免疫膠體金法快速檢測水產(chǎn)品中喹諾酮類藥

摘要：目的：探究免疫膠體金法在快速檢測水產(chǎn)品中奎諾酮類藥物的應用效果。方法：本文使用實驗室自制的產(chǎn)QNAs抗體雜交瘤細胞株，水產(chǎn)取養(yǎng)殖場中的蝦、魚及憋等水產(chǎn)品共100g，研制出靈敏度較高的免疫膠體金試劑條，對樣品做好預處理，采用免疫膠體金檢測方法。結(jié)果：對奎諾酮類藥物進行測量，經(jīng)過預處理后，檢測結(jié)果均為陽性，在試劑板中可以看出，中間位置處的顏色較深，說明經(jīng)過有機試劑凈化或提取后結(jié)果更加干凈和清晰，檢測靈敏度相對較高。結(jié)論：免疫膠體金法能夠快速的檢測出水產(chǎn)品中的奎諾酮類藥物，應在水產(chǎn)品藥物殘留檢測中大力推廣使用。

關鍵詞：免疫膠體金法;奎諾酮;水產(chǎn)品

近年來，我國的水產(chǎn)事業(yè)發(fā)展迅速，水產(chǎn)中的藥物殘留對人們的身體健康造成極大威脅，加大對藥物殘留進行研究具有必要性?？Z酮作為一類抗菌藥，在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中預防及治療細菌中被廣泛應用。目前，免疫膠體金法被應用到藥物殘留篩查中，能夠快速的檢測出水產(chǎn)中奎諾酮類藥物的含量，確保人們的飲食安全。

喹諾酮類是合成抗菌藥物，喹諾酮類抗菌藥物通過阻止促旋酶靶向細菌DNA而起到殺菌劑的作用。喹諾酮類抗菌藥是合成抗菌藥物，這類抗菌藥物的藥理作用逐漸為人所知。這些藥物在臨床應用和適應癥治療方面取得了一些進展。由于其廣譜，低毒，效果好，給藥方便等優(yōu)點，被廣泛用于臨床治療。然而，與此同時，患者的不良反應也有所增加。

1資料及方法

1.1一般資料

本文使用實驗室自制的產(chǎn)QNAs抗體雜交瘤細胞株，水產(chǎn)取養(yǎng)殖場中的蝦、魚及憋等水產(chǎn)品共100g，使用攪拌機將其攪碎，將其放在-18℃的溫度下保存。在本次實驗中，所使用的試劑包括超純水、氯金酸、胎牛血清（FBS）、RPMI1640培養(yǎng)基、0.02mol·L-1Tris-HCI緩沖液，奎諾酮類藥物等。所使用的儀器及設備為二氧化碳培養(yǎng)箱、酶標儀、三維噴點平臺、分光光度計、空氣吹干機、高效液相色譜儀等。

1.2方法

體外抗體制備：將適量的RPMI1640培養(yǎng)基，加入到QH12雜交瘤細胞株復蘇中，將10000g進行離心，時間控制在30min，并慢慢加入0.02mol·L-1的PBS，將其進行充分的攪拌，確保能夠完全沉淀。再使用PBS復溶，測量其吸光值，并對蛋白質(zhì)的濃度進行測量，并放在-86℃的溫度下凍存。

對膠體金進行研制：對硫酸-重鉻酸鉀洗液進行浸泡，浸泡結(jié)束后進行清洗，待洗凈后進行烘干，以備使用。在250mL的三角瓶內(nèi)壁涂抹2mL1307鍍劑，并將多余的液體倒出，將其放到60℃的溫度下烘干。

膠體金標記：使用0.01molL-1的PB緩沖液將凍干抗體制備為0.5mg·L-1的溶液，離心時間應持續(xù)60min，將蛋白聚合物去除掉，使用0.1mol·L-1Tris-HCI將100mL的膠體金的pH值調(diào)節(jié)至8.7。將1mL的膠體金加入到小試管中，對抗體量做好預標記，在裝空白膠體金墊試劑條上滴入2μL錦標抗體溶液，對加入5ng·mL-1Cip或PBS后的T線級C線顯色及抑制效果進行觀察。使用最佳的抗體量對60mL的膠體金進行標記，將15000g的離心時間控制在30min，對底部位置紫紅色的金抗體進行保留，將其保存在4℃的溫度下。

2結(jié)果

體外抗體的制備，對QH12雜交瘤細胞株進行體外培養(yǎng)后，獲取4.4g的純化抗體。掃描膠體金紫外-可見光200-800nm時，掃描的范圍應控制在紫外-可見光波長為200-800nm范圍內(nèi)，應確保吸收峰與吸收曲線的高度一致性。實驗結(jié)果證實，膠體金的重復波形具有一致性。膠體金標記抗體實驗，當抗體的濃度為0.5-2.0μg·mL-1時，Cip對T線上的抗體反應及抗原展現(xiàn)出了較強的抑制性作用;當抗體濃度gt;4.0μg·mL-1時，未產(chǎn)生抑制作用;當抗體濃度lt;1.0μg·mL-1時，顯色的顏色相對偏淺。膠體金標記抗體顯色情況見表1。吹干溶液，對奎諾酮類藥物進行測量，經(jīng)過預處理后，檢測結(jié)果均為陽性，在試劑板中可以看出，中間位置處的顏色較深，說明經(jīng)過有機試劑凈化或提取后結(jié)果更加干凈和清晰，檢測靈敏度相對較高。

3討論

單克隆抗體的獲取主要是通過對雜交瘤細胞采用體外制備方法來實現(xiàn)，來完成對水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物的檢測，目前主要時使用免疫膠體金試劑盒。近年來，免疫膠體金法被廣泛應用于水產(chǎn)品喹諾酮類藥物檢測中，該種檢測方法具有成本低、操作便利、檢測速度快等優(yōu)勢。免疫膠體金法在檢測過程中，會與多種奎諾酮藥物發(fā)生反應，與其他類型的藥物不會發(fā)生反應，因此在檢測時，不受其他藥物殘留的干擾，使奎諾酮藥物的篩查更加快速。

喹諾酮是一種合成抗菌藥物。其作用機制是通過抑制細菌DNA解旋酶的活性來抑制mRNA和蛋白質(zhì)的合成，使細菌細胞延伸到細絲中并最終演變成液泡。同時，這些抗菌劑也可以使用外切核酸酶來阻斷DNA復制過程并實現(xiàn)DNA降解。與其他抗菌藥物相比，喹諾酮類藥物之間沒有顯著的交叉耐藥性。喹諾酮類抗菌藥物的臨床應用得到了廣泛的推廣。目前，喹諾酮類抗菌藥物主要用于治療呼吸道感染，尿路感染，皮膚感染，關節(jié)感染等，通常用作圍手術期的預防藥物。喹諾酮類抗菌藥物對革蘭氏陰性菌和陽性菌有很好的療效。這些抗菌劑的殺菌作用對包括大腸桿菌，志賀氏菌和腸桿菌在內(nèi)的真菌具有良好的殺菌作用。臨床合理應用喹諾酮類抗生素不會增加臨床不良反應的發(fā)生率，不良反應的特征是惡心，腹痛和胃腸道反應。患者對上述不良反應有一定的耐受性。

綜上所述，免疫膠體金法能夠快速的檢測出水產(chǎn)品中的奎諾酮類藥物，應在水產(chǎn)品藥物殘留檢測中大力推廣使用。

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