乳腺癌患者超聲檢查中PSV、RI值與術(shù)后組織中MMP-11、VEGF表達(dá)的相關(guān)性探討

譚興利,陸偉輝,湯學(xué)文,繆賢盛,徐 蓓,彭世義△

1.復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院青浦分院超聲科 (上海201799);2.復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院青浦分院普外科(上海201799)

乳腺癌是女性最常見(jiàn)的腫瘤之一，主要發(fā)生于中老年女性[1]。超聲是常規(guī)篩查的重要方法，近年認(rèn)為收縮期峰值血流速度(PSV)和阻力指數(shù)(RI)對(duì)判斷病變性質(zhì)有重要價(jià)值[2]。乳腺腫瘤在生長(zhǎng)時(shí)間質(zhì)的血管生成作用明顯，可以用CD31和CD34等血管內(nèi)皮標(biāo)記物輔助觀察，這種新形成的血管常伴隨著血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子等血管生成因子的大量分泌[3]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)具有經(jīng)典的血管生成的作用，可以通過(guò)其受體VEGFR2調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮的增殖[4]。MMPs家族的多個(gè)成員在乳腺癌的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移中起重要的調(diào)節(jié)作用，也能通過(guò)調(diào)節(jié)VEGF的表達(dá)，間接促進(jìn)血管的生成[5]，基質(zhì)金屬蛋白酶-11(MMP-11)作為家族的重要成員，具有對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的調(diào)節(jié)作用和間接的促血管生成的作用。本研究觀察乳腺癌患者超聲中PSV和RI值的特征，并探討兩者與術(shù)后組織中MMP-11和VEGF的關(guān)聯(lián)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

資料和方法

1 一般資料 收集2016年8月至2018年3月在我院診斷為乳腺癌的患者作為研究組，共71例，患者均為女性，年齡41～87歲，中位年齡59歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)術(shù)后病理醫(yī)師確診并分級(jí)，符合WHO中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②均為首次乳腺癌發(fā)??；③家屬或患者簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前行放、化療的患者；②有家族遺傳病史者；③伴有其它器官惡性腫瘤者。收集19例乳腺良性病變患者作為對(duì)照組，均為女性，年齡41～78歲，中位年齡53歲，均經(jīng)術(shù)后病理確診，其中乳腺腺病10例，乳腺纖維腺瘤9例。

2 超聲檢測(cè)PSV和RI值 患者檢查時(shí)取仰臥位，應(yīng)用GE logiq E9百勝M(fèi)yLab 30彩色超聲診斷儀，選擇高頻淺表探頭，頻率是5～12 MHz，兩上肢肘關(guān)節(jié)呈90度，顯露乳房，以乳頭為中心由內(nèi)向外探查，發(fā)現(xiàn)腫塊標(biāo)記，觀察部位、大小、形態(tài)、邊緣及血供情況，同時(shí)測(cè)量腫塊的血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)，重點(diǎn)關(guān)注PSV和RI值。

3 MMP-11和VEGF表達(dá)檢測(cè) 術(shù)后組織常規(guī)行中性福爾馬林固定、脫水、石蠟包埋及切片。MMP-11和VEGF的檢測(cè)均應(yīng)用免疫組化方法。MMP-11和VEGF的試劑均為濃縮液，先按不同比例稀釋后進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以最佳顯色濃度用于正式實(shí)驗(yàn)(MMP-11為1∶250，VEGF為1∶500)。標(biāo)本均集中檢測(cè)，由同一病理科技師進(jìn)行操作，嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)中的操作步驟完成實(shí)驗(yàn)，做好質(zhì)控工作。

4 MMP-11和VEGF結(jié)果判定 MMP-11和VEGF的陽(yáng)性部位是細(xì)胞漿，以呈現(xiàn)淺黃色、黃色及棕黃色為陽(yáng)性。顯色強(qiáng)度：無(wú)著色為0分，淺黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。陽(yáng)性百分比評(píng)分：選擇上皮細(xì)胞分布且顯色較為集中的熱點(diǎn)區(qū)，并在400倍視野下進(jìn)行百分率評(píng)估，以小于5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，大于51%為3分。以顯色強(qiáng)度和陽(yáng)性百分比兩者評(píng)分相加為最后得分。以<2分為陰性，以≥2分為陽(yáng)性。計(jì)算陽(yáng)性率。

結(jié) 果

1 兩組中PSV和RI值比較 兩組中PSV和RI值比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)表1。

表1 兩組中PSV和RI值比較

2 兩組中MMP-11和VEGF陽(yáng)性率比較 兩組中MMP-11和VEGF的陽(yáng)性率差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),見(jiàn)表2。

表2 兩組中MMP-11和VEGF陽(yáng)性率比較[例(%)]

3 PSV和RI值在觀察組不同臨床特征分組中的比較 觀察組中PSV、RI的表達(dá)與腫瘤的最大徑和組織學(xué)評(píng)分相關(guān),見(jiàn)表3。

4 MMP-11和VEGF在觀察組不同臨床病理特征中的比較 觀察組中MMP-11和VEGF的表達(dá)與腫瘤的最大徑和組織學(xué)分級(jí)相關(guān)，MMP-11與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，VEGF與腫瘤的增殖指數(shù)相關(guān)，見(jiàn)表4。

5 觀察組中PSV、RI值與MMP-11和VEGF表達(dá)的相關(guān)性分析 線性相關(guān)分析顯示RI 與VEGF(r=0.45，P=0.0412)、RI與MMP-11(r=0.41，P=0.0458)、MMP-11與VEGF(r=0.53，P=0.0129)均具有正相關(guān)性。其它指標(biāo)間未見(jiàn)明顯相關(guān)性。

