健胃散對胃黏膜損傷的保護(hù)作用及對胃腸道蠕動的推進(jìn)作用△

呂曉，黃先菊，王大貴，郭燕燕，楊忍

中南民族大學(xué) 藥學(xué)院，湖北 武漢 430074

近幾十年來，飲酒人群大幅上升，急性酒精性胃黏膜損傷發(fā)病率隨之升高。研究顯示，經(jīng)口攝入高濃度乙醇可直接侵蝕胃黏膜組織，引起胃黏膜屏障受損，胃黏膜急性炎癥，出現(xiàn)胃黏膜充血、水腫、出血、糜爛及潰瘍形成等癥狀[1]。短時間內(nèi)大量飲酒可引起幽門痙攣，延長胃的排空時間，引起惡心、嘔吐等癥狀，胃鏡下常表現(xiàn)為急性出血糜爛胃炎。

乙醇不僅可直接作用于胃黏膜造成其表層損傷，而且能夠削弱胃黏膜防御因子的保護(hù)作用，是不容忽視的強(qiáng)烈的致傷性胃黏膜攻擊因子。預(yù)防和治療胃黏膜損傷的相關(guān)研究日益受到研究學(xué)者的廣泛關(guān)注[2]。根據(jù)中醫(yī)理論指導(dǎo)，健胃散由雞內(nèi)金、海螵蛸、三七、黃芪等中藥材組成處方，相輔相成，共同發(fā)揮療效，對無水乙醇作用導(dǎo)致的胃黏膜損傷有良好的預(yù)治療作用，增強(qiáng)胃黏膜的自我保護(hù)功能，并有促進(jìn)胃腸蠕動的作用，促進(jìn)消化，減少胃內(nèi)不良影響物的停留時間。

在本次實(shí)驗(yàn)中，對健胃散能保護(hù)胃黏膜以及促進(jìn)胃腸蠕動進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

1 材料和儀器

1.1 動物

SPF級KM小鼠，體質(zhì)量(22±5)g，由湖北省實(shí)驗(yàn)動物研究中心提供，許可證號：SCXK(鄂)2016-0089。

1.2 藥品和試劑

呂氏健胃散(由雞內(nèi)金、三七、黃芪、海螵蛸等10味藥物組方而成)。將藥材粉碎成散劑，4 ℃下貯存?zhèn)溆?。?shí)驗(yàn)時以蜂蜜+純化水配置成混懸液使用。無水乙醇，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品(批號：20170605)；通用型組織固定液(4%多聚甲醛、PB緩沖液)武漢博爾夫生物科技有限公司；生理鹽水，武漢濱湖雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司(批號：1705030804)。碳末混懸液。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

手術(shù)剪、鑷子、游標(biāo)卡尺、直尺、1 mL注射器。

2 方法

2.1 胃黏膜損傷實(shí)驗(yàn)

選取檢疫合格的KM小鼠30只，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后，雌雄各半隨機(jī)分為空白對照組、模型組、低劑量組、中劑量組、高劑量組，每組6只?？瞻讓φ战M和模型組連續(xù)5 d每天灌胃0.2 mL/10 g生理鹽水，健胃散成人日用劑量為6～9 g/60 kg，小鼠用量為人的10倍，最低劑量設(shè)為成人用量6 g/60 kg的10倍；中劑量設(shè)為成人用量9 g/60 kg的10倍；最高劑量設(shè)為成人用量9 g/60 kg的15倍。給藥組連續(xù)5d每天按計劃量灌胃給藥，喂養(yǎng)至第5 d時所有組進(jìn)行禁食不禁水24 h后，除空白對照組外，其余組灌胃給予無水乙醇0.1 mL/10 g，1 h后處死動物，暴露完整胃，結(jié)扎幽門，灌注適量10%甲醛溶液，固定20 min，然后沿胃大彎剪開，洗凈胃內(nèi)容物，展開胃黏膜，用游標(biāo)卡尺測量出血點(diǎn)或出血帶的長度和寬度。

2.2 胃腸道推進(jìn)實(shí)驗(yàn)

