5種不同種質(zhì)來(lái)源鐵皮石斛莖含水量、總黃酮及多糖含量分析

吳建國(guó)，林柳悅，吳巖斌，吳錦忠

（福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350122）

鐵皮石斛（Dendrobium officinaleKimura et Migo）為蘭科石斛屬植物，俗稱(chēng)鐵皮楓斗，是常用的名貴中藥，《神農(nóng)本草經(jīng)》中列為上品，功能益胃生津，滋陰清熱，用于熱病津傷，口干煩躁，胃陰不足，食少干嘔，病后虛熱不退，陰虛火旺，骨蒸勞熱，目暗不明，筋骨痿軟［1］265。 鐵皮石斛含有黃酮、多糖、甘露糖、和生物堿等活性成分，具有抗衰老、抗氧化和免疫調(diào)節(jié)等作用［2-4］。本實(shí)驗(yàn)對(duì)5種不同種質(zhì)來(lái)源鐵皮石斛莖含水量、總黃酮和多糖含量進(jìn)行測(cè)定，為其質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 材料與試劑 5種不同種質(zhì)來(lái)源鐵皮石斛來(lái)自福建連城（LC）、浙江（ZJ）、廈門(mén)集美（JM）、廈門(mén)（XM）和云南（YN），福清市佳家農(nóng)業(yè)綜合發(fā)展有限公司提供，經(jīng)黃澤豪副教授鑒定為蘭科石斛屬鐵皮石斛（Dendrobium officinaleKimura et Migo）。蘆丁對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100080-200707）；葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（上海國(guó)藥集團(tuán)有限公司，分析純）；無(wú)水乙醇（天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑廠，分析純）；氫氧化鈉、苯酚（天津福晨化學(xué)試劑廠）；硝酸鋁（上海新寶精細(xì)化工廠）；亞硝酸鈉、濃硫酸（上海三鷹化學(xué)試劑有限公司，分析純）。

1.2 儀器 AR223CN千分一電子天平（上海奧豪斯儀器有限公司）；UV-1800紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津公司）；KQ-500E超聲波清洗器 （昆山市超聲儀器有限公司）；石英比色皿（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；SFG-0.2600電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（黃石市恒豐醫(yī)療器械有限公司）；RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；SHB-Ш循環(huán)水式多用真空泵、DLSB-5／20低溫冷卻液循環(huán)泵、R501C恒溫水浴鍋（鄭州長(zhǎng)城科技工貿(mào)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 新鮮鐵皮石斛莖含水量測(cè)定 采用2010年版《中國(guó)藥典》一部，附錄 IX H 水分測(cè)定法［1］147，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 5種不同種質(zhì)來(lái)源鐵皮石斛莖含水量測(cè)定結(jié)果

2.2 鐵皮石斛莖總黃酮含量測(cè)定

2.2.1 供試品溶液的制備 將鐵皮石斛莖用蒸餾水洗凈、干燥、粉碎，準(zhǔn)確稱(chēng)取1.0 g鐵皮石斛干燥粉末，加入料液比1∶30，80%的乙醇回流提取3次，2 h／次，合并濾液并濃縮，回收溶劑后用80%乙醇定容于50 mL量瓶中。

2.2.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線制定 精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品10 mg，置于50 mL瓶中，無(wú)水乙醇定容至刻度，得濃度為0.2 mg／mL的對(duì)照品；依次精密量取蘆丁對(duì)照品溶液 0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 和 3.0 mL 于 10 mL的量瓶中，分別加入蒸餾水至3 mL；依次分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.5 mL混勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液0.5 mL搖勻，放置6 min，再加入4%氫氧化納溶液5 mL，加蒸餾水稀釋至刻度搖勻，放置15 min；以相應(yīng)的試劑為空白對(duì)照，在510 nm處測(cè)得吸光度值［5］。結(jié)果表明蘆丁在 0.01～0.06 mg／mL線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為：

2.2.3 總黃酮含量測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證 精確吸取蘆丁對(duì)照品溶液2 mL于10 mL的量瓶中，共6份，按“2.2.2”方法連續(xù)測(cè)量6次，計(jì)算其吸光度RSD為0.43%，表明儀器精密度良好。穩(wěn)定性試驗(yàn)精確量取3號(hào)供試品溶液2 mL于10 mL的量瓶中，共6份，按“2.2.2”方法每隔10 min測(cè)量，結(jié)果顯示平均吸光度值為0.210，RSD值為1.18%，表明待測(cè)品溶液在50 min內(nèi)穩(wěn)定性良好。取3號(hào)供試品6份平行制備供試品溶液，按“2.2.2”項(xiàng)連續(xù)測(cè)量，結(jié)果顯示平均含量為0.442%，RSD值為1.50%，表明重復(fù)性良好。精密稱(chēng)取6份已知總黃酮含量的3號(hào)鐵皮石斛粉末1.0000 g，加入一定量的蘆丁對(duì)照品，按照2.2.1所述制得樣品液，按照2.2.2所述顯色并測(cè)定吸光度，得平均回收率為99.46%，RSD值為1.02%。

