漿Hcy水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），同時兩組CT、CC基因型患者中維生素B12、葉酸比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;TT基因型的兩組患者維生素B12水平無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;TT基因型復(fù)發(fā)組患者血漿葉酸水平降低（P<0.05）。結(jié)論：MTHFR基因TT基因型是中青年復(fù)發(fā)性腦梗死的重要因素，TT基因型中青年復(fù)發(fā)性腦梗死患者存在高Hcy及低葉酸。高尿酸血癥與復(fù)發(fā)腦梗死發(fā)病有內(nèi)在聯(lián)系，是重要的危險因素。

【關(guān)鍵詞】 復(fù)發(fā)性腦梗死;亞甲基四氫葉酸還原酶;基因;高尿酸血癥

在臨床心腦血管疾病中，腦梗死為最常見的類型，3年復(fù)發(fā)率可以高達16.0%。因此復(fù)發(fā)性腦梗死具有疾病發(fā)生率高，以及復(fù)發(fā)率高等特點。通過查閱文獻發(fā)現(xiàn)，針對復(fù)發(fā)性腦梗死的臨床危險因素研究已經(jīng)日益成為熱點，高尿酸血癥逐漸出現(xiàn)在人們的視野中。而且有不少學(xué)者將分子生物技術(shù)以及人類基因組同時引入本研究領(lǐng)域。本研究針對本院收治的中青年復(fù)發(fā)性腦梗死患者分析血尿酸、亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）、基因C677T位點檢測，掌握高尿酸血癥以及MTHFR基因多態(tài)性與中青年腦梗死患者的發(fā)病關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性研究分析2014年1月至2016年10月，在齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院神經(jīng)內(nèi)科收治的中青年復(fù)發(fā)性腦梗死患者140例作為復(fù)發(fā)組，同時選擇首次發(fā)病的140例中青年腦梗死患者為首發(fā)組。入選患者均符合《各類腦血管病診斷要點》[1]，并經(jīng)影像學(xué)檢查確診為腦梗死。復(fù)發(fā)性腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)：原有

齊齊哈爾市科學(xué)技術(shù)計劃項目，項目名稱：中青年復(fù)發(fā)性腦梗死與亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性相關(guān)性研究，項目編號：SFGG-201513;齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院院內(nèi)科研基金項目，項目名稱：中青年復(fù)發(fā)性腦梗死與高尿酸血癥及亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性相關(guān)性研究，項目編號：QY2016M-08

*李曉華為本文通訊作者

神經(jīng)癥狀及體征好轉(zhuǎn)或者消失，1個月后再次出現(xiàn)神經(jīng)癥狀或體征（同側(cè)或?qū)?cè)），并且影像學(xué)檢查確認(rèn)有新發(fā)病灶，并排除其他原因。2000年WHO關(guān)于年齡段劃分標(biāo)準(zhǔn)[2]：青年18～44歲，中年45～59歲，本研究要求患者入組標(biāo)準(zhǔn)為18～59歲，平均（38.67±7.92）歲，所有患者均知情，簽署知情同意書，本研究得到齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批通過，可以進行本研究。

1.2 研究方法

入組患者在入院當(dāng)日22∶00開始禁食，第2天08∶00空腹，采集3份肘靜脈血，裝入抗凝管，1管5mL，2管2mL，4℃冰箱保存待用。MTHFR基因測定方法：1）2mL靜脈血，3500r/min離心10min，半徑13.5cm。試劑盒采用人全血DNA（離心柱型，小量樣本，<1mL，編號GK1042，上海捷瑞公司生產(chǎn)），按操作說明書進行操作，-20℃環(huán)境下保存使用。2）PCR擴增：應(yīng)用primer 5.0軟件設(shè)計PCR擴增引物，長度為655bp，PCR體系為25μL;95℃預(yù)變性5min，變性30s（94℃），復(fù)性45s（60℃），延伸1min（70℃），循環(huán)36次，最后延伸10min（72℃），在4℃時終止。3）RFLP分析：在20μL反應(yīng)體系中加入2μL的酶切緩沖溶液，15μL限制性內(nèi)切酶，應(yīng)用1μL的去離子水補足至20μL;37℃恒溫消化3h，檢測DNA的濃度和純度。