選取檢疫合格的KM小鼠24只，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，雌雄各半隨機(jī)分為空白對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組，每組6只。禁食不禁水8 h后給藥一次。空白對照組灌胃0.2 mL/10 g生理鹽水，給藥組給藥量同上。30 min后，每組灌胃給予碳末混懸液0.2 mL，20 min后，脫頸椎處死，立即剖開腹腔，分離腸系及幽門，測出幽門至碳末距的長度和小腸的總長度，求得二者的比值為推進(jìn)率。

2.3 觀察指標(biāo)及檢測方法

2.3.1 動物生長情況觀察 實(shí)驗(yàn)期間觀察動物精神、活動、毛色、進(jìn)食、飲水等生理情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時記錄體質(zhì)量的變化。

2.3.2 各實(shí)驗(yàn)組胃黏膜損傷程度 以損傷發(fā)生率、損傷積分指數(shù)和損傷抑制率表示。

(1)

(2)

(A、B分別為模型組與試驗(yàn)組的損傷積分)

(3)

2.3.3 各實(shí)驗(yàn)組胃腸推進(jìn)結(jié)果檢測 通過測量小腸的總長度和幽門至碳末距的長度，求出推進(jìn)率來觀測藥品對小鼠胃腸的推進(jìn)作用。

(4)

2.4 統(tǒng)計方法

3 結(jié)果

3.1 動物一般身體情況觀察

各組小鼠在飼養(yǎng)期間均精神狀態(tài)良好，反應(yīng)靈敏，行動自如，皮毛光澤油亮，體質(zhì)量變化不明顯。

3.2 健胃散對小鼠體質(zhì)量的影響

各組KM小鼠實(shí)驗(yàn)期間體質(zhì)量變化情況見表1。如表1所示，在本實(shí)驗(yàn)室條件下，健胃散對小鼠的生長無顯著影響。

表1 小鼠試驗(yàn)期間體質(zhì)量變化情況

3.3 健胃散對無水乙醇所致胃黏膜損傷的影響

無水乙醇損傷1 h后，解剖各小鼠胃部，肉眼可見對照組小鼠胃黏膜光滑完整，沒有出血現(xiàn)象。其余各組小鼠均出現(xiàn)了黏膜出血、組織壞死。模型組動物損傷最為嚴(yán)重，表現(xiàn)為大塊的出血面積，呈鮮紅色。高、中、低劑量給藥組則表現(xiàn)為點(diǎn)狀或條狀出血，出血面積明顯縮小(圖1)。根據(jù)評分標(biāo)準(zhǔn)計算各組動物損傷評分(表2，圖2)。空白組小鼠沒有發(fā)生損傷(損傷發(fā)生率為0)，低劑量組和中劑量組的胃黏膜損傷發(fā)生率均為100%，高劑量組損傷發(fā)生率為40%。胃保護(hù)產(chǎn)品各個劑量組損傷抑制率分別為低劑量組50%，中劑量組62.5%，高劑量組90%，結(jié)果證實(shí)胃保護(hù)產(chǎn)品對胃黏膜損傷的保護(hù)具有劑量依賴性。健胃散可劑量依賴性地減輕無水乙醇所致的胃黏膜損傷。減輕胃黏膜損傷程度，具有良好的胃黏膜保護(hù)作用。

