草木樨流浸膏片聯(lián)合督灸對(duì)HLA-B27陽性強(qiáng)直性脊柱炎患者Th1、Th2和Th17的影響

盧秀花

臨沂市中心醫(yī)院，山東 臨沂 276400

強(qiáng)直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis，AS)是一種主要侵犯骶髂關(guān)節(jié)和脊柱致中軸關(guān)節(jié)骨融合的自身免疫性疾病，AS患者外周血Th1、Th17細(xì)胞數(shù)明顯增高，Th2細(xì)胞數(shù)明顯減低[1]，AS在中醫(yī)屬“脊痹”， 主要采用清熱利濕、滋補(bǔ)肝腎、活血通絡(luò)、行痹止痛的療法，植物草木樨具有清熱解毒的作用，草木樨流浸膏片聯(lián)合督灸[2,3]經(jīng)臨床應(yīng)用證實(shí)，其對(duì)強(qiáng)直性脊柱炎有明顯的臨床療效。我們通過應(yīng)用草木樨流浸膏片聯(lián)合中醫(yī)督灸療法治療AS，檢測(cè)AS患者血清中Th1、Th2、Th17及炎癥因子的水平，探討這種療法產(chǎn)生療效的可能機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)藥物草木樨流浸膏片(日本大阪生晃榮養(yǎng)藥業(yè) Seiko Eiyo Yakuhin Co.LTD)，每片含草木樨流浸膏25mg，批號(hào): M-B003、M-B004；雙氯芬酸鈉片，北京諾華制藥有限公司，每片25mg，批號(hào):X0112201304。

1.2 病歷選擇標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)符合1984年修訂的AS紐約標(biāo)準(zhǔn)；(2)年齡18～60歲；(3)病情處于活動(dòng)期，即符合下列三項(xiàng)中的任一項(xiàng)：①晨僵時(shí)間＞30min；②全身疼痛或脊柱疼痛Likert四級(jí)積分≥2分；③血沉(Erythrocyte sedimentation rate，ESR)或C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein, CRP)高于正常；(4)未接受過治療或曾僅使用非甾體抗炎藥物治療；(5)患者依從性好；(6)HLA-B27陽性。

1.2.2 一般資料 選取我院中醫(yī)科2014年11月—2018年10月AS患者40例，男34例，女6例，年齡28～56歲，平均(31.9±7.6)歲，病程0.5～19年，平均(11.2±6.5)年。將入選患者隨機(jī)分為兩組，各20例。試驗(yàn)組年齡(29.4±9.2)歲，病程(11.6±8.7)年；對(duì)照組年齡(28.3±3.9)歲，病程(9.3±4.3)年，兩組對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.3方法

1.3.1 給藥方法 試驗(yàn)組給予草木樨流浸膏片(日本生晃榮養(yǎng)藥品株式會(huì)社)1mg/kg(以草木樨流浸液量計(jì))，tid；對(duì)照組給予雙氯芬酸鈉片(北京諾華制藥有限公司)1mg/kg，tid，兩組患者均給予督灸治療。

督灸治療方法為：令患者裸背俯臥于床上，取大椎穴至腰腧穴的脊柱部位。常規(guī)消毒后，沿棘突均勻地撒督灸粉(主要成分為肉桂、丁香、麝香、斑蝥等成分)，成線條狀之后敷貼桑皮紙，再涂抹姜汁如條狀，然后再在紙上鋪生姜泥呈梯狀，姜末將左右骶髂關(guān)節(jié)包起來，之后在姜泥上置三角錐形艾柱，點(diǎn)燃艾柱上中下三點(diǎn)，任其自然自滅，連灸3狀后移去姜泥及艾灰，用濕熱毛巾輕輕擦干凈。灸后局部皮膚紅潤，48h內(nèi)禁止洗澡，施灸時(shí)間為10:00～15:00，每周督灸一次，兩次為一療程。

1.3.2 檢測(cè)指標(biāo)及方法 分別于治療前及治療4周后，清晨空腹靜脈采血5～10mL于EDTA抗凝管中，用EPICS-XL型流式細(xì)胞儀(美國Beckman-Coulter 公司)按照Ficoll試劑說明書操作，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)，加入30ul抗人CD3和CD4抗體，避光溫育20min進(jìn)行細(xì)胞染色，用預(yù)冷的PBS洗滌后，按固定與透膜試劑盒說明書操作對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定和透膜處理，再分別加入20ul抗人IFN-γ、IL-4、IL-17A熒光抗體進(jìn)行胞內(nèi)染色，用流式細(xì)胞儀自帶的FlowJo軟件分析Th1(CD3+CD4+IFN-γ+)、Th2(CD3+CD4+IL-4+)和Th17(CD3+CD4+IL-17+)細(xì)胞比例。

1.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(χ－±S)表示，符合正態(tài)分布用t檢驗(yàn)，非正態(tài)分布用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。假設(shè)檢驗(yàn)使用雙側(cè)檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 兩組治療前后淋巴細(xì)胞Th1、Th2和Th17比例±S，n=20)Tab1 Th1, Th2 and Th17 ratio of lymphocyte in two groups before and after treatment ±S，n=20)

