miR-451、VEGF及TNF-α在食管癌患者血清中的表達(dá)水平及意義

邢艷麗

食管癌的發(fā)生與患者飲食習(xí)慣、基因、遺傳、環(huán)境等因素有關(guān)。該病在我國(guó)的發(fā)病情況呈現(xiàn)地區(qū)性差異，一定區(qū)域內(nèi)的絕對(duì)高發(fā)率與周圍地區(qū)的相對(duì)低發(fā)生率成鮮明對(duì)比，是我國(guó)食管癌最典型的流行病學(xué)特征。目前研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞因子TNF-α、腫瘤生長(zhǎng)因子VEGF參與食管癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移[1]。miR-451是機(jī)體病理狀態(tài)下細(xì)胞重要組成部分，在食管癌中表達(dá)異常。研究miR-451、VEGF及TNF-α血清表達(dá)水平能預(yù)測(cè)食管癌分期，指導(dǎo)臨床進(jìn)行個(gè)性化治療[2]。本研究在治療前檢測(cè)食管癌患者血清中miR-451、VEGF、TNF-α表達(dá)水平，指導(dǎo)臨床治療，現(xiàn)將結(jié)果匯報(bào)如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2016年1月至2017年1月收治的80例食管癌患者納入觀察組；另于同期選擇80例健康受試者納入對(duì)照組。觀察組患者中男性70例，女性10例，年齡32～59歲，平均年齡(49.59±1.74)歲。對(duì)照組患者中男性69例，女性11例，年齡32～60歲，平均年齡(49.54±1.7)歲。2組患者一般資料比較無(wú)差異，具有可比性(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①同意本研究，并自愿簽訂知情同意書的患者；②食管癌前、中期患者；③凝血功能正常的患者；④接受穿刺病理檢驗(yàn)的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤的患者；②不接受隨訪的患者。

1.2 方法

所有參與者入院后，空腹抽取患者靜脈血5 ml，檢驗(yàn)醫(yī)生在5 h內(nèi)離心處理，取其上清，并將2 ml血液的上清保存在-80 ℃的冰箱中待用，3 ml保存在-20 ℃的冰箱中。

⑴miR-451表達(dá)水平檢測(cè)：取-80 ℃的冰箱中上清，遵循miR-451說(shuō)明書提取要求，先提取RNA，經(jīng)脫洗后將RNA存于-80 ℃的冰箱中，在2 h內(nèi)進(jìn)行下一步反轉(zhuǎn)錄。將反轉(zhuǎn)錄引物進(jìn)行排序，合成目的基因，使用熒光測(cè)量法測(cè)量miR-451水平，并將所得結(jié)果詳細(xì)記錄。⑵VEGF、TNF-α表達(dá)水平：取-20 ℃的冰箱中上清，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)血清VEGF、TNF-α表達(dá)水平，并記錄檢測(cè)結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 入選結(jié)果

病理證實(shí)鱗狀細(xì)胞癌50例，腺癌30例；伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移58例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的22例。依據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期發(fā)現(xiàn)，Ⅰ期患者21例，Ⅱ期患者40例，Ⅲ期10例，Ⅳ期患者9例。

2.2 2組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比較

觀察組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平高于對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 2組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比較

2.3 食管癌分期各亞組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比較

Ⅰ期患者21例，Ⅱ期患者40例，Ⅲ期10例，Ⅳ期患者9例分別納入Ⅰ期組、Ⅱ期組、Ⅲ期組、Ⅳ期組。食管癌分期各亞組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比較發(fā)現(xiàn)，Ⅳ期>Ⅲ期>Ⅰ期、Ⅱ期(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 食管癌分期各亞組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比較

2.4 食管癌轉(zhuǎn)移各亞組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比較

將伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移58例患者，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的22例患者分別納入淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。研究發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 食管癌轉(zhuǎn)移各亞組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比較

3 討論

食管癌是我國(guó)最常見(jiàn)的癌癥之一，前期隱匿性較強(qiáng)，5年生存率<15%[3]。有學(xué)者認(rèn)為[4]，環(huán)境因素是影響食管癌發(fā)生的重要因素。朱煥鋒等[5]研究發(fā)現(xiàn)，相同條件的人暴露在相似環(huán)境內(nèi)，卻只有極少部分人發(fā)生食管癌。提示，環(huán)境因素不是影響食管癌發(fā)生的主要因素，個(gè)人遺傳因素是影響食管癌發(fā)生的主要因素。食管黏膜最早是原位癌，進(jìn)一步發(fā)展成早期浸潤(rùn)癌，隨著病情的持續(xù)發(fā)展，逐漸發(fā)展成中晚期食管癌[6]，直至機(jī)體生命終結(jié)。食管癌病理演化屬于生物學(xué)中細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、遺傳范疇。該病病程少則1年，多則幾十年。臨床普遍認(rèn)為，食管癌的產(chǎn)生與諸多因子有關(guān)[6-8]。該病屬于多階段發(fā)展疾病，但其發(fā)生與發(fā)展的確切機(jī)制尚未統(tǒng)一。隨著細(xì)胞分子生物學(xué)的發(fā)展，關(guān)于食管癌細(xì)胞因子作用研究越來(lái)越多。當(dāng)前研究發(fā)現(xiàn)腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移均與血液供給有關(guān)。食管癌典型凋亡細(xì)胞形態(tài)的特點(diǎn)鮮明：細(xì)胞質(zhì)紅染，細(xì)胞核染色質(zhì)明顯濃縮[9]，部分細(xì)胞出現(xiàn)核裂解碎片。食管癌典型凋亡小體多為圓形，細(xì)胞質(zhì)呈強(qiáng)嗜酸性。細(xì)胞凋亡速遞及指數(shù)隨病變逐漸加重。食管癌病理有隱伏型、糜爛性、板塊性、乳頭型、混合型[10]，其中除乳頭型癌外其他類型都無(wú)明顯腫塊形成。

