整合素-β3與雌、孕激素受體在子宮腺肌病中的表達(dá)及臨床意義

賀凌云 朱煒 羅君玲

子宮腺肌病廣義上是指子宮內(nèi)膜的腺體及部分間質(zhì)侵入子宮肌層，進(jìn)行性生長(zhǎng)，合并出血，致子宮肌層局部或廣泛增大的一種預(yù)后良好的疾病，臨床表現(xiàn)為經(jīng)量持續(xù)增多、經(jīng)期延長(zhǎng)和或繼發(fā)性、進(jìn)行性加劇的痛經(jīng)，痛經(jīng)率甚至高達(dá)64.8%～77.8%[1]。其具有粘附、侵襲及轉(zhuǎn)移等類(lèi)似于惡性腫瘤的生物學(xué)特性。目前該病發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，但發(fā)生原因與機(jī)制并不十分清楚。本研究擬探討整合素-β3及ER、PR在子宮腺肌病中的表達(dá)并分析其意義。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象選取我科2013年6月～2014年12月因子宮腺肌病行子宮切除或腺肌病病灶切除的患者46 例，年齡42～47 歲，平均（44.58±3.82）歲；另選取同時(shí)期宮頸CINⅢ及宮頸原位癌全子宮切除后宮體部獲取的正常子宮組織的患者20 例，年齡44～49歲，平均（46.55±2.86）歲。病理診斷均為我院兩名副主任醫(yī)師以上醫(yī)生診斷。全部研究對(duì)象的病理及臨床資料完整，術(shù)前6 個(gè)月內(nèi)未使用過(guò)甾體類(lèi)藥物。該研究經(jīng)倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，患者知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本收集及處理 子宮腺肌病患者在子宮切除及腺肌病病灶切除后隨即切取病灶組織1cm×1cm×1cm 大?。粚m頸CINⅢ及宮頸原位癌患者在子宮切除后，在宮體部切取1cm×1cm×1cm大小的正常子宮肌層組織。取材后立即放入4%中性甲醛中固定72h 后脫水包埋，每一個(gè)組織塊均先進(jìn)行HE 染色，進(jìn)行篩選，明確診斷后進(jìn)行免疫組化染色，分別用于檢測(cè)整合素-β3及ER、PR的表達(dá)。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色 采用鏈菌素親生物素-過(guò)氧化物酶法（streptavidin peroxidase，SP 法）檢測(cè)標(biāo)本中整合素-β3及ER、PR的表達(dá)。鼠抗人整合素-β3單克隆抗體及兔抗人ER、PR單克隆抗體均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。以PBS 液代替一抗做陰性對(duì)照。具體操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判定整合素-β3 的陽(yáng)性表達(dá)呈現(xiàn)黃色及棕黃色顆粒，在腺肌病病灶中主要定位于腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞的胞漿中；而正常子宮肌層中主要表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞的胞漿中，肌細(xì)胞中較少表達(dá)。ER及PR的陽(yáng)性表達(dá)呈現(xiàn)棕黃色顆粒，在腺肌病病灶中主要定位于腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞核中；在正常子宮肌層中僅間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)。

應(yīng)用Leica QW550 圖像分析系統(tǒng)并采用陽(yáng)性單位（positive unit，PU）對(duì)免疫組化染色的標(biāo)本進(jìn)行量化分析。在排除切片底色因素后，按灰度值將純免疫組化反應(yīng)的程度分為0～255 個(gè)等級(jí)，共計(jì)256個(gè)等級(jí)，每一個(gè)等級(jí)即為一個(gè)PU。PU 值的大小與陽(yáng)性反應(yīng)程度成正比[2]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。整合素-β3、ER 及PR 陽(yáng)性表達(dá)的PU 值采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

在子宮腺肌病病灶及正常子宮肌層中整合素-β3 及ER、PR 均呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，表現(xiàn)為黃色或棕黃色顆粒，其中，整合素-β3主要在腺肌病病灶中的上皮及間質(zhì)細(xì)胞漿中，肌組織少見(jiàn)。但是，正常子宮肌層中表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞胞漿，肌組織細(xì)胞中較少表達(dá)。ER及PR在腺肌病病灶中主要定位于腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞核中，在正常子宮肌層中僅間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)。

