HPLC檢測(cè)中藥中非法添加化學(xué)降壓藥物

摘要：目的：了解中藥制劑中非法添加化學(xué)降壓藥物的現(xiàn)象，高效液相色譜法定性檢測(cè)中藥制劑可能含有10種非法添加的化學(xué)降壓藥物。方法：應(yīng)用AgilentExtend-C18柱（250mm*4.6mm，5μm），0.02mol·L/1醋酸銨溶液為流動(dòng)相A，甲醇-乙腈（2∶1）為流動(dòng)相B，梯度洗脫，230nm檢測(cè)波長(zhǎng)，30℃柱溫，1.0mL·min/1流速。結(jié)果：10種化學(xué)降壓藥物具有靈敏度，線性和檢測(cè)靈敏度。檢測(cè)限為0.01-13ng，連續(xù)5次進(jìn)樣的色譜圖中各組分的保留時(shí)間RSDlt;0.1%。結(jié)論：高效液相色譜法檢測(cè)中藥中非法加入化學(xué)降壓藥物，簡(jiǎn)便易行，重現(xiàn)性好?？梢宰鳛殍b別抗高血壓藥物的有效方法。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法;中藥制劑;化學(xué)降壓藥物;非法添加

近年以來(lái)，純中藥的制劑及各類的保健品中，非法進(jìn)行化學(xué)藥物添加的案例越多越多。降壓類的中藥制劑當(dāng)中，添加了西藥成分的現(xiàn)象在這些案件中相對(duì)突出，這種不法行為為人們健康帶來(lái)極其嚴(yán)重的威脅。本研究通過(guò)對(duì)中藥的制劑中是否存在非法添加了化學(xué)降壓藥進(jìn)行初步的篩查，選擇10種降壓藥物，應(yīng)用梯度洗脫法對(duì)化學(xué)降壓藥進(jìn)行分離的操作，結(jié)果顯示了該方法靈敏、簡(jiǎn)便且重復(fù)性好，具體操作如下。

1高效液相色譜技術(shù)含義

高效液相色譜的主要流動(dòng)相是液體，其使用高壓輸注系統(tǒng)向柱中添加混合溶劑和分離緩沖液。該方法可用于完成樣品檢驗(yàn)。高效液相色譜可廣泛應(yīng)用于化學(xué)，生物，醫(yī)藥，法律，商檢，環(huán)境檢測(cè)和生物化學(xué)等領(lǐng)域，其高靈敏度已受到檢測(cè)行業(yè)的廣泛贊譽(yù)。

2儀器與試藥

2.1儀器

高效液相色譜儀（Agilent1200），配液相四元泵、紫外光可變波長(zhǎng)檢測(cè)器、控溫自動(dòng)進(jìn)樣器;高速離心機(jī)（TGL16G）;電子天平（MettlerAE200）;超聲波發(fā)生器（SB5200）。

2.2降壓藥的對(duì)照品

氯沙坦鉀片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H20070264，用量規(guī)格：50mg，浙江華海藥業(yè)股份有限公司）、厄貝沙坦片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H20030016，用量規(guī)格：150mg，浙江華海藥業(yè)股份有限公司）、硝苯地平片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H44023986，用量規(guī)格：10mg，廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司）、酒石酸美托洛爾片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H32025390，用量規(guī)格：25mg，阿斯利康制藥有限公司）、鹽酸特拉唑嗪片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H20023659，用量規(guī)格：2mg，上海雅培制藥有限公司）、替米沙坦片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H20061185，用量規(guī)格：40mg，蘇州東瑞制藥有限公司）、鹽酸地爾硫片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H10880015，用量規(guī)格：30mg，上海信誼萬(wàn)象藥業(yè)股份有限公司）、尼群地平片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H13022629，用量規(guī)格：10mg，石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司）、氫氯噻嗪片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H44023235，用量規(guī)格：25mg，三才石岐制藥股份有限公司）、吲達(dá)怕胺片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H44020885，用量規(guī)格：2.5mg，廣東安諾藥業(yè)股份有限公司）、均為市場(chǎng)購(gòu)買，含量按標(biāo)示的含量100%進(jìn)行折算。

