轉(zhuǎn)化生長因子β1與鈣囊素在胰腺癌中的表達情況及其相關(guān)性

海 花 陳金金

胰腺癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，男性發(fā)病人數(shù)多于女性，在我國的發(fā)病率逐年增高[1]。胰腺癌具有惡性程度高、發(fā)病隱匿、死亡率高等特點，并且由于其缺乏有效的早期診斷手段，導致手術(shù)切除率低，5年生存率不超過5%[2]。當前胰腺癌的病因與發(fā)病機制尚不十分清楚，不過發(fā)病為多步驟、多階段、多因素、多基因變異參與的復雜的生物學演變過程，隨著分子生物學與免疫學技術(shù)的發(fā)展與結(jié)合，臨床上廣泛開展了對胰腺癌分子水平致病機制的研究[3]。轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor beta1，TGF-β1)是目前發(fā)現(xiàn)的1種血管生成相關(guān)因子，可通過刺激血管生成、合成細胞外基質(zhì)等，為腫瘤發(fā)生發(fā)展提供適宜微環(huán)境[4]。鈣囊素(S100A11)為S100蛋白家族的成員之一，在體內(nèi)可轉(zhuǎn)導鈣依賴性的細胞調(diào)節(jié)信號，與腫瘤的形成和進展具有一定的相關(guān)性[5]。本文探討了TGF-β1與S100A11在胰腺癌中的表達情況及其相關(guān)性，希望為闡述胰腺癌的發(fā)病機制提供參考，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取2016年8月至2017年12月我院收治的90例胰腺癌患者。納入標準：均經(jīng)病理檢查證實為胰腺癌；臨床病例資料完整；已簽知情同意書；術(shù)前未接受化療、放療等治療。排除標準：胰腺癌外其他所有類型惡性腫瘤；臨床資料不明確且病理科無完整切片或石蠟檔案；妊娠與哺乳期婦女。本研究已通過醫(yī)院倫理委員會批準。

90例患者年齡29～58歲，平均(49.11±2.87)歲；男性55例，女性35例；平均體重指數(shù)為(22.98±1.82) kg/m2；病理分期：Ⅰ期48例，Ⅱ期30例，Ⅲ期12例；分化程度：低分化、中分化、高分化分別有54、18、18例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移60例，有轉(zhuǎn)移30例。

1.2 免疫組化方法

鼠抗人TGF-β1與S100A11單克隆抗體都購自武漢博士德生物有限公司，免疫組化染色試劑盒購自于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，DAB(3，3-二氨基聯(lián)苯胺Tris緩沖液)顯色試劑盒購自福建邁新生物技術(shù)有限公司。用已知陽性對照染色片為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

免疫組化的組織樣本選擇癌組織、癌旁正常組織，制作石蠟切片3 μm，60 ℃烤片4 h；二甲苯脫蠟2次，酒精梯度脫水后進行水洗；修復抗原，蒸餾水沖洗，5 min×3次；3%H202溶液處理15 min，PBS沖洗，5 min×3次；一抗4 ℃孵育12 h，PBS沖洗，5 min×3次；二抗25 ℃孵育30 min，PBS沖洗，5 min×3次；DA室溫下3～5 min顯色，蘇木精復染細胞核，脫水、透明、封片，鏡下觀察。每張切片由兩位病理專家獨立閱片共同協(xié)商出判斷結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計方法

應用SPSS 20.0軟件，計數(shù)資料用χ2檢驗，計量數(shù)據(jù)用t檢驗，相關(guān)性分析用Spearman等級相關(guān)分析或χ2檢驗，影響因素分析用多因素非條件logistic回歸分析，P<0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 TGF-β1與S100A11陽性表達率對比

TGF-β1、S100A11在癌旁組織及癌組織中陽性表達率比較具有顯著差異 (P<0.05)，見表1。

表1 TGF-β1與S100A11在胰腺癌中的表達情況對比 (例，%)

2.2 TGF-β1與S100A11表達與胰腺癌組織臨床特征的相關(guān)性

TGF-β1與S100A11在胰腺癌組織中的陽性表達率與胰腺癌的病理分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05)。見表2。Spearman 等級相關(guān)分析顯示：胰腺癌組織中TGF-β1表達與S100A11陽性表達呈顯著負相關(guān)性(γ=-0.607，P=0.000)。

表2 TGF-β1與S100A11在胰腺癌組織中表達與臨床特征的相關(guān)性(例，%)

