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    Fascin-1在肝內(nèi)膽管細胞癌中的表達及意義

    2019-05-09 09:22:12蘇寶威白明輝劉海潮
    廣東醫(yī)學(xué) 2019年8期
    關(guān)鍵詞:膽管陽性率陽性

    蘇寶威, 白明輝, 劉海潮

    鄭州大學(xué)附屬洛陽中心醫(yī)院肝膽外科(河南洛陽 471009)

    肝內(nèi)膽管細胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma, ICC)一般指發(fā)生在肝臟二級膽管及以上的膽道上皮惡性腫瘤,屬原發(fā)性肝癌的一種,發(fā)病率約占原發(fā)性肝癌的10%~15%[1],僅次于肝細胞癌,是第二大原發(fā)性肝惡性腫瘤[2],其組織病理分型以腺癌常見,腫瘤大體觀可分為腫塊型、管內(nèi)生長型及管周浸潤型,又以腫塊型常見[3],ICC發(fā)病率地域間存在明顯差異,但在全球范圍內(nèi)其發(fā)病率及病死率均呈上升趨勢[4]。目前手術(shù)切除仍是ICC的首選治療方案[5],但ICC發(fā)病隱匿,早期無明顯癥狀[6],缺乏特異性的早期診斷腫瘤標(biāo)志物,且其惡性程度高,確診時大多都有肝內(nèi)或淋巴轉(zhuǎn)移,即使是手術(shù)切除,術(shù)后5年生存率僅為20%~40%,且ICC對傳統(tǒng)的化療、放療都不敏感,療效較差[7],因此能否早期診斷ICC就尤為重要,近年來,人們通過大量研究ICC的生物學(xué)標(biāo)志物,期望能為早期診斷ICC并改善其預(yù)后提供幫助[8-9]。Fascin-1已被證實在多種上皮來源惡性腫瘤如食管癌、膀胱癌、宮頸癌、結(jié)直腸癌等中發(fā)揮作用[10],但目前鮮見有Fascin-1與ICC的研究。本研究試圖分析ICC中Fascin-1的表達情況,并對患者進行隨訪來了解其與ICC發(fā)生發(fā)展的關(guān)系及對患者預(yù)后的影響。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 收集2015年1月至2018年1月的ICC標(biāo)本(58例)和正常肝內(nèi)膽管組織標(biāo)本(43例),標(biāo)本蠟塊由鄭州大學(xué)附屬洛陽市中心醫(yī)院病理科提供,58例肝內(nèi)膽管細胞癌中男28例,女30例;中位年齡56.9歲(30~85歲)。病理分級:高分化癌23例,中分化癌21例,低分化癌14例,TNM分期:Ⅰ~Ⅱ期36例,Ⅲ~Ⅳ期22例,無門脈受侵46例,門脈受侵12例,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例,有臟器轉(zhuǎn)移14例,無臟器轉(zhuǎn)移44例,乙型肝炎(乙肝)病毒攜帶34例,無乙肝組24例。所有標(biāo)本納入標(biāo)準(zhǔn)為:ICC患者均無腫瘤病史,術(shù)前未接受化療、放療及生物治療等,其病歷資料完整可查。選取的同期正常膽管上皮組織(膽管結(jié)石和膽道損傷時手術(shù)切除的膽管組織)43例作為對照組,所有患者均簽署知情同意書。試劑選擇:美國Cell Signaling Technology公司生產(chǎn):鼠抗人 Fascin-1單克隆抗體,福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司:免疫組化試劑盒、PBS緩沖液,抗原修復(fù)液和DAB顯色試劑。鄭州大學(xué)附屬洛陽中心醫(yī)院中心實驗室及病理科提供其他試劑及設(shè)備。

    1.2 免疫組化SP法 蠟塊切片后常規(guī)脫蠟水化,修復(fù)抗原,3% H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶后加入山羊血清封閉抗原,加一抗過夜,復(fù)溫后加羊抗兔IgG,DAB顯色,蘇木素復(fù)染,脫水后封片,整個過程嚴格按免疫組化試劑盒說明進行,用血管內(nèi)皮細胞中Fascin-1的表達為陽性對照,陰性對照則用PBS溶液代替一抗。

