快速檢測法在蔬菜農(nóng)藥殘留含量調查分析中的應用

李葉青 ，皮小弟，王 森，張 婕，羅櫻桃，鄧桂美

（1.河源職業(yè)技術學院機電工程學院，廣東 河源 517000；2.廣東省河源市質量計量監(jiān)督檢測所，廣東 河源 517000）

農(nóng)藥，對于防治病蟲害、去除雜草、調節(jié)農(nóng)作物生長具有重要作用。中國農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)數(shù)量多、規(guī)模小而且分散，生產(chǎn)者法律意識比較弱，從業(yè)人口眾多，構成了農(nóng)藥殘留安全問題多發(fā)并將在較長時期內(nèi)持續(xù)存在[1]。

目前，農(nóng)藥殘留監(jiān)測分析報道較多[2-5]，蔬菜中農(nóng)藥殘留的分析檢測方法主要集中在氣相色譜法[6]、高效液相色譜法[7]、氣/液相色譜-質譜聯(lián)用法[8-9]等。農(nóng)藥殘留的檢測方法主要有2種，即色譜法和快速檢測法。色譜法是定量分析方法，可作為執(zhí)法依據(jù)，但是檢測儀器投資大，檢測能力要求高，而且檢測周期較長；快速檢測法是定性分析方法，主要針對有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，可對大量蔬菜樣本進行初篩，檢測樣本量大，檢測能力要求相對較低。要從根本上解決蔬菜農(nóng)藥殘留安全問題，就必須對蔬菜生產(chǎn)、流通全過程實施全程管理和監(jiān)控，而實驗室檢測方法和儀器是很難及時、快速而全面地從各環(huán)節(jié)監(jiān)控食品安全狀況，這就需要大量能夠滿足這一要求的快速、方便、準確、靈敏的食品安全分析快速檢測技術。簡單高效、低成本的農(nóng)藥殘留快速檢測方法和技術非常重要[10]，特別適合蔬菜生產(chǎn)基地、批發(fā)市場、農(nóng)貿(mào)市場和農(nóng)產(chǎn)品檢測部門的初篩。2015年新《食品安全法》頒布，賦予快速檢測方法一定程度上的法律效力。食品安全快速檢測技術是食品安全保障的重要支撐。

本研究采用農(nóng)藥殘留快速檢測法（以下簡稱快檢），調查河源市區(qū)內(nèi)夏秋季常見蔬菜農(nóng)藥殘留情況，并對快檢農(nóng)殘超標蔬菜進行色譜儀器復檢，來驗證快檢方法的適用性和準確性；總結河源市常見蔬菜的總體農(nóng)藥殘留情況，并獲得蔬菜農(nóng)藥殘留超標與蔬菜種類、種植時間及售賣場所之間的關系，以期為消費者提供參考。

1 材料和方法

1.1 樣品來源

2018年7—11月，每7 d對河源市區(qū)及周邊的農(nóng)貿(mào)市場、大型超市、農(nóng)產(chǎn)品商店及蔬菜自賣農(nóng)銷售的蔬菜進行1次農(nóng)藥殘留的隨機檢查。主要選取各月份具有代表性的蔬菜，取樣量大致相同，其中葉菜類包括生菜、上海青、菜心，莖菜類為西芹菜，瓜菜類包括苦瓜、茄子，蔥蒜類為蒜苗。共計調查取樣數(shù)為354個；每月取樣點16個，其中農(nóng)貿(mào)市場4～5個、大型超市3～4個、農(nóng)產(chǎn)品平價超市5～6個及蔬菜自賣農(nóng)2～3個。

1.2 儀器與試劑

儀器：TL-310多通道農(nóng)藥殘留快速測試儀 （廣東達元食品藥品安全技術有限公司）；JJ-2002電子天平（廣州玉治儀器有限公司）；GC2010Plus配FPD檢測器（日本島津）；LC20AT配FLD檢測器（日本島津）。

農(nóng)殘快速檢測試劑盒：內(nèi)含底物、顯色劑、膽堿酯酶、緩沖劑（廣東達元食品藥品安全技術有限公司），與農(nóng)殘速測儀配套使用。

1.3 檢測方法與判定依據(jù)

1.3.1 快速檢測技術驗證

1.3.1.1 樣品快速檢測與判定 參照GB/T 5009.199—2003《蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測》方法進行測定。

檢測操作參照儀器說明進行：選取有代表性的蔬菜樣品，擦去表面泥土，剪成1.0 cm×1.0 cm的碎片，取樣品1.00 g，放入燒杯或提取瓶中，加入 5 mL緩沖溶液，振蕩 1～2 min，倒出提取液，靜置 3～5 min，待用；然后進行對照溶液測試，先于試管中加入 2.5 mL緩沖溶液，再加入0.l mL酶液、0.1 mL顯色劑，搖勻后于37 ℃放置15 min以上（每批樣品的控制時間要求一致）。 加入0.l mL各項底物搖勻，此時檢液開始顯色反應，應立即放入儀器比色池中，記錄反應 3 min的吸光度變化值；再對待測樣液進行測試，先于試管中加入 2.5 mL樣品提取液，其他操作與對照溶液測試相同，記錄反應 3 min的吸光度變化值。

