靈芝破壁孢子粉對小鼠運(yùn)動(dòng)恢復(fù)功能的影響

曹曉明

（煙臺南山學(xué)院，山東 煙臺 265706）

流行病學(xué)研究表明，大量運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練在很大程度上會(huì)造成機(jī)體長時(shí)間處于應(yīng)激狀態(tài)，不但對機(jī)體運(yùn)動(dòng)能力產(chǎn)生不好的影響，而且會(huì)令機(jī)體免疫力下降，干擾運(yùn)動(dòng)恢復(fù)功能。當(dāng)前在大量運(yùn)動(dòng)后，利用中藥或食品的方式調(diào)節(jié)，從而提高身體功能恢復(fù)速度，被廣泛應(yīng)用[1,2］。靈芝孢子就是靈芝生長成熟期從菌蓋中彈射的小顆粒物，屬于靈芝的生殖細(xì)胞，含靈芝所有遺傳活性物質(zhì)[3］。靈芝孢子的化學(xué)成分令其有抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫力等功效。靈芝孢子存在2層質(zhì)地堅(jiān)硬且耐酸的孢壁，影響機(jī)體對其的消化吸收，需破壁服用[4,5］。本研究針對長期訓(xùn)練小鼠，補(bǔ)充靈芝破壁孢子粉。比較小鼠停止訓(xùn)練后的運(yùn)動(dòng)能力與免疫力，研究靈芝破壁孢子粉對小鼠運(yùn)動(dòng)恢復(fù)功能的影響。

1 研究對象和方法

1.1 受試物

受試物是上海得一健生物科技有限公司提供的靈芝破壁孢子粉，其通過低溫物理法破壁，破壁率很高，超過90%。

1.2 實(shí)驗(yàn)小鼠和分組

實(shí)驗(yàn)選擇120只SPF級健康雄性小鼠作為研究對象，小鼠的體重在16 g～24 g范圍內(nèi)，由山東醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室提供。將小鼠劃分成3組，第1組為對照組，只服用正常的飼料與水，第2組與第3組為實(shí)驗(yàn)組。其中第2組小鼠除服用正常的飼料和水外，服用小劑量的靈芝破壁孢子粉，第3組小鼠服用正常的飼料和水外，服用大劑量的靈芝破壁孢子粉，依次被稱作小劑量組與大劑量組。每組小鼠40只。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

訓(xùn)練方式選用無負(fù)重游泳訓(xùn)練，詳細(xì)訓(xùn)練過程如下。

游泳池的大小是300 cm×220 cm×50 cm，游泳池內(nèi)壁光滑，同時(shí)和底部垂直，從而防止小鼠游泳時(shí)在池壁上休息。

在小鼠訓(xùn)練時(shí)，需要專人管理，令其以安靜的游泳方式進(jìn)行，避免出現(xiàn)撕咬等現(xiàn)象，防止小鼠受外界干擾造成負(fù)荷有顯著差異[6］。

小鼠每天訓(xùn)練1次，共訓(xùn)練3周，每天的訓(xùn)練時(shí)間是50 min。

在進(jìn)行上述訓(xùn)練的過程中，對照組與服用靈芝破壁孢子粉的2個(gè)實(shí)驗(yàn)組均進(jìn)行相同量的訓(xùn)練。

3組小鼠通過自有飲食的方式在相同環(huán)境下飼養(yǎng)，3組小鼠飲食飼料一樣，但在小劑量組中添加小劑量的靈芝破壁孢子粉，約0.1 g，在大劑量組中添加大劑量的靈芝破壁孢子粉，約0.4 g，共干預(yù)3周。

1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果處理

實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，通過進(jìn)行描述，組間對比通過LSD檢驗(yàn)實(shí)現(xiàn)[7,8］。在原始數(shù)據(jù)不滿足方差齊性要求的情況下，需對數(shù)據(jù)進(jìn)行轉(zhuǎn)換，完成比較檢驗(yàn)。在P＜0.05的情況下，認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[9］。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 靈芝破壁孢子粉對小鼠免疫器官臟器指數(shù)的影響

在訓(xùn)練前后給小鼠稱重同時(shí)記錄，進(jìn)行灌喂、造模以及眼眶采血處理后將小鼠處死，解剖處脾臟與胸腺，依次用生理鹽水清洗并用濾紙吸干，稱重，則臟器指數(shù)可通過臟器質(zhì)量與體質(zhì)量之比測定[10］。