全部患者在次日清晨空腹采血8.0mL靜脈血，離心4.0mL，采用生化酶法檢測空腹血尿酸（UA），其余做常規(guī)血糖（FBG）、甘油三酯（TG）、膽固醇（CH）等檢查。UA正常范圍200～413μmol/L，超過413μmol/L診斷為高尿酸血癥。采集5mL靜脈血檢測同型半胱氨酸（Hcy），取血后30min在4℃下離心10min（r=13.5cm，3000r/min），-80℃下保存上層標(biāo)本;采用液相色譜儀及熒光探測儀測定Hcy水平。

維生素B12和葉酸水平測定：靜脈血2mL，采用全自動電生化分析儀進行測定。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料用%表示，采用χ2檢驗;計量資料采用（±s）表示，采用獨立樣本t檢驗比較，設(shè)定0.05為檢驗水準(zhǔn)，（P<0.05）則差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料

各組患者在性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)以及生活史（吸煙、飲酒）方面比較差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。詳見表1。

2.2 兩組各項指標(biāo)比較

兩組各項指標(biāo)比較，復(fù)發(fā)腦梗死組與首發(fā)腦梗死組血尿酸指標(biāo)差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。但復(fù)發(fā)組血尿酸水平高于首發(fā)組。首發(fā)腦梗死組在血壓、血脂方面均明顯高于復(fù)發(fā)腦梗死組。見表2。

2.3 病例組血尿酸水平與其他因素相關(guān)性r值

2.4 高尿酸組與尿酸正常組比較

2.5 MTHFR基因C677T位點基因型分布及等位基因頻率比較

2.6 不同基因型血漿Hcy水平比較

2.7 血漿維生素B12、葉酸水平比較

不同基因型患者維生素B12、葉酸水平比較，CT、CC基因型患者維生素B12、葉酸水平比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;TT基因患者維生素B12水平比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;與首發(fā)組比較，復(fù)發(fā)組TT基因患者葉酸水平降低，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表7。

3 討論

復(fù)發(fā)性腦梗死對人類危害極大，其病死率和致殘率較初發(fā)腦梗死更高，它已成為嚴(yán)重的社會問題和經(jīng)濟問題。復(fù)發(fā)性腦梗死危險因素的研究結(jié)果一直存在較大的差異，尤其是中青年復(fù)發(fā)性腦梗死，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為高尿酸血癥是復(fù)發(fā)型腦梗死的未受控因素，而MTHFR基因在復(fù)發(fā)的機制中也占有

尿酸為人體正常代謝產(chǎn)物，采用尿酸酶法檢測正常值范圍為200～413mmol/L。當(dāng)人體內(nèi)嘌呤代謝異常，會出現(xiàn)尿酸生成增多或排泄減少的情況，人體內(nèi)血尿酸濃度增高稱之為高尿酸血癥，高尿酸血癥能夠增加腦血管病發(fā)病風(fēng)險，若未加以控制，更會增加腦血管病的復(fù)發(fā)率。本研究中可以看出，初發(fā)組及復(fù)發(fā)組患者血尿酸水平均出現(xiàn)明顯增高，可以看出血尿酸異常率增高與腦梗死初發(fā)及復(fù)發(fā)均密切相關(guān)。本研究可以發(fā)現(xiàn)高尿酸組與尿酸正常組比較，腦梗死的復(fù)發(fā)率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），可認(rèn)為高尿酸血癥是腦梗死復(fù)發(fā)的危險因素。高尿酸血癥的致病機制尚未明確，可能與以下因素有關(guān)：1）尿酸水平與脂蛋白代謝異常，以及高血壓等因素相互作用，促進粥樣硬化形成;2）尿酸鹽結(jié)晶能夠促進炎癥反應(yīng)，激活血小板以及凝血過程;3）可以通過影響嘌呤代謝促進形成血栓。痛風(fēng)發(fā)作時，釋放趨化因子促使急性炎癥的發(fā)生。腦卒中急性發(fā)作，血液中白細(xì)胞黏附作用增強，細(xì)胞間黏附分子濃度明顯增高，可以看出各疾病在彼此發(fā)生中能夠相互促進。