結果判定：初次檢測抑制率＜50%的樣品，為合格樣品；初次檢測抑制率≥50%的樣品，需重復檢測 5 次以上，抑制率≥50%的重現(xiàn)性≥80%的判定為不合格樣品；重現(xiàn)性＜80%的判定為合格樣品。

1.3.1.2 樣品復檢與判定 快檢超標樣品按照NY/T 761—2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》復檢。

有機磷農(nóng)藥前處理具體操作步驟：待測樣制備，準確稱取25.0 g試樣于勻漿機中，加入50.0 mL乙腈，高速勻漿2 min后用濾紙過濾，將濾液倒入裝有5～7 g氯化鈉的具塞量筒中，收集濾液40～50 mL，蓋上塞子，劇烈震蕩1 min，室溫下靜置30 min。從量筒中吸取10.00 mL乙腈溶液于刻度試管中，80 ℃氮吹至近干，加入丙酮溶解并定容至5 mL，若有需要用有機濾膜過濾，待測。

氨基甲酸酯類農(nóng)藥前處理操作步驟：從待測樣品制備→80 ℃氮吹至近干與有機磷農(nóng)藥前處理步驟相同，再加入2.0 mL甲醇＋二氯甲烷（體積比為1∶99），過固相萃取氨基柱，分2次收集甲醇＋二氯甲烷（體積比為1∶99）濾液5 mL，50 ℃氮吹至近干，用甲醇溶解定容至5 mL，若有需要用有機濾膜過濾，待測。

測定條件依照NY/T 761—2008所示有機磷氣相色譜-FPD檢測，氨基甲酸酯類液相色譜柱后衍生FLD檢測，并按照GB 2763—2016《食品安全國家標準 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》進行結果判定。

有機磷農(nóng)藥主要檢測：甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、對硫磷、甲基對硫磷、樂果、氧樂果、敵百蟲、敵敵畏、內(nèi)吸磷、馬拉硫磷、殺螟硫磷和水胺硫磷13種；氨基甲酸酯類農(nóng)藥主要檢測：涕滅威亞砜、涕滅威砜、滅多威、3-羥基克百威、涕滅威、克百威、甲萘威、異丙威8種。

1.3.1.3 樣品快檢假陽性與判定 一些蔬菜中含有對酶有抑制作用的植物次生物質，其能起到抑制快檢試劑盒酶活性的作用，使測定結果偏高，也使得快檢判定為農(nóng)藥殘留超標；快檢超標樣品通過色譜儀器復檢，判定為農(nóng)藥殘留未超標，這樣的樣品為快檢假陽性樣品。

快檢假陽性率計算公式為：X＝a/b×100%，

式中：X 快檢假陽性率；a為某一快檢農(nóng)殘超標樣品經(jīng)色譜儀器復檢判定農(nóng)殘未超標數(shù)；b為某一樣品快檢農(nóng)殘超標數(shù)。

1.3.2 蔬菜農(nóng)藥殘留情況分析

根據(jù)快檢與復檢檢測結果對河源市2018年夏秋季市售蔬菜農(nóng)藥殘留實際情況進行分析，并從不同蔬菜種類、不同月份（7—11月）、不同取樣點3個角度分析蔬菜農(nóng)藥殘留超標與蔬菜種類、種植時間及售賣場所之間的關系。

1.4 數(shù)據(jù)處理

利用Excel對采集數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

2 結果與分析

2.1 蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測技術的準確性

快檢共檢測蔬菜樣品354個，43個超標，超標率為12.15%。僅蒜苗和西芹菜出現(xiàn)假陽性，假陽性率分別為90.48%（19/21）和75.00%（3/4）。

從不同種類蔬菜農(nóng)藥殘留檢測結果來看（表1）：葉菜類162個樣品中超標8個，快檢超標率為4.94%，假陽性率為0.00%；莖菜類40個樣品中超標4個，快檢超標率為10.00%，假陽性率為75.00%；瓜菜類102個樣品中超標10個，快檢超標率為9.80%，假陽性率為0.00%；蔥蒜類50個樣品中超標21個，快檢超標率為42.00%，假陽性率為90.48%。由于莖菜類（西芹菜）葉綠素含量較高，蔥蒜類（蒜苗）含有特定次生物質，其出現(xiàn)快檢假陽性率高。

綜合以上來看，對于葉菜類和瓜菜類，本調查研究中使用的酶抑制率測定農(nóng)藥殘留的快檢方法是適用的；而對于莖菜類和蔥蒜類，由于樣品只涉及西芹菜和蒜苗，只能說明本試驗酶抑制率測定農(nóng)藥殘留方法不適合西芹菜和蒜苗的測定或方法有待改進。