2.3試劑分析純?cè)噭ù姿徜@）、純化水、色譜純?yōu)榧状寂c乙腈（Tedia，美國(guó)）。

2.4樣品采用珍菊降壓片（國(guó)藥準(zhǔn)字Z20053333，規(guī)格：0.25g，含鹽酸可樂(lè)定0.03mg、氫氯噻嗪5mg蘆丁20mg，雷允上藥業(yè)有限公司）為市場(chǎng)購(gòu)買。

3方法

3.1高效液相色譜條件設(shè)置應(yīng)用C18色譜柱（250mm*4.6mm，5μm），0.02mol·L/1醋酸銨溶液為流動(dòng)相A，甲醇-乙腈（2∶1）為流動(dòng)相B，梯度洗脫，230nm檢測(cè)波長(zhǎng)，30℃柱溫，1.0mL·min/1流速，進(jìn)樣量控制2μL。

3.2制備對(duì)照液將10種獲得的對(duì)照藥研磨成粉，依次精密的稱取相當(dāng)各對(duì)照的化合物10mg量，置于同一帶塞的錐形瓶，精準(zhǔn)加入20mL甲醇，進(jìn)行10min超聲后靜置，并進(jìn)行高速離心10min，取離心后的上清液，獲得對(duì)照液以備用。

3.3樣品溶液的制備將珍菊抗高血壓片研磨成細(xì)粉，準(zhǔn)確放入帶塞子的錐形瓶中，加入20mL甲醇，靜置10分鐘，然后高速離心10分鐘。獲得上清液以制備樣品液體。

4結(jié)果

4.1降壓藥峰面積線性結(jié)果

制備得對(duì)照液注入高效液相色譜儀當(dāng)中進(jìn)行分析。依據(jù)高效液相色譜條件設(shè)置，10種降壓藥化合物均得到很好的分離。對(duì)照液進(jìn)行適量10倍稀釋，按高效液相色譜條件下依次進(jìn)樣分析（2～10μL每2μL梯度進(jìn)樣）。將10種降壓藥的進(jìn)樣量峰面積線性回歸顯示，R=0.9994～0.9999，藥物該流動(dòng)相系統(tǒng)穩(wěn)定，線性均呈現(xiàn)良好。

4.2檢測(cè)限

精密量取適量對(duì)照液，加甲醇逐級(jí)稀釋至不同濃度，按高效液相色譜條件設(shè)置進(jìn)行測(cè)定，顯示在高效的液相色譜圖當(dāng)中，各物質(zhì)的色譜峰信噪比（S/N）=10，研究的10種降壓藥物檢測(cè)限均處于0.01～13ng，表明HPLC檢測(cè)的靈敏性高。

討論

應(yīng)用梯度洗脫程序，以甲醇、乙腈及緩沖鹽作為流動(dòng)相。此系統(tǒng)可對(duì)10種降壓藥進(jìn)行同時(shí)的分離。并采用不同色譜柱，各藥物分離結(jié)果各不同。在應(yīng)用AgilentTC-C18柱分析HPLC的圖譜中觀察到了9個(gè)特征峰，其中，替米沙坦特征峰在圖譜中消失，因此AgilentTC-C18靈敏度低。而應(yīng)用AgilentExtend-C18柱進(jìn)行分析時(shí)，則10種藥的分離均良好，可選擇AgilentExtend-C18柱進(jìn)行處理分析。另外，研究的10種降壓藥物檢測(cè)限均處于0.01～13ng，表明HPLC檢測(cè)的靈敏性高。

綜上所述，HPLC檢測(cè)中藥中非法添加化學(xué)降壓藥物簡(jiǎn)單，靈敏，重現(xiàn)性好。可以作為鑒定抗高血壓藥物的有效方法。

參考文獻(xiàn)：

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