HPLC法測(cè)定止眩膠囊中丹酚酸B的含量

山西省晉城市食品藥品檢驗(yàn)所，山西 晉城 048000

止眩膠囊由丹參、當(dāng)歸、延胡索、雞血藤、莪術(shù)、蒲公英、石決明、薏苡仁、夏枯草、澤瀉、續(xù)斷、桃仁、醋三棱、川芎等14味藥物組成，具有活血化瘀、通脈止眩等功效，適用于原發(fā)性高血壓。該膠囊為醫(yī)院制劑，原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較低，不能全面反映制劑質(zhì)量狀況，為更好地控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，提高標(biāo)準(zhǔn)，擬增加含量測(cè)定等內(nèi)容，方中以丹參為君藥，走血分、通血脈，攻擅活血化瘀，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，丹參具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠狀血流量，促進(jìn)毛細(xì)管血管網(wǎng)開(kāi)放，擴(kuò)張血管等作用[1]?；诖?，筆者選擇丹參作為控制指標(biāo)，建立了其有效成分丹酚酸B的含量測(cè)定方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Waters 2695高效液相色譜儀(2998二極管陣列檢測(cè)器，美國(guó)Waters)；AUW120D型電子分析天平(日本島津)；BRANSONIC 超聲波清洗機(jī)(美國(guó)BRANSON)；Medium-s300超純水器(四川優(yōu)普超純科技有限公司)。

1.2 材料 丹酚酸B對(duì)照品(批號(hào)：111562-201514，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；止眩膠囊(批號(hào)：180101、180102、180103，自制)；乙腈為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取丹酚酸B對(duì)照品1.85 mg，置10 mL棕色量瓶中，加75%甲醇至刻度，搖勻，制得每1 mL含0.185 mg的溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物1 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50 mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理(功率150 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用75%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例依法配制除丹參以外的陰性制劑，精密稱(chēng)取適量，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.2 色譜條件 色譜柱：Waters xterra C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇乙腈(3∶1)-1.0%甲酸溶液(34∶66)；檢測(cè)波長(zhǎng)：286 nm；流速：1 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。

2.3 含量測(cè)定方法學(xué)考察

2.3.1 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10 μL，注入液相色譜儀中，記錄色譜圖(如圖1所示)。試驗(yàn)表明，陰性對(duì)照溶液的色譜峰中，在丹酚酸B對(duì)應(yīng)的位置上無(wú)干擾，專(zhuān)屬性較強(qiáng)。

2.3.2 線性關(guān)系的考察 精密量取“2.1.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、2.0 mL至2 mL量瓶中，用75%甲醇定容，得不同濃度對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積積分值，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量ng為橫坐標(biāo)作圖，得一直線回歸方程：Y=1 102.1X-58097，r=0.999 9，表明丹酚酸B在進(jìn)樣量92.5～1 850 ng范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.3 精密度試驗(yàn) 取“2.1.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，進(jìn)樣10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果丹酚酸B峰面積積分值RSD值為0.58%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號(hào)180101的止眩膠囊樣品，稱(chēng)取6份，精密稱(chēng)定，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備溶液，測(cè)定峰面積積分值，計(jì)算平均含量為5.18 mg/g，RSD值為0.49%(n=6)。表明本方法重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，在室溫下放置，于0、2、4、6、8、10 h分別進(jìn)樣10 μL，并測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD為1.32%(n=6)。表明供試品溶液在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的樣品(批號(hào)180101：5.18 mg/g)6份，分別精密加入丹酚酸B對(duì)照品適量，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備溶液，測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 丹酚酸B加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.4 樣品含量測(cè)定 取不同批號(hào)止眩膠囊3批(批號(hào)：180101、180102、180103)，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備溶液，進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算樣品中丹酚酸B的含量，分別為5.18 mg/g、5.20 mg/g、5.16 mg/g。

3 討論

丹參為本處方的君藥，丹酚酸B為丹參的主要有效成分[2-3]，故選擇丹酚酸B作為控制本品質(zhì)量的指標(biāo)成分。

在流動(dòng)相的選擇上，考察了乙腈-0.1%磷酸溶液(22∶78)[2]，乙腈-甲醇-甲酸-水(10∶30∶1∶59)[3]和甲醇：乙腈(3∶1)-1.0%甲酸溶液(34∶66)的流動(dòng)相體系，通過(guò)比較出峰時(shí)間、峰形、拖尾因子、分離度等，選擇甲醇乙腈(3∶1)-1.0%甲酸溶液(34∶66)為本方法的流動(dòng)相體系。

在提取溶劑及提取方式的選擇上，考察了不同的提取溶劑(70%乙醇[2]、75%甲醇[4]、甲醇[5])以及提取方式(加熱回流、超聲處理、索氏提取)對(duì)所測(cè)組分提取效果的影響，綜合考慮提取率以及操作的便捷性，確定提取方式為75%甲醇超聲處理30 min。

上述三批止眩膠囊中丹酚酸B含量測(cè)定來(lái)看，結(jié)果重現(xiàn)性較好，表明本文所建立的方法適用于該制劑的質(zhì)量控制，對(duì)于原藥材、飲片的選擇，制劑的生產(chǎn)，存儲(chǔ)環(huán)境的控制以及有效期的考察等方面可以起到數(shù)據(jù)支撐的作用。