表1 兩組治療前后淋巴細(xì)胞Th1、Th2和Th17比例±S，n=20)Tab1 Th1, Th2 and Th17 ratio of lymphocyte in two groups before and after treatment ±S，n=20)

注： 治療后, 試驗(yàn)組與對(duì)照組比較, ＊P＜0.05

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表2 兩組治療前后炎癥因子變化(±S，n=20)Tab2 Changes of inflammatory factors in two groups before and after treatment (±S，n=20)

表2 兩組治療前后炎癥因子變化(±S，n=20)Tab2 Changes of inflammatory factors in two groups before and after treatment (±S，n=20)

注： 兩組治療后與治療前比較, #P＜0.05, 治療后觀察組與對(duì)照組比較, ＊P＜0.05

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2 結(jié)果

2.1 兩組治療前后各臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)變化治療前，試驗(yàn)組和對(duì)照組相比，Th1、Th2和Th17相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療后，與對(duì)照組相比，Th1、Th17比例明顯下降，見表1。

2.2 T細(xì)胞因子治療前，兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩組治療后與治療前比較，細(xì)胞因子水平均明顯下降，治療后觀察組與對(duì)照組比較，細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ水平明顯下降，細(xì)胞因子IL-4、IL-10水平明顯下降，IFN-γ/IL-4比值明顯降低，其中治療后IL-2、IFN-γ和IFN-γ/IL-4兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2、表3。

3 討論

AS是一種與HLA-B27陽性明確相關(guān)的慢性免疫性疾病，其發(fā)病機(jī)制尚不明確，目前認(rèn)為主要與人類白細(xì)胞抗原(Human leukocyte antigen, HLA)B27相關(guān)，研究顯示[2]，其中約90%～95%的AS患者存在HLA-B27基因陽性。正常機(jī)體的Th1細(xì)胞亞群主要分泌IL-2、IFN-γ、IL-17，主要參與機(jī)體的細(xì)胞免疫，Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-6和IL-5等細(xì)胞因子，主要參與機(jī)體的體液免疫[4]。IL-4決定Th0細(xì)胞分化為Th1和Th2亞群的關(guān)鍵性調(diào)控因子，當(dāng)IL-4在高水平，Th0細(xì)胞分化為Th2細(xì)胞為主，當(dāng)IL-4缺乏時(shí)，IFN-γ會(huì)發(fā)揮促分化作用，使Th0細(xì)胞分化為Th1細(xì)胞[5]，另外，Th17可分泌IL-6/IL -17和TNF-α，加重AS的病理變化，Th17可轉(zhuǎn)變?yōu)榉置赥h1細(xì)胞因子的細(xì)胞，Th1和Th17共同參與了AS的炎癥反應(yīng)[6]。AS患者存在Th1、Th17細(xì)胞比例上調(diào)，引起細(xì)胞免疫功能亢進(jìn)，促進(jìn)炎癥的發(fā)生發(fā)展，Th2細(xì)胞比例降低，其介導(dǎo)的免疫抑制作用減弱，聯(lián)合檢測(cè)這三種細(xì)胞比例值有助于AS病情的監(jiān)測(cè)[1]。

AS在中醫(yī)屬“脊痹”，主要采用清熱利濕、滋補(bǔ)肝腎、活血通絡(luò)、行痹止痛療法。草木樨是一年生或兩年生豆科植物，具有清熱解毒的藥效。草木樨流浸膏片是草木樨植物的提取物，主要成分為香豆素酸、黃酮、多糖類物質(zhì)，能顯著抑制炎癥反應(yīng)、減輕水腫和疼痛。研究顯示，草木樨流浸膏片對(duì)強(qiáng)直性脊柱炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎具有良好的臨床療效[2,7]。督灸是祖國醫(yī)學(xué)用于治療強(qiáng)直性脊柱炎的傳統(tǒng)療法，具有良好的臨床療效，對(duì)延緩強(qiáng)直性脊柱炎的病情進(jìn)展具有顯著效果[8,9]。我們通過聯(lián)合應(yīng)用草木樨流浸膏片和督灸治療AS，患者病情得到明顯改善[3]。

本研究結(jié)果顯示，草木樨流浸膏片聯(lián)合督灸治療后，患者外周血Th1、Th17細(xì)胞比例明顯降低，炎癥因子IL-2、IFN-γ、IL-10表達(dá)水平明顯降低，提示此種治療方案可能通過調(diào)節(jié)患者外周血Th細(xì)胞亞群比例，降低AS患者體內(nèi)炎癥因子水平，從而緩解患者病情。

草木樨流浸膏片聯(lián)合督灸可用于治療AS，推測(cè)此種治療方案可能通過降低Th1和Th17細(xì)胞比例，降低相關(guān)炎癥因子IL-2和IFN-γ的作用機(jī)制，從而發(fā)揮作用。

表3 兩組治療前后IFN-γ/IL-4比值比較 (±S, n=20)Tab3 Comparison of IFN-gamma/IL-4 ratio between the two groups before and after treatment ±S, n=20)

表3 兩組治療前后IFN-γ/IL-4比值比較 (±S, n=20)Tab3 Comparison of IFN-gamma/IL-4 ratio between the two groups before and after treatment ±S, n=20)

注： 兩組治療后與治療前比較, #P＜0.05, 治療后觀察組與對(duì)照組比較, ＊P＜0.05

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