    1.3 結(jié)果判定 由經(jīng)驗豐富病理科醫(yī)師采用雙人雙盲閱片,F(xiàn)ascin-1陽性反應(yīng)物質(zhì)ICC中呈棕褐色或(和)棕黃色,主要定位為細胞質(zhì)中,參照黃英等[11]陽性細胞計數(shù)與染色強度相結(jié)合的二級計分法對 Fascin-1蛋白陽性表達結(jié)果進行判定。著色強度據(jù)反應(yīng)物顏色分為四級,依次計0~3分,陽性細胞所占百分比分為五級,依次計0~4分,兩者相乘為最終結(jié)果,小于4分為陰性, 4分為陽性。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件,采用2檢驗分析Fascin-1在ICC和正常膽管上皮組織中的表達及其與ICC臨床病理指標(biāo)的關(guān)系。采用Kaplan-Meier法對生存曲線進行描述,并對Fascin-1蛋白表達陽性及陰性患者的生存差異進行分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 Fascin-1在ICC及正常肝內(nèi)膽管組織中的表達 Fascin-1主要表達于細胞質(zhì)中,陽性顆粒棕黃色至棕褐色分布,見圖1。58例ICC組織中Fascin-1蛋白表達陽性29例,陽性率高達55.2%,而在正常肝內(nèi)膽管組織中不表達,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(2=34.727,P<0.05),見表1。

    A:Fascin-1在ICC中的表達;B:Fascin-1在正常肝內(nèi)膽管組織中的表達

    圖1 免疫組化檢測Fascin-1蛋白的表達(SP,×400)

    2.2 Fascin-1表達與ICC臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 不同年齡、性別、是否合并乙肝分組ICC患者ICC組織中Fascin-1陽性表達率比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。ICC TNM分期:Fascin-1蛋白陽性率Ⅰ~Ⅱ期38.9%,Ⅲ~Ⅳ期81.8%;組織分化:Fascin-1蛋白陽性率高分化組26.1%,中低分化組74.3%;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移:Fascin-1蛋白陽性率無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組35.9%,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組94.7%;門靜脈受侵:Fascin-1蛋白陽性率無門脈侵犯組35.9%,門脈侵犯組83.3%,臟器轉(zhuǎn)移組:Fascin-1蛋白陽性率無臟器轉(zhuǎn)移組45.5%,臟器轉(zhuǎn)移組85.7%,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

    表2 Fascin-1表達與ICC臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 例

    2.3 生存分析 采用Kaplan-Meier方法統(tǒng)計分析示:58例ICC患者的中位生存時間為22個月,F(xiàn)ascin-1蛋白陰性組的ICC患者中位生存時間為30個月,F(xiàn)ascin-1蛋白陽性組的ICC患者中位生存時間為12個月(圖2)。Fascin-1蛋白陽性表達的ICC患者的預(yù)后明顯差于陰性表達患者(P=0.007)。

    3 討論

    Fascin蛋白最早發(fā)現(xiàn)于海膽母細胞胞質(zhì)中,目前認為其是一種細胞骨架蛋白,分子量55×103,包含493個氨基酸殘基,其編碼基因全長13 852 bp,位于7p22,有5個外顯子,其成熟mRNA長度為2 812 bp[10]?,F(xiàn)研究表明,F(xiàn)ascin蛋白能與F-actin蛋白結(jié)合,故又叫肌動蛋白結(jié)合蛋白,人們發(fā)現(xiàn)其與 傳統(tǒng)肌動蛋白結(jié)合蛋白同源性較差,所以將其歸納為一類新型的肌動蛋白結(jié)合蛋白家族(Fascin蛋白家族)?,F(xiàn)人類已知的Fascin蛋白有3種:Fascin-1存在于大多數(shù)脊椎動物細胞中,F(xiàn)ascin-2僅在視網(wǎng)膜中表達,F(xiàn)ascin-3則僅在睪丸組織中表達,目前對Fascin-1蛋白研究較多。腫瘤的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)是現(xiàn)在惡性腫瘤治療的難題,而腫瘤的轉(zhuǎn)移首先要突破基底層,研究表明[12]Fascin-1與F-actin蛋白結(jié)合可改變細胞膜的結(jié)構(gòu),從而增加細胞遷移、轉(zhuǎn)移的能力。