本研究可以看出高尿酸血癥是復(fù)發(fā)腦梗死的危險因素，這與我國著名學(xué)者周其達的研究一致[3]。但是否為獨立危險因素，本文尚未得出此類結(jié)論。目前高尿酸血癥導(dǎo)致腦梗死復(fù)發(fā)率增加的社會原因，主要是因為未引起痛風(fēng)癥狀的高尿酸血癥一般不會引起病人及家屬的重視，一般也不會予以治療。因此監(jiān)控血尿酸水平對復(fù)發(fā)腦梗死的預(yù)防非常有益。MTHFR基因C677T位點是研究熱點，該位點處于MTHFR基因的N端，能夠影響酶的耐熱性、活性。杜麗麗等研究指出[4]，MTHFR基因是Hcy代謝關(guān)鍵酶，其C677T位點的多態(tài)性與人體血脂水平高度相關(guān)，本研究表明，復(fù)發(fā)組TT基因型患者的Hcy水平明顯高于首發(fā)組患者。蔣萍等曾指出[5]，TT基因型患者酶活性降低，約為正常值的30%，所以出現(xiàn)TT基因型患者的血漿Hcy水平，顯著高于純合野生型CC基因型患者。陳星霖[6]曾報道TT和CT基因型患者血漿高Hcy檢出率明顯增高。本研究可以看出，兩組間MTHFR基因C677T位點基因型分布具有顯著差異，并且復(fù)發(fā)組患者T等位基因的頻率明顯高于首發(fā)組，可以看出MTHER基因C677T位點的基因突變，能夠促進RIS的發(fā)生。

葉酸是一種B族維生素，與維生素B12共同促進Hcy再甲基化過程。本研究中，復(fù)發(fā)組TT基因型患者的血漿葉酸水平明顯低于首發(fā)組，在Hcy代謝中，葉酸水平降低能夠促進高Hcy，進而促進復(fù)發(fā)性腦梗死發(fā)生。

綜上所述，MTHFR基因TT基因型是中青年復(fù)發(fā)性腦梗死的重要因素，TT基因型中青年復(fù)發(fā)性腦梗死患者存在高Hcy及低葉酸。高尿酸血癥與復(fù)發(fā)腦梗死發(fā)病有內(nèi)在聯(lián)系，是重要的危險因素。

參考文獻

[1] 中華醫(yī)學(xué)會第四屆全國腦血管病學(xué)術(shù)會議.各類腦血管病診斷要點[J].中華神經(jīng)內(nèi)科雜志，1996，29（06）：379.

[2] 陳道純.人類年齡期劃分的指數(shù)公式[J].中國老年學(xué)雜志，2004，24（08）：771-772.

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[4] Du L L，Lyu Z P，Liu C W，et al.Association between the MTHFR C677T polymorphism and serum lipid levels and longevity in the long-lived cohort in Guangxi Hongshuihe river basin[J].Chinese Journal of Arteriosclerosis，2016，21（04）：637-639.

[5] Jiang P，Zang D W.Correlation between polymorphisms of MTHFRC677T gene and plasma homocysteine in patients with acute cerebral infarction[J].Shandong Medical Journal，2017，54（08）：1-4.

[6] 陳星霖.MTHF+C677T基因突變及血漿tHcy水平與腦卒中關(guān)系的研究[D].武漢：華中科技大學(xué)，2016.