小劑量米非司酮對子宮腺肌病病灶雌、孕激素受體及微血管變化的影響*

周 毅 韓澤民 章漢旺

近年來，子宮腺肌病（adenomyosis）的發(fā)病率有增高的趨勢，因其病因及相關(guān)影響因素尚不明確，故探討其發(fā)病機(jī)制已成為人們廣泛關(guān)注的熱點(diǎn)。本研究旨在通過觀察小劑量米非司酮（mifepristone）治療子宮腺肌病后對異位病灶中雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progestin receptor，PR）的表達(dá)、微血管計(jì)數(shù)（micro vessel count，MVC）和面積變化的影響，并與未經(jīng)米非司酮治療的子宮腺肌病的患者進(jìn)行對比，以進(jìn)一步揭示米非司酮治療子宮腺肌病的作用機(jī)制。

1 對象與方法

1.1 研究對象 收集2006年1月—2009年6月我院及同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院婦產(chǎn)科收治的子宮腺肌病患者，根據(jù)病例資料，篩選出有典型子宮腺肌病臨床癥狀、術(shù)前有B超診斷、術(shù)后病理檢查確診的患者共58例（其中子宮腺肌病合并子宮肌瘤者3例）。術(shù)前經(jīng)小劑量米非司酮（上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)）治療者28例為A組，12．5 mg/d，口服，連服3個(gè)月，停藥后立即手術(shù)。術(shù)前未經(jīng)任何卵巢激素、糖皮質(zhì)激素及其拮抗劑治療者30例為B組。A組年齡為43～53歲，平均（45．3±4．1）歲；B 組年齡為 44～53 歲，平均（45．6±4．3）歲，2 組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝ 0．056 3，P ＞ 0．05）。

1.2 方法 免疫組織化學(xué)法檢測子宮腺肌病標(biāo)本中ER、PR蛋白和血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物Ⅷ因子抗原的表達(dá)情況。組織標(biāo)本經(jīng)4%多聚甲醛固定處理后，脫水、透明、浸蠟，石蠟包埋,5 μm連續(xù)切片。用免疫組織化學(xué)鏈霉素抗生素（SP）法檢測，其鼠抗人ER、PR單克隆抗體及鼠抗人Ⅷ因子相關(guān)抗原抗體（Santa Cruz），稀釋度為1∶50。兔抗鼠SP試劑盒（北京中杉生物試劑公司）。空白對照組用0.01 mol/L PBS代替一抗。用HPIAS-1000高清晰度彩色病例圖文分析系統(tǒng)對ER、PR表達(dá)結(jié)果進(jìn)行分析。用HPIAS-1000高清晰度彩色病例圖文分析系統(tǒng)對Ⅷ因子抗原標(biāo)記檢測2組腺肌病病灶中微血管的數(shù)目和面積（每個(gè)標(biāo)本5個(gè)200倍視野之和），記錄結(jié)果。

1.3 結(jié)果判定 以細(xì)胞核棕黃色染色為ER、PR陽性標(biāo)準(zhǔn)，沒有染色為-。對Ⅷ因子相關(guān)抗原標(biāo)記的微血管進(jìn)行數(shù)目和面積（5個(gè)高倍視野之和）的統(tǒng)計(jì)。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較行t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組ER、PR陽性率比較 A組28例子宮腺肌病異位病灶標(biāo)本中，ER陽性表達(dá)21例，陽性率75．0%；B組30例中ER陽性表達(dá)26例，陽性率86．7%；A組ER表達(dá)弱于B組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝ 1.28，P>0．05）。A 組 PR 陽性表達(dá) 22例，陽性率78．6%；B組PR陽性表達(dá)29例，陽性率96．7%，A組PR表達(dá)弱于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝ 4.47，P ＜ 0．05），見表 1。

表1 2組子宮腺肌病病灶中ER、PR表達(dá)結(jié)果 （例）

2.2 2組微血管計(jì)數(shù)及微血管面積的比較 A組微血管計(jì)數(shù)和微血管面積均小于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），見表2。

3 討論

子宮腺肌病是激素依賴性疾病，它的發(fā)生與卵巢激素作用密切相關(guān)[1]。雌、孕激素是通過其受體（ER、PR）發(fā)揮作用的。ER、PR由雌激素誘導(dǎo)產(chǎn)生，且雌激素有上調(diào)ER、PR含量的作用[2]。高水平的雌、孕激素通過受體作用可刺激局部內(nèi)膜的增殖，促進(jìn)病灶生長。雌激素為子宮內(nèi)膜致分裂源，有利于破碎內(nèi)膜的種植與生長，且這種異位灶不同旁分泌間存在著相互作用。外周高水平的雌激素作用下及局部自分泌的雌激素的內(nèi)環(huán)境中，雌激素通過與其相應(yīng)受體結(jié)合，促使異位病灶組織在肌層內(nèi)種植、生長、發(fā)展[3]。異位病灶的發(fā)生、發(fā)展離不開血管生成，血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是與血管生成密切相關(guān)的細(xì)胞因子。局部雌激素的增加，可以促進(jìn)VEGF表達(dá)增強(qiáng)，促進(jìn)并維持異位病灶及其周圍組織的血管活性，加速異位內(nèi)膜的種植和增殖,VEGF表達(dá)增強(qiáng)增加了子宮腺肌病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)[4]。米非司酮是作用于受體水平的抗孕酮藥物[5],它通過與孕酮競爭性結(jié)合受體而起到阻斷孕酮的作用,從而抑制卵巢功能,使異位的內(nèi)膜萎縮。米非司酮同時(shí)有抑制VEGF產(chǎn)生，抑制內(nèi)膜螺旋動(dòng)脈的血管生長等作用[6]。米非同酮雖然不能與ER結(jié)合，卻能對抗雌激素誘導(dǎo)的子宮內(nèi)膜增生，稱為非競爭性抗雌激素作用。

表2 2組微血管計(jì)數(shù)及微血管面積比較±s）

表2 2組微血管計(jì)數(shù)及微血管面積比較±s）

*P ＜ 0．05，**P ＜ 0．01

組別A組B組t n 28 30微血管計(jì)數(shù)（個(gè)）75.1±7.8 90.4±8.7 2.303*微血管面積（μm2）783.3±54.2 2 334.0±129.4 4.881**

本研究結(jié)果顯示，子宮腺肌病患者應(yīng)用小劑量的米非司酮3個(gè)月后，腺肌病異位病灶中米非司酮治療者ER的陽性表達(dá)雖然低于未治療者，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與樣本含量小有關(guān)。非米司酮治療者PR的陽性表達(dá)水平低于未治療者，異位病灶組織中MVC計(jì)數(shù)降低,血管面積也明顯減少，提示米非司酮能夠干擾、控制腺肌病患者異位內(nèi)膜的生物學(xué)活性,通過抑制血管的生長降低子宮內(nèi)膜異位的種植、浸潤和生長的能力,并能抑制異位內(nèi)膜繼續(xù)增生的能力。但米非司酮對血管的抑制作用只是改變了子宮腺肌病異位病灶內(nèi)微血管的數(shù)目和形態(tài)，在用藥期間使病灶內(nèi)的血液供應(yīng)量減少，并沒有使微血管完全消失和病灶清除，停藥后，子宮腺肌癥病灶的血管系統(tǒng)恢復(fù)原來的血供狀態(tài)，使得臨床癥狀重新出現(xiàn)，這可能是子宮腺肌病停用米非司酮治療后易復(fù)發(fā)的原因。

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