    圖2 Fascin-1蛋白表達與生存時間相關(guān)性分析

    本研究試圖通過檢測Fascin-1在ICC組織中的表達,探討其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn)58例ICC組織中Fascin-1呈陽性表達的有32例,陽性率高達55.2%,而在正常肝內(nèi)膽管組織中Fascin-1不表達,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,提示Fascin-1與ICC的發(fā)生過程有一定關(guān)聯(lián)。Fascin-1在中低分化癌組織中的表達(74.3%)顯著高于其在高分化癌組織中的表達(26.1%),差異有統(tǒng)計學(xué)意義,因此筆者推測Fascin-1與ICC的惡性生物學(xué)行為有關(guān)。此外Fascin-1蛋白在TNM分期Ⅲ~Ⅳ期組高于Ⅰ~Ⅱ期組,且在門脈受侵組、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和合并臟器轉(zhuǎn)移組的表達均顯著高于其對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),提示其可能與ICC的侵襲轉(zhuǎn)移能力有關(guān)。而Fascin-1在ICC組織中的表達與患者的性別、年齡及是否合并乙肝等無統(tǒng)計學(xué)意義,這與Fascin-1在肺癌和結(jié)直腸癌[13-14]中的表達一致。據(jù)生存分析顯示,F(xiàn)ascin-1蛋白表達陽性組患者預(yù)后明顯比陰性組差,這與既往文獻[15-17]報道大致符合。劉迪生等[18]研究Fascin-1蛋白對腫瘤細胞的影響是通過細胞內(nèi)外信號途徑共同作用,當(dāng)細胞外基質(zhì)中纖維連接蛋白集結(jié)并激活GTP酶及PKCα,進一步使Fascin蛋白ser-39位點磷酸化,并促使活化的PKCα與該位點結(jié)合,進而導(dǎo)致含F(xiàn)ascin蛋白的細胞表面與侵襲移動相關(guān)的絲狀偽足、微棘和微突顯著變短或減少,致使細胞移動侵襲能力明顯增強。李恩民等[10]研究則認為,轉(zhuǎn)錄因子Sp1激活食管癌細胞Fascin基因啟動子核心元件,使EGF/EGFR/ERK1/2信號通路活化,磷酸化的Sp1進一步激活Fascin基因轉(zhuǎn)錄,導(dǎo)致Fascin蛋白表達異常,該研究還指出,F(xiàn)ascin蛋白或其mRNA的過表達發(fā)生在食管癌早期,并伴隨腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程,可作為臨床診斷的早期預(yù)警標(biāo)志。Mao等[19]研究指出,Fascin可能通過調(diào)節(jié)Wnt /β-Catenin信號誘導(dǎo)膽管癌細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),該研究顯示沉默F(xiàn)ascin后β-catenin發(fā)生磷酸化并在細胞核中的濃度降低,敲減Fascin后導(dǎo)致QBC939細胞膜中β-catenin 和E-cadherin表達上調(diào),其具體機制還有待進一步研究。當(dāng)然,影響ICC的發(fā)生、發(fā)展、浸潤及轉(zhuǎn)移的因素非常復(fù)雜,F(xiàn)ascin-1只是其中之一。

    綜上所述,F(xiàn)ascin-1與ICC的發(fā)生、發(fā)展及侵襲等密切相關(guān),但Fascin-1對腫瘤調(diào)控的機制非常復(fù)雜,具體還需進一步研究。近年來,在腫瘤生物學(xué)領(lǐng)域,F(xiàn)ascin蛋白已被人熟知,尤其是在細胞骨架腫瘤生物學(xué)這一新的分支領(lǐng)域中,F(xiàn)ascin蛋白更是受人青睞,隨著對其進一步的研究,相信其一定會在腫瘤領(lǐng)域中發(fā)揮重要的作用。

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