表2 各組動物胃黏膜損傷評分情況

注：—表示不需要計算損傷抑制率。

注：***表示與模型組比較，P<0.01。圖2 各組小鼠胃黏膜損傷積分比較

3.4 健胃散對無水乙醇所致胃病理組織學(xué)影響

通過出血點(diǎn)計算損傷抑制率及病理組織學(xué)分析可發(fā)現(xiàn)胃保護(hù)產(chǎn)品各個劑量組對胃黏膜損傷的保護(hù)效果均顯著，可有效降低無水乙醇造成的急性胃黏膜損傷，并且作用具有劑量依賴性。病理學(xué)檢查結(jié)果與肉眼大體觀察結(jié)果一致(圖3)，對照組動物組織整體結(jié)構(gòu)基本正常，黏膜層無明顯壞死及變形，組織無明顯炎癥。模型組動物胃黏膜損傷最為嚴(yán)重。組織整體結(jié)構(gòu)重度異常，黏膜層廣泛糜爛壞死，并可見大量紅細(xì)胞，如紅色箭頭所示；黏膜下層重度水腫，如黑色箭頭所示。健胃產(chǎn)品各個給藥組對胃黏膜損傷均有改善作用，且呈現(xiàn)劑量依賴性(圖3)。低劑量組動物胃組織整體結(jié)構(gòu)中度異常，黏膜層可見上皮細(xì)胞點(diǎn)狀壞死，并可見少量出血，如黑色箭頭所示；黏膜層可見少量炎癥細(xì)胞浸潤，炎癥細(xì)胞以中性粒細(xì)胞為主，如黃色箭頭所示；黏膜下層可見水腫，如紅色箭頭所示。黏膜層部分動脈可見充血，如綠色箭頭所示。中劑量組組織整體結(jié)構(gòu)輕度異常，黏膜層結(jié)構(gòu)基本正常，黏膜上皮無明顯壞死變性；黏膜下層輕度水腫，部分腸壁脫落，如黑色箭頭所示。黏膜層部分動脈可見充血，如紅色箭頭所示。高劑量組組織整體結(jié)構(gòu)輕度異常，黏膜層無明顯壞死及變形；黏膜下層可見輕度水腫，如黑色箭頭所示；組織無明顯炎癥細(xì)胞浸潤。

注：A.對照組；B.模型組；C.低劑量組；D.中劑量組；E.高劑量組；圖中箭頭指向出血位置。圖1 各組動物胃解剖圖

注：A.對照組；B.模型組；C.低劑量組(0.6 g·kg-1×10)；D.中劑量組(0.9 g·kg-1×10)； E.高劑量(0.9 g·kg-1×15)組。圖3 各組動物胃黏膜病理圖

3.5 健胃散對胃腸道推進(jìn)的作用

一種物質(zhì)如果能加速腸道的蠕動，則性能加速小腸的推進(jìn)運(yùn)動，從而促進(jìn)倡導(dǎo)腸道內(nèi)容廢物的排空速度，減少代謝廢物在腸內(nèi)的停留時間，即減少廢物，有害物對腸道的惡性刺激時間，從而對腸道起到保健作用[7-9]。在本實(shí)驗(yàn)室條件下，從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可看出，空白組小鼠推進(jìn)率為37.96%，健胃散各個劑量組推進(jìn)率分別為低劑量組63.9%，中劑量組58.2%，高劑量組57.5%，結(jié)果證實(shí)健胃散對胃腸有推進(jìn)作用并且作用不具有劑量依賴性。但三個給藥組的推進(jìn)率都大于生理鹽水組，且各個給藥組與對照組相比存在顯著差異(P<0.01)說明此藥有推進(jìn)胃腸蠕動的作用，結(jié)果證實(shí)胃保護(hù)產(chǎn)品對胃腸道的推進(jìn)作用但不具有劑量依賴性。結(jié)果見表3及圖4。

表3 各組動物胃腸推進(jìn)情況總析

注：**表示與對照組比較，P<0.01。圖4 各組胃腸推進(jìn)率比較

4 討論

健胃散中的主要成分黃芪含有黃芪總苷，研究發(fā)現(xiàn)黃芪總苷具有保護(hù)胃黏膜屏障，維持組織結(jié)構(gòu)完整性，調(diào)節(jié)整體胃酸分泌重要作用[3]；主要成分雞內(nèi)金可激活保護(hù)胃黏膜相關(guān)因子，改善胃黏膜損傷引起的不適，調(diào)整胃腸功能[4-5]；主要成分海螵蛸性咸、澀、微溫，具有收斂止血、制酸止痛等功效[6]；主要成分三七中含有人參皂苷，可抗炎止血[7]，對胃黏膜損傷導(dǎo)致的出血有止血的功效；配方中大黃含有蒽醌類生物活性成分，具有瀉下作用，少量的大黃能促進(jìn)胃排空。健胃散中的各成分相輔相成，共同發(fā)揮保護(hù)胃黏膜的作用，我們對其中的保護(hù)機(jī)制將進(jìn)一步探究。