2.3 影響因素分析

胰腺癌組織的病理分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移都為影響TGF-β1與S100A11陽性表達的獨立危險因素(P<0.05)。見表3～表4。

表3 影響胰腺癌組織TGF-β1陽性表達的主要因素

表4 影響胰腺癌組織S100A11陽性表達的主要因素

3 討論

胰腺癌是1種高度遺傳特異性的惡性腫瘤，預后非常差，總體5年生存率不到4%，總的中位生存率不到20個月[6]。癌基因激活或抑癌基因失活均會導致正常組織發(fā)生癌變，近年來通過對胰腺癌相關(guān)基因進行分析，可以為預測胰腺癌的預后提供有力的而可靠的證據(jù)，有助于分析腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[7]。

腫瘤血管生成的啟動由一系列生長因子、細胞因子所誘發(fā)，其與腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移及預后顯著相關(guān)[8]。本研究顯示，TGF-β1、S100A11在癌旁組織及癌組織中的陽性表達率間具有顯著差異 (P<0.05)。TGF-β1是1種多肽二聚體，可調(diào)節(jié)細胞生長平衡，促進細胞外基質(zhì)合成和細胞分化等[9]，大量研究顯示，慢性胰腺炎及胰腺癌組織中TGF-β1及其受體的表達顯著高于正常胰腺組織，TGF-β1可作用于鄰近成纖維細胞分泌更多細胞外基質(zhì)以促進瘤組織周圍血管生成[10]。也有研究表明TGF-β1是1種腫瘤抑制子，可阻滯早期腫瘤細胞從G0期進入S期，但在惡性腫瘤晚期，TGF-β1可通過刺激血管生成，提供適宜腫瘤生長的環(huán)境[11]。S100A11也具有抑制及促進腫瘤生長的雙重調(diào)節(jié)作用，在乳腺癌、肝癌、甲狀腺癌中都呈現(xiàn)異常表達情況[12]。

不同病理類型、臨床分期的胰腺癌患者，采用相同的治療方案能得到不同的預后，為此需要積極建立更加有效的胰腺癌判定診斷方法，從而指導胰腺癌的臨床工作。TGF-β1過表達可使得腫瘤更具侵襲性，TGF-β1表達增加可通過間接的旁分泌、鄰分泌機理，刺激腫瘤內(nèi)血管生成，上調(diào)細胞外基質(zhì)降解蛋白，利于腫瘤細胞浸潤與轉(zhuǎn)移[13]。S100A11可促進p53降解，導致依賴p53的抑癌活性下降，可介導p21生成，引起p21介導p53依賴的細胞周期G1期阻滯[14]。本研究顯示，TGF-β1與S100A11在胰腺癌組織中的陽性表達率與胰腺癌的病理分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05)，Spearman 等級相關(guān)分析顯示胰腺癌組織的TGF-β1與S100A11的陽性表達呈顯著負相關(guān)性(P<0.05)。也有研究表明有S100A11過表達的腫瘤更具有侵襲性，與胰腺癌患者的腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著正相關(guān)[15]，如果腫瘤組織分裂旺盛，可使TGF-β1表達增高，同時TGF-β1陽性表達的胰腺癌腫瘤組織的惡性程度大，細胞增殖活躍，轉(zhuǎn)移的機會高[16]，但是具體的機制還不明確。

TGF-β1是1個預示胰腺癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)指標，TGF-β1的低表達可能為胰腺癌逃脫TGF-β1負性生長調(diào)控的機制之一[17]。S100A11在細胞增殖、分化、凋亡都有一定的作用，具備細胞內(nèi)和細胞外調(diào)節(jié)活性，其由活化的中性粒細胞所分泌，在炎癥損傷部位有大量表達[18]。本研究多因素非條件logistic回歸分析顯示胰腺癌組織病理分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移都為影響TGF-β1與S100A11陽性表達的獨立危險因素(P<0.05)。隨著遺傳學損傷的不斷積累，更多的抑癌基因失活而大量的癌基因被激活后，再加上外界環(huán)境的作用，導致胰腺癌的發(fā)生，二者共同加快腫瘤發(fā)展、增加腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移能力。

總之，TGF-β1與S100A11在胰腺癌組織中都呈現(xiàn)高表達狀況，與組織的病理分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，可作為判斷胰腺癌患者病情的重要指標。