經(jīng)實(shí)驗(yàn)，靈芝破壁孢子粉對小鼠免疫器官臟器指數(shù)的影響結(jié)果用表1進(jìn)行描述。

表1 靈芝破壁孢子粉對小鼠免疫器官臟器指數(shù)的影響Tab.1 Effect of Ganoderma lucidum spore powder on immune organ index in mice

分析表1可以看出靈芝破壁孢子粉不同劑量組別小鼠與對照組小鼠脾臟指數(shù)與胸腺指數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明靈芝破壁孢子粉對小鼠脾臟與胸腺?zèng)]有顯著影響。

2.2 遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)

遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)通過足趾增厚法測試，在訓(xùn)練完成后，向小鼠腹腔注射綿陽紅細(xì)胞，注射后一段時(shí)間對左后足跖厚度進(jìn)行測量，再在測量處皮下注射綿陽紅細(xì)胞，注射后一段時(shí)間對左后足跖厚度進(jìn)行測量，相同部位測量5次取均值，通過2次操作前后足跖厚度差值，也就是足跖腫脹度對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)進(jìn)行描述[11］。

運(yùn)動(dòng)小鼠服用不同劑量靈芝破壁孢子粉以及未服用靈芝破壁孢子粉遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)情況用表2進(jìn)行描述。

表2 不同小組小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)情況Tab.2 Delayed allergic reactions in different groups of mice

分析表2可以看出，小劑量組腫脹度與對照組相比明顯降低，有非常顯著性差異（P＜0.01），大劑量組腫脹度與對照組相比也明顯降低，有非常顯著性差異（P＜0.01），說明靈芝破壁孢子能夠降低小鼠腫脹程度，延緩遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。

2.3 靈芝破壁孢子粉對小鼠血清溶血素水平的影響

血清溶血素通過半數(shù)溶血值測定法測定，在力竭游泳訓(xùn)練完成后，采小鼠尾血2 mL，靜置1 h，令血清充分析出，經(jīng)1 500 r·min-1離心處理8 min，對血清進(jìn)行采集，通過生理鹽水對血清進(jìn)行稀釋，在37℃水浴鍋中孵育12 min，冰浴12 min，停止反應(yīng)，1 500 r·min-1離心處理8 min，取上清液，在540 nm處對各管OD值進(jìn)行測定，對結(jié)果進(jìn)行記錄[12］。表3所示的是靈芝破壁孢子粉對3組小鼠血清溶血素水平的影響結(jié)果。

表3 3組小鼠血清溶血素水平變化情況Tab.3 Changes in serum hemolysin levels in three groups of mice

分析表3可以看出，對照組、小劑量組與大劑量組小鼠血清半數(shù)溶血值隨靈芝破壁孢子粉劑量的升高而升高，小劑量組半數(shù)溶血值高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。大劑量組半數(shù)溶血值高于對照組，差異有非常顯著性（P＜0.01），可以看出靈芝破壁孢子粉可有效提升大量訓(xùn)練后小鼠血清溶血素水平。

2.4 靈芝破壁孢子粉對NK細(xì)胞活性的影響

研究靈芝破壁孢子粉對自然殺傷（NK） 細(xì)胞活性影響時(shí)，通過乳酸酶脫氫法對其進(jìn)行檢測[13］，得到的結(jié)果用表4進(jìn)行描述。

表4 3組小鼠NK細(xì)胞活性比較結(jié)果Tab.4 Comparison of NK cell activity in three groups of mice

分析表4可以看出，和對照組相比，小劑量組與大劑量組小鼠NK細(xì)胞雖然均在一定程度上更高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）。

2.5 靈芝破壁孢子粉對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力的影響

小鼠最后一次訓(xùn)練完成后，在腹腔注射2 mL雞紅細(xì)胞懸液。30 min后頸椎脫臼處死小鼠，把腹部朝上放置，切開腹壁皮膚。在腹腔注射2 mL生理鹽水，通過吸管吸出腹腔洗液，滴在2篇載玻片上，置于37℃孵箱中40 min。取出在生理鹽水中漂洗，取出晾干，并染色5 min，通過蒸餾水漂洗取出晾干，在顯微鏡下觀察[14］。通過下述關(guān)系式求出吞噬率與吞噬指數(shù):

吞噬率=吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)量/計(jì)數(shù)的吞噬細(xì)胞數(shù)量×100%。

吞噬指數(shù)=吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)。

靈芝破壁孢子粉對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力的影響結(jié)果用表5進(jìn)行描述。

表5 3組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力比較Tab.5 Three groups of mice peritoneal macrophage phagocytic ability is chicken erythrocytes