2.2 河源市夏秋季蔬菜農(nóng)藥殘留實際情況分析

在354個蔬菜樣品中，蔬菜農(nóng)藥殘留總檢出率為93.50%，實際超標率為5.93%。

2.2.1 不同蔬菜種類實際農(nóng)藥殘留情況

由表2可知，不同種類蔬菜的農(nóng)藥殘留量不同，檢出率高低順序為莖菜類（97.50%）＞瓜菜類（96.08%）＞蔥蒜類（96.00%）＞葉菜類（90.12%）；超標率高低順序為瓜菜類（9.80%）＞葉菜類（4.94%）＞蔥蒜類（4.00%）＞莖菜類（2.50%）。

瓜菜類蔬菜農(nóng)藥殘留檢出率高于其他種類的主要原因可能與季節(jié)有關，調查期間為瓜類蔬菜盛產(chǎn)期，農(nóng)藥直接噴灑在瓜果表面，容易吸收，且此時期瓜果生長較快，用藥與上市可能未達到安全間隔期，導致瓜菜類蔬菜附著的農(nóng)藥相對較多。

表1 不同蔬菜種類農(nóng)藥殘留快檢與復檢檢測結果

表2 不同蔬菜種類實際農(nóng)藥殘留檢測結果

2.2.2 各月份蔬菜實際農(nóng)藥殘留情況

由表3可知，5個月的蔬菜農(nóng)藥殘留檢出率分別為77.27%、97.37%、93.96%、97.30%和96.34%，超標率分別為0.00%、0.00%、3.45%、2.70%和18.29%，實際合格率分別為 100.00%、100.00%、96.55%、97.30%、81.71%，合格率以11月份最低。綜合分析，可能是種植時期菜農(nóng)施藥次數(shù)增多，用藥量加大，導致蔬菜中農(nóng)藥殘留檢出率高，超標嚴重[11]。

2.2.3 不同取樣點蔬菜實際農(nóng)藥殘留情況

表4為不同取樣點的蔬菜農(nóng)藥殘留檢出情況，檢測結果表明蔬菜的來源不同，農(nóng)藥殘留超標率有很大不同，檢出率大小順序為大型超市（100.00%）＞農(nóng)貿(mào)市場（93.87%）＞農(nóng)產(chǎn)品商店（91.00%）＞蔬菜自賣農(nóng)（90.91%）；超標率大小排序為農(nóng)產(chǎn)品商店（12.00%）＞ 蔬菜自賣農(nóng)（9.09%）＞農(nóng)貿(mào)市場（3.57%）＞大型超市（0.00%）。

可見，大型超市的蔬菜農(nóng)藥殘留超標率最低，主要是因為大型超市配置農(nóng)產(chǎn)品快檢室，蔬菜的來貨渠道監(jiān)管較嚴；農(nóng)貿(mào)市場稍高于大型超市，在于其快檢制度還不夠完善；大部分農(nóng)產(chǎn)品商店與蔬菜自賣農(nóng)相似，農(nóng)藥殘留超標率較高，在于其均自產(chǎn)自銷，自我約束力較低。

3 結論與討論

此次調查分析，應用快檢法共檢測蔬菜樣品354個，43個超標。色譜儀器復檢快檢超標樣，僅蒜苗和西芹菜出現(xiàn)假陽性，假陽性率分別為90.48%（19/21）和75.00%（3/4），其余蔬菜農(nóng)藥殘留快檢結果準確。農(nóng)藥殘留快檢總檢出率93.50%（331/354），快檢總超標率12.15%（43/354），實際總超標率5.93%（21/354）。市售蔬菜中存在農(nóng)藥檢出及超標現(xiàn)象：從不同種類來看，莖菜類農(nóng)殘檢出率最高（97.50%），瓜菜類農(nóng)殘超標率最高，為9.80%；7—11月中，8月蔬菜農(nóng)殘檢出率最高（97.37%），11月蔬菜農(nóng)殘超標率最高，為18.29%；從不同取樣點來看，大型超市檢出率最高（100.00%），農(nóng)產(chǎn)品商店超標率最高，為12.00%。除部分蔬菜種類（如蒜苗、西芹菜等），快檢結果快速且準確。

表3 不同月份實際農(nóng)藥殘留檢測結果

表4 不同取樣點蔬菜實際農(nóng)藥殘留檢測結果

膽堿酯酶的特異性等因素使得農(nóng)藥殘留酶抑制率快速檢測法存在一些不足之處，且使該方法的應用在一定程度上受到限制[12]；但是該方法可以解決因實驗室的設備有限、樣品檢測數(shù)量有限、樣品檢測費用較高而無法解決的問題，在規(guī)避風險前提下特別適合蔬菜生產(chǎn)基地、批發(fā)市場、農(nóng)貿(mào)市場和農(nóng)產(chǎn)品檢測部門的初篩。

市售蔬菜中存在農(nóng)藥超標現(xiàn)象。為解決蔬菜中農(nóng)藥殘留問題，政府相關主管部門需建立并完善隨機抽檢機制[13]，從田間到市場再到餐桌全過程監(jiān)管，促使蔬菜生產(chǎn)經(jīng)營者科學合理使用農(nóng)藥，確保蔬菜食用安全。