表3 PSV和RI值在觀察組不同臨床特征分組中的比較

表4 MMP-11和VEGF在觀察組不同臨床病理特征中的比較[例(%)]

討 論

乳腺癌二級(jí)預(yù)防是惡性腫瘤中最能有效提高生存率和降低死亡率的重要措施，臨床上早期乳腺癌的發(fā)現(xiàn)率僅25%，超聲檢查是早期篩查的重要方法[6]。乳腺癌發(fā)生初期主要局限在輸乳管或終末小葉單位內(nèi)的上皮，表達(dá)為上皮的異型增生和癌變，如果增生的上皮尚未突破基底膜或肌上皮細(xì)胞構(gòu)成的屏障，則為原位癌，如果突破基膜或肌上皮細(xì)胞構(gòu)成的屏障則形成浸潤(rùn)性癌。組織學(xué)表現(xiàn)為病灶不規(guī)整，邊緣不清晰。超聲檢查可見(jiàn)邊界不規(guī)則、有鋸齒狀改變、回聲不均勻、微粒樣鈣化等[7]，尤其是病灶后方回聲衰減、微鈣化是臨床診斷的重要依據(jù)。研究認(rèn)為腫瘤細(xì)胞數(shù)量增加時(shí)，血管內(nèi)皮細(xì)胞間的連接也明顯增加，血流供應(yīng)豐富。CDFI/PDI能觀察到直徑大于0.1 cm的血管，并能初步判斷血管分枝和級(jí)聯(lián)的方式[8]。PSV和RI是超聲中觀察血管的重要指標(biāo)。惡性腫瘤患者可以觀察到血流信號(hào)，并發(fā)現(xiàn)RI值超過(guò)0.65的病變，呈現(xiàn)高速高阻型頻譜的現(xiàn)象。近年學(xué)者在組織學(xué)中可以觀察到惡性腫瘤間質(zhì)的血管生成，并發(fā)現(xiàn)了相關(guān)的蛋白。VEGF是血管生成的促進(jìn)因子，在惡性腫瘤進(jìn)展時(shí)，腫瘤細(xì)胞分泌增加，并且對(duì)腫瘤間質(zhì)的內(nèi)皮細(xì)胞增殖有明顯的促進(jìn)作用，新生血管在機(jī)械性的沖擊下形成管腔，使腫瘤的血液供應(yīng)增加，為細(xì)胞生長(zhǎng)提供必要的養(yǎng)料[9-10]。MMP-11是MMPs家族中間質(zhì)溶解素成員，其對(duì)基質(zhì)蛋白的降解在不同腫瘤中的程度不一樣，但是其對(duì)絲氨酸蛋白酶抑制因子有明顯的作用，并且可以被弗林蛋白激活，與MMPs家族中其它成員的對(duì)機(jī)體的作用相似[11]。史曉宇等[12]認(rèn)為MMP-11在結(jié)腸腺癌中表達(dá)的陽(yáng)性率明顯升高，其與TNM分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，且二者具有正相關(guān)性，認(rèn)為二者的高表達(dá)與病變的形成密切相關(guān)，并且可以作為臨床早期診斷、監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的指標(biāo)。

本研究結(jié)果顯示兩組術(shù)前超聲中PSV和RI值的表達(dá)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示兩者的升高可能提示有乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)。結(jié)果顯示兩組術(shù)后組織中MMP-11和VEGF的表達(dá)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示者具有癌基因樣的作用，可能是腫瘤形成的促進(jìn)蛋白。觀察組中PSV、RI值、MMP-11和VEGF的表達(dá)均與腫瘤的最大徑和組織學(xué)分級(jí)相關(guān)，提示PSV、RI值提示腫瘤生長(zhǎng)和進(jìn)展，MMP-11和VEGF是促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)和進(jìn)展的蛋白，即MMP-11和VEGF高表達(dá)引起腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和蔓延。線性相關(guān)分析顯示RI 與VEGF、RI與MMP-11均具有正相關(guān)性，提示RI值與術(shù)后組織中MMP-11和VEGF的表達(dá)有一致性。近年認(rèn)為VEGF與預(yù)后有關(guān)，因此術(shù)前RI值升高不僅在一定程度上提示腫瘤性質(zhì)，其也可能反應(yīng)出患者預(yù)后的特征。實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)RI值的不同對(duì)術(shù)后組織學(xué)分級(jí)有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值。VEGF與腫瘤細(xì)胞增殖有明顯關(guān)聯(lián)，即VEGF高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增生和繁殖，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)加速，腫瘤體積增大，細(xì)胞異型性明顯，預(yù)后較差。而MMP-11可能具有多種功能，其在乳腺癌中可以在一定程度上降解細(xì)胞外基質(zhì)，還可能對(duì)血管生成有一定的調(diào)控作用，這也是MMPs家族成員中多種蛋白的作用之一[13]。MMP-11對(duì)血管的調(diào)控可能是間接的，與機(jī)體中其它蛋白協(xié)同作用后，進(jìn)而促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖[14]。本實(shí)驗(yàn)觀察到MMP-11和VEGF的相關(guān)性也證實(shí)了MMP-11對(duì)血管生成的間接作用。VEGF對(duì)腫瘤血管生成的調(diào)節(jié)是直接的，通過(guò)分泌作用，直接促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)。

總之，超聲檢測(cè)PSV和RI值在術(shù)前判斷乳腺癌有一定幫助，組織中MMP-11和VEGF的表達(dá)與病變的進(jìn)展有關(guān)。RI值與MMP-11和VEGF的表達(dá)有一定相關(guān)性。RI值升高的意義可能更明顯。這種無(wú)創(chuàng)性檢查在術(shù)前評(píng)估有明顯意義，適于在臨床中應(yīng)用。