應(yīng)用Leica QW550 圖像分析系統(tǒng)并采用陽(yáng)性單位（positive unit，PU）對(duì)免疫組化染色的標(biāo)本進(jìn)行量化分析，結(jié)果顯示各部位表達(dá)的PU值不一致，見(jiàn)表1。整合素-β3、ER、PR與正常子宮肌層中表達(dá)均可見(jiàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 整合素-β3及ER、PR在子宮腺肌病病灶及正常子宮肌層中的表達(dá)（±s）

表1 整合素-β3及ER、PR在子宮腺肌病病灶及正常子宮肌層中的表達(dá)（±s）

組織子宮腺肌病病灶正常子宮肌層P整合素-β3 13.58±4.08 19.80±8.54＜0.05 ER 32.62±5.37 27.93±4.96＜0.05 PR 30.98±4.94 37.46±8.50＜0.05

3 討論

子宮腺肌?。╝denomyosis）是子宮內(nèi)膜腺體及間質(zhì)組織侵入子宮肌層并在其中粘附、種植、浸潤(rùn)同時(shí)伴隨新生血管的增生最終呈現(xiàn)彌漫性生長(zhǎng)的一種疾病，其組織學(xué)形態(tài)表現(xiàn)為良性，但卻具有惡性腫瘤的生物學(xué)特性。然而，有關(guān)子宮腺肌病發(fā)生的原因與機(jī)制仍不十分清楚。子宮肌層內(nèi)的各種細(xì)胞因子、免疫因子、激素及其受體、酶及酶的抑制劑等，對(duì)其發(fā)生與發(fā)展均起著重要作用。有學(xué)者通過(guò)聲脈沖輻射力成像技術(shù)診斷子宮腺肌病，認(rèn)為超聲聲脈沖輻射力成像技術(shù)能實(shí)時(shí)敏感檢測(cè)子宮腺肌病，可重復(fù)性好，同時(shí)能體現(xiàn)子宮腺肌病肌層病變隨月經(jīng)周期性的改變，有望成為子宮腺肌病診斷手段之一[3]。當(dāng)前，對(duì)于該病的治療包括曼月樂(lè)（左炔諾孕酮宮內(nèi)緩釋系統(tǒng)）、病灶切除、高強(qiáng)度聚焦超聲刀治療、腹腔鏡輔助下陰式子宮全切術(shù)、LNG-IUS 治療、芳香烴酶抑制劑、子宮動(dòng)脈栓塞等治療方法[4～12]，但對(duì)于其與整合素之間的關(guān)系的研究較少，有學(xué)者認(rèn)為子宮動(dòng)脈栓塞治療該病痛經(jīng)的有效率為77.2%[13]，同時(shí)，高強(qiáng)度聚焦超聲消融治療能改善有生育要求的子宮腺肌病患者的臨床癥狀，且不增加妊娠及分娩時(shí)并發(fā)癥的發(fā)生率[14]，聯(lián)合GnRH-a和（或）LNG-IUS能提高高強(qiáng)度聚焦超聲消融治療子宮腺肌病的療效，降低復(fù)發(fā)率[15]。

子宮內(nèi)膜腺體與間質(zhì)脫離原來(lái)位置進(jìn)入子宮肌層導(dǎo)致子宮腺肌病的發(fā)生，除內(nèi)膜腺體與間質(zhì)自身的因素，細(xì)胞外組織基質(zhì)的異常對(duì)疾病的發(fā)生起著決定性的作用。在組織基質(zhì)中存在著一種細(xì)胞因子即整合素。整合素是由α、β兩個(gè)亞單位以非共價(jià)鍵連接組成的異二聚體跨膜糖蛋白，屬于層粘連蛋白受體，存在于細(xì)胞表面，可粘附其他細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)，它是細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間相互連接并傳遞多種生物學(xué)信號(hào)的通道，并在細(xì)胞粘附、生長(zhǎng)、增殖與遷移中發(fā)揮重要作用[16]。當(dāng)整合素合成不足或降解加速使其表達(dá)下降，即可影響其功能的有效發(fā)揮。本研究顯示，子宮腺肌病與正常子宮肌層中整合素-β3均呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，其PU值為13.85±4.08與19.80±8.54，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明子宮腺肌病病灶中整合素-β3 的表達(dá)下調(diào)，其功能減弱并由此導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)降解及重建失調(diào)，出現(xiàn)細(xì)胞外基質(zhì)疏松，粘附能力降低，內(nèi)膜細(xì)胞間的連接減弱，穩(wěn)定性發(fā)生紊亂，導(dǎo)致腺肌病病灶擴(kuò)散而加速疾病進(jìn)一步發(fā)展。子宮腺肌病為一種進(jìn)行性加重的疾病，此機(jī)制也符合子宮腺肌病的臨床特征。