miR-451是血清中一類斷鏈的小分子非編碼RNA，能調(diào)解多種細(xì)胞凋亡進(jìn)程，可成為腫瘤細(xì)胞標(biāo)志物。miR-451與靶信使RNA結(jié)合后控制及影響mRNA的翻譯，從而加快機(jī)體正常細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)癌性因子釋放。TNF-α是由機(jī)體活化巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞及T細(xì)胞分泌結(jié)合產(chǎn)生。該細(xì)胞因子主要負(fù)責(zé)機(jī)體炎癥期間的細(xì)胞轉(zhuǎn)移與調(diào)控，活性較好。王慶玉等[11]研究者認(rèn)為，TNF-α具有前抗炎及抗活性的作用，能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞快速增殖，誘導(dǎo)健康細(xì)胞凋亡，促進(jìn)癌細(xì)胞侵襲。TNF-α與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。食管癌患者中血清低濃度的TNF-α與治療預(yù)后成正相關(guān)。李鐵志等[12]大鼠實(shí)驗(yàn)證明，食管癌病鼠的TNF-α濃度與血液中蛋白表達(dá)量顯著提高。腫瘤血管的形成及生長(zhǎng)受血管生長(zhǎng)因子的調(diào)控，其中VEGF是目前所知作用最強(qiáng)、特異性最高的血管生長(zhǎng)因子。VEGF是一種內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂原，不僅能誘導(dǎo)血管通透性，還可導(dǎo)致血漿蛋白外滲到血管外間隙，從而形成蛋白纖維基質(zhì)[13]，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增生，形成高度血管化的間質(zhì)。機(jī)體新生血管及新基質(zhì)可為腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)提供基礎(chǔ)環(huán)境。VEGF在腫瘤壞死區(qū)表達(dá)明顯增高，并隨著腫瘤壞死區(qū)及新生腫瘤的缺氧程度增加。高巍等[14]研究者發(fā)現(xiàn)，VEGF能抑制樹突細(xì)胞的生成影響免疫機(jī)制，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的免疫逃脫。研究實(shí)驗(yàn)證實(shí)[15]，VEGF表達(dá)水平與惡性腫瘤成正相關(guān)。VEGF表達(dá)與食管癌分期及總生存率顯著相關(guān)。放射性治療后食管癌患者的VEGF陽(yáng)性及陰性表達(dá)的生存期有明顯差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本文認(rèn)為，VEGF可以成為食管癌的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)。本研究結(jié)果表明，食管癌患者的miR-451、VEGF、TNF-α水平顯著高于健康人。提示，食管癌患者血清miR-451、VEGF、TNF-α高表達(dá)。表明，miR-451、VEGF、TNF-α因子參與食管癌發(fā)生。TNF-α除具有抗腫瘤細(xì)胞活性劑免疫調(diào)節(jié)功能外，還具有介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的作用，TNF-α參與諸多病理生理改變，TNF-α在許多惡性疾病有均有高表達(dá)。食管癌患者TNF-α表達(dá)高于健康患者。證實(shí)食管癌患者體內(nèi)可能有一定的TNF-α活性物質(zhì)存在。觀察食管癌分期各亞組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比較結(jié)果可知，病情越嚴(yán)重的食管癌患者血清食管癌分期各亞組患者血清miR-451、VEGF、TNF-α表達(dá)水平越高，Ⅳ期患者表達(dá)水平最高。miR-451、VEGF及TNF-α表達(dá)水平可作為診斷食管癌臨床分期的重要標(biāo)準(zhǔn)，輔助醫(yī)生判斷疾病分期。分析食管癌轉(zhuǎn)移各亞組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比較結(jié)果可知，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者者血清miR-451、VEGF及TNF-α表達(dá)水平高于無(wú)轉(zhuǎn)移患者，表明患者血清miR-451、VEGF及TNF-α表達(dá)水平能提示食管癌患者是否出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，有利于手術(shù)治療。

綜上所述，食管癌的發(fā)生、發(fā)展在一定程度上取決于患者的生物學(xué)行為，食管癌在形成的早期有細(xì)胞增生及新血管生成，miR-451高表達(dá)能促使腫瘤細(xì)胞釋放，影響血管內(nèi)皮功能，增加其通透性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移及生成，可成為腫瘤細(xì)胞標(biāo)志物。VEGF高表達(dá)可誘導(dǎo)正常細(xì)胞凋亡，是食管癌的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)。TNF-α高表達(dá)可促進(jìn)癌細(xì)胞侵襲，為腫瘤細(xì)胞提供新的生存環(huán)境。術(shù)前檢查食管癌血清miR-451、VEGF及TNF-α表達(dá)水平能輔助醫(yī)生判斷疾病分期、是否出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，有利于臨床治療。