分析表5可知，大劑量靈芝破壁孢子粉處理組的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬率以及吞噬指數(shù)與對照組相比顯著升高（P＜0.05），小劑量靈芝破壁孢子粉處理組的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬率以及吞噬指數(shù)與對照組相比在一定程度上有所升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.6 小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)

最后一次訓(xùn)練后30min，在小鼠尾部靜脈注射稀釋的印度墨汁，并且開始計(jì)時(shí)。注入墨汁后5 min，從內(nèi)眥靜脈叢取血15 μL，馬上添加至碳酸鈉溶液中。通過酶標(biāo)儀在540 nm處對光密度值進(jìn)行測定，獲取吞噬指數(shù)[15］。得到的靈芝破壁孢子粉對小鼠碳廓清吞噬指數(shù)的影響結(jié)果用表6進(jìn)行描述。

表6 靈芝破壁孢子粉對小鼠碳廓清吞噬指數(shù)的影響Tab.6 Effect of phagocytic index Ganoderma spores carbon clearance in mice

分析表6可以看出，服用小劑量靈芝破壁孢子粉小鼠碳廓清吞噬指數(shù)和對照組相比有所降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。而服用大劑量靈芝破壁孢子粉小鼠碳廓清吞噬指數(shù)和對照組相比顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明服用多量靈芝破壁孢子粉對小鼠碳粒廓清能力有顯著提高。

3 討論與結(jié)論

長期大運(yùn)動(dòng)量訓(xùn)練會(huì)使機(jī)體免疫功能降低，對感染性疾病的易感率明顯提升，影響機(jī)體運(yùn)動(dòng)恢復(fù)功能。本文通過研究靈芝破壁孢子粉對小鼠運(yùn)動(dòng)恢復(fù)功能的影響，為靈芝破壁孢子粉應(yīng)用的研究提供全面的信息基礎(chǔ)，對推廣靈芝破壁孢子粉具有重要應(yīng)用價(jià)值。

靈芝破壁孢子粉為靈芝的生殖細(xì)胞，是濃縮的靈芝精華。當(dāng)前大量醫(yī)學(xué)研究表明，靈芝破壁孢子粉可有效提高機(jī)體免疫力與調(diào)節(jié)身體不同組織的機(jī)能，可對腫瘤產(chǎn)生抑制作用，還有抗病毒、降糖降脂與延緩衰老的功效。

按照靈芝破壁孢子粉的用法、用量對訓(xùn)練后小鼠運(yùn)動(dòng)恢復(fù)功能的影響進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，靈芝破壁孢子粉對小鼠免疫器官臟器指數(shù)無顯著影響。在細(xì)胞免疫方面，小劑量組與大劑量組小鼠都可顯著降低小鼠足腫脹情況。服用靈芝破壁孢子粉后，小劑量組與大劑量組小鼠可延緩小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，有助于小鼠運(yùn)動(dòng)恢復(fù)功能的提高。在體液免疫功能方面，小劑量組與大劑量組小鼠可提升血清半數(shù)溶血值，也就是靈芝破壁孢子粉可有效提升大量訓(xùn)練后小鼠血清溶血素水平，改善小鼠運(yùn)動(dòng)恢復(fù)功能。在巨噬細(xì)胞功能方面，小劑量組與大劑量組小鼠能夠提高腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的能力，而且大劑量組能夠顯著提高運(yùn)動(dòng)后小鼠的碳廓清能力。但在NK細(xì)胞活性方面無顯著影響，這可能受到測量儀器等的影響出現(xiàn)檢測誤差。但整體看來，靈芝破壁孢子粉有很好的提高免疫功能的作用，靈芝破壁孢子粉可能通過免疫細(xì)胞提高活性，對機(jī)體免疫功能進(jìn)行調(diào)節(jié)?；咀饔脵C(jī)制是靈芝孢子粉增強(qiáng)了巨噬細(xì)胞水平調(diào)節(jié)免疫，有助于干擾素生成，調(diào)節(jié)免疫功能。

綜上可以看出，在大量運(yùn)動(dòng)期間給小鼠補(bǔ)充靈芝破壁孢子粉，在整體上有助于改善小鼠免疫力指標(biāo)，而且有利于小鼠身體運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)，提高小鼠運(yùn)動(dòng)能力，訓(xùn)練效果更好。同時(shí)提示長期鍛煉人群，在鍛煉過程中補(bǔ)充靈芝破壁孢子粉對提高健身效果有益，靈芝破壁孢子粉有很好的應(yīng)用前景。