子宮腺肌病是一種雌激素依賴性疾病，高水平雌激素是子宮腺肌病發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素[17]。雌激素可以使子宮內(nèi)膜腺體與間質(zhì)組織向肌層逆向生長(zhǎng)，導(dǎo)致子宮腺肌病的發(fā)生，在此過(guò)程中雌激素需要通過(guò)與特異性的雌激素受體結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)[18]。孕激素作為一種維持子宮內(nèi)膜周期性變化的重要激素，對(duì)子宮腺肌病的發(fā)生與發(fā)展起著重要作用，同樣孕激素也需要與孕激素受體結(jié)合才能發(fā)揮作用。當(dāng)子宮內(nèi)膜腺體異位進(jìn)入子宮肌層后也同樣受到雌、孕激素的影響而產(chǎn)生相應(yīng)的變化。本研究顯示，子宮腺肌病病灶及正常子宮肌層中雌激素受體表達(dá)的PU值為32.62±5.37與27.93±4.96（P＜0.05），表明子宮腺肌病病灶中雌激素受體的表達(dá)高于正常子宮肌層，而雌激素受體是反映雌激素調(diào)控狀態(tài)與效能的重要指標(biāo)[19]。高水平的雌激素受體可以結(jié)合高水平的雌激素而發(fā)揮作用，當(dāng)子宮內(nèi)膜腺體進(jìn)入肌層后，在這種高水平雌激素環(huán)境的影響下增生更加活躍，移動(dòng)、種植與生長(zhǎng)加速，從而促進(jìn)子宮腺肌病的發(fā)展。而孕激素受體在子宮腺肌病病灶及正常子宮肌層中也呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，其PU 值為30.98±4.94與37.46±8.50（P＜0.05），表明在子宮腺肌病病灶中仍有較高水平的孕激素受體表達(dá)，提示異位進(jìn)入肌層的內(nèi)膜腺體也同樣受到孕激素的影響而產(chǎn)生相應(yīng)的變化。異位的子宮內(nèi)膜腺體在雌、孕激素的共同作用下依然出現(xiàn)增生、分泌并出血的改變，繼而加速子宮腺肌病的發(fā)展。同時(shí)，免疫組化分析結(jié)果也提示在子宮腺肌病病灶及正常子宮肌層中整合素-β3及ER、PR均呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，表現(xiàn)為黃色或棕黃色顆粒，其中，整合素-β3主要在腺肌病病灶中的上皮及間質(zhì)細(xì)胞漿中，肌組織少見(jiàn)。但是，正常子宮肌層中表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞胞漿，肌組織細(xì)胞中較少表達(dá)。ER及PR在腺肌病病灶中主要定位于腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞核中，在正常子宮肌層中僅間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)。說(shuō)明3者可能在子宮腺肌病中相互作用，相關(guān)性機(jī)制需進(jìn)一步探討。

研究認(rèn)為，整合素-β3在子宮內(nèi)膜的表達(dá)受雌、孕激素的調(diào)控，雌激素對(duì)整合素-β3 的表達(dá)有抑制作用，而孕激素則誘導(dǎo)其表達(dá)，兩者呈反向調(diào)節(jié)，相互協(xié)調(diào)平衡整合素-β3 在子宮內(nèi)膜的正常表達(dá)[20]。本研究也顯示，雌激素受體在子宮腺肌病病灶中的表達(dá)較正常子宮肌層上調(diào)，而整合素-β3 的表達(dá)則下調(diào)。當(dāng)雌激素與受體結(jié)合后通過(guò)相應(yīng)機(jī)制抑制整合素-β3的表達(dá)，使細(xì)胞間粘連松動(dòng)，異位腺體細(xì)胞容易移動(dòng)為子宮肌腺病的發(fā)生與發(fā)展提供了病理學(xué)基礎(chǔ)。而孕激素受體的表達(dá)在子宮腺肌病病灶中的表達(dá)下調(diào)，對(duì)整合素-β3的促進(jìn)作用減弱，整合素-β3 不能有效發(fā)揮作用，也促進(jìn)子宮腺肌病的發(fā)展。

綜合分析，我們認(rèn)為，整合素-β3 與ER、PR 在子宮腺肌病的發(fā)病中起著相互促進(jìn)的作用。研究該機(jī)制有助于我們采取更有效的治療方案。