人腦膠質(zhì)瘤組織中HMGB1 NF-кB的表達及臨床意義

吳昊 鄭卜毅 鄒詣 童凌云 王歐洋 朱鵬磊

膠質(zhì)瘤是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)性惡性腫瘤，約占原發(fā)性顱內(nèi)腫瘤的28%。2007年WHO制定的分類標準將膠質(zhì)瘤分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級，其對臨床診斷膠質(zhì)瘤及判斷其預后提供了參考依據(jù)。然而，膠質(zhì)瘤的發(fā)病機制目前尚未完全明確，因此，探討膠質(zhì)瘤疾病發(fā)生及惡性進展的相關機制，對延長患者生存周期及改善預后有著重要意義。高遷移率族蛋白B1（HMGB1）是近來年臨床研究的熱點，其定位于染色體13q12，是一種廣泛存在于哺乳動物中非組蛋白染色體結(jié)合蛋白，主要參與多種生物行為，包括基因表達、轉(zhuǎn)錄，細胞炎癥反應等［1-2］。已有研究發(fā)現(xiàn)HMGBl/NF - kB參與多數(shù)惡性腫瘤的發(fā)生、進展過程，并與腫瘤的病理特征關聯(lián)密切。在此基礎上，本研究通過分析對比76例膠質(zhì)瘤組織及20例正常腦組織中HMGBl、NF-kB的陽性表達情況，探討HMGB1及NF-kB與膠質(zhì)瘤的臨床因素、病理特征的相關性，研究其在膠質(zhì)瘤疾病發(fā)生、病理過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年9月至 2017年9月溫州市人民醫(yī)院神經(jīng)外科收治的76例行膠質(zhì)瘤切除術(shù)的膠質(zhì)瘤患者術(shù)后腫瘤標本設為觀察組，其中男44例，女32例；年齡32～81歲，平均（55.42 ± 5.18）歲。納入標準：（1）影像資料MRI提示為膠質(zhì)瘤，病理報告明確為膠質(zhì)瘤；（2）均為首次手術(shù)，無復發(fā)二次手術(shù)；（3）術(shù)前未行放化療。并依照2007版WHO制定神經(jīng)腫瘤的分類標準：低級別膠質(zhì)瘤（LGG）（Ⅰ、Ⅱ級），高級別膠質(zhì)瘤（HGG）（III、IV級）。另選取20例同期行顱內(nèi)減壓術(shù)的患者術(shù)后正常腦組織設為對照組。本項目經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會審查及備案，并與患者簽定知情同意書。

1.2 免疫組化染色評估 標本在4%多聚甲醛溶液中固定24h，石蠟包埋。蠟塊切至厚度為3 μm切片。隨后按常規(guī)制片步驟進行二甲苯脫蠟，乙醇水化，抗原孵化，抗原修復，脫色脫水，蓋玻片。使用尼康高分辨顯微鏡觀察結(jié)果。選擇每張切片免疫反應較強區(qū)域，高倍視野（×400）觀察5個不重復視野，計數(shù) HMGB1及NF - kB染色細胞，染色表達率=染色細胞數(shù)/總細胞數(shù)×100%。無染色細胞為0分，染色率≤25%為1 分，25%＜染色率≤50%為2分，50%＜染色率≤75%為3分，染色率＞75%為4分；陰性（-）：0分，低表達（+）：1～2分，高表達（+ +）：3～4分。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料組間比較行χ2檢驗，計量資料比較行t檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組和對照組之間HMGB1、NF-kB表達陽性水平的比較 見表1。

表1 HMGB1、NF-kB在正常組織和膠質(zhì)瘤組織中的表達［n（%）］

2.2 HMGB1、NF-kB的蛋白表達與腫瘤惡性程度的相關性分析 見表2。

表2 HMGB1、NF-kB的蛋白表達與臨床特征的相關性分析［n（%）］

2.3 HMGBl、NF-kB在膠質(zhì)瘤樣本中陽性表達的相關性 在膠質(zhì)瘤標本中，HMGBl與NF-kB的陽性表達逐漸增高，二者呈正相關（r=0.316，P=0.0037）。見表3。

表3 HMGB1、NF-kB在膠質(zhì)瘤組織中的相關性（n）

3 結(jié)論

高遷移率族蛋白（HMG）是一類高度保守的DNA結(jié)合蛋白，其廣泛存在于腦、心、肝、脾及淋巴組織的真核細胞內(nèi)，HMG族蛋白分為HMGA、HMGB及HMGN家族。HMGB又分為 HMGB1 和HMGB2，存在于細胞核內(nèi)HMGB1主要參與包括基因轉(zhuǎn)錄、DNA修復等生物學過程，而存在于細胞核外HMGB1可介導炎癥反應，調(diào)控細胞增殖、分化及腫瘤生長等生理過程。目前多種研究發(fā)現(xiàn)HMGB1表達與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程密切相關，有研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌、胃惡性腫瘤組織中HMGB1呈高表達水平，促進惡性腫瘤細胞的增殖、遷徙和周圍血管的生成［3-4］。作者通過免疫組化法發(fā)現(xiàn)HMGB1在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中的表達水平對比正常腦組織明顯升高，因此作者認為其與膠質(zhì)瘤發(fā)生密切相關。

核因子（NF - kB）屬于Rel蛋白家族成員的一員，以 p50 /p65與抑制蛋白相結(jié)合而形成多聚體的形式存在細胞質(zhì)內(nèi)，是目前已知細胞內(nèi)眾多免疫和炎癥反應體系的中間調(diào)節(jié)因子之一。其廣泛存在于真核生物體內(nèi)，能與免疫球蛋白結(jié)合形成蛋白因子從而調(diào)控基因的表達與轉(zhuǎn)錄。NF-kB亦是重要的炎癥通路的中間調(diào)節(jié)因子，在細胞核外與許多細胞信號通路有著密切的關系，參與免疫反應、細胞增殖、遷移及腫瘤細胞侵襲等過程［5］。已有研究表明NF-kB在胃癌、非小細胞肺癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤組織中陽性表達明顯增加，其高表達與腫瘤生物學行為密切相關［6］。并且研究還發(fā)現(xiàn)細胞外的HMGB1可與其受體TLR4或 RAGE結(jié)合，激活細胞外重要的細胞通路，如 MAPK、NF-κB通路，以誘發(fā)腫瘤細胞的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移［7］。本研究發(fā)現(xiàn)在神經(jīng)膠質(zhì)腫瘤中NF-kB的表達顯著高于正常腦組織，提示膠質(zhì)瘤的發(fā)病過程可能存在NF - kB因子的參與。而且HMGB1、NF-kB二者陽性表達隨著腫瘤惡性程度的升高而逐漸增強，提示其可能涉及膠質(zhì)瘤的生長、進展等過程。另外，通過相關性研究發(fā)現(xiàn)HMGB1、NF - kB 在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中存在正相關性。然而，目前對HMGB1- NF-kB如何相互調(diào)節(jié)尚缺乏相關研究，仍需闡明膠質(zhì)瘤發(fā)病中HMGB1- NF - kB相互如何調(diào)節(jié)的機制，并為將來膠質(zhì)瘤的診治過程提供理論依據(jù)。