2.2.4 供試品中總黃酮含量測(cè)定 精密吸取2 mL供試品溶液，按“2.2.2”方法測(cè)定吸光度，每個(gè)供試品按照該法平行測(cè)定3份，取其平均值，計(jì)算鐵皮石斛中總黃酮的含量。見(jiàn)表2。

表2 5種不同種質(zhì)來(lái)源鐵皮石斛莖中總黃酮含量

2.3 鐵皮石斛莖多糖含量測(cè)定

2.3.1 供試品溶液的制備 精密稱(chēng)定鐵皮石斛粉末（過(guò) 3號(hào)篩）約 0.3 g，平行 3份，加水 200 mL，加熱回流2 h，趁熱過(guò)濾，定容；精密量取續(xù)濾液2 mL，置15 mL離心管中，精密加入無(wú)水乙醇至10 mL，搖勻，冷藏1 h后離心，棄去上清液，沉淀加80%乙醇洗滌2次，每次8 mL，離心，棄去上清液，干燥得石斛多糖；加熱水溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，備用。

2.3.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制定 精密稱(chēng)取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品5 mg，置于50 mL的量瓶中，蒸餾水溶解定容至刻度，得濃度為0.1 mg／mL的對(duì)照品；分別精密量取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶 液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL置于10 mL的具塞試管中，并分別加蒸餾水至2 mL，各加1.0 mL 5%苯酚溶液，振搖混勻，迅速加入濃硫酸5.0 mL，混合均勻，于沸水浴中加熱15 min，取出，迅速冷卻至室溫，以相應(yīng)的試劑為空白對(duì)照。在490 nm處測(cè)得吸光度值［6］，結(jié)果表明葡萄糖在2.655～15.930 mg／L線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為：

2.3.3 多糖含量測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證 精確吸取葡萄糖對(duì)照品溶液2 mL于10 mL的量瓶中，共6份，按“2.3.2”方法連續(xù)測(cè)量6次，計(jì)算其吸光度RSD為0.43%，表明儀器精密度良好。穩(wěn)定性試驗(yàn)精確量取3號(hào)供試品溶液2 mL于10 mL的具塞試管中，共6份，按“2.3.2”方法每隔10 min測(cè)量，結(jié)果顯示平均吸光度值為0.319，RSD值為1.20%，表明待測(cè)品溶液在1 h內(nèi)穩(wěn)定。取3號(hào)供試品6份平行制備供試品溶液，按“2.3.2”項(xiàng)連續(xù)測(cè)量，結(jié)果顯示平均含量為29.1%，RSD值為0.65%，表明重復(fù)性良好。準(zhǔn)確稱(chēng)取6份已知總多糖含量的3號(hào)石斛多糖，準(zhǔn)確加入一定量的葡萄糖對(duì)照品，按照2.3.1所述制得樣品液，按照2.3.2所述顯色并測(cè)定吸光度，得平均回收率為98.39%，RSD值為1.58%。

2.3.4 供試品中多糖含量測(cè)定 精密吸取2 mL供試品溶液，按“2.3.2”項(xiàng)測(cè)量，每個(gè)供試品按照該法平行測(cè)定3份，取其平均值。測(cè)得的吸光度代入回歸方程中，計(jì)算鐵皮石斛中多糖的含量。見(jiàn)表3。

表3 5種不同種質(zhì)來(lái)源鐵皮石斛莖中多糖含量

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：5種不同來(lái)源鐵皮石斛莖不論是含水量，總黃酮和多糖含量均存在一定的差異，含水量以云南種質(zhì)來(lái)源最高（云南＞廈門(mén)＞連城＞廈門(mén)集美＞浙江＞70%）；總黃酮含量也以云南最高 （云南＞浙江＞廈門(mén)集美＞廈門(mén)＞連城＞0.4%）；而多糖含量則以浙江最高（浙江＞廈門(mén)＞福建連城＞云南＞廈門(mén)集美）。這些差異可能來(lái)自于不同的種質(zhì)來(lái)源。本實(shí)驗(yàn)為石斛的質(zhì)量評(píng)價(jià)及控制提供了一定的參考依據(jù)，不同種質(zhì)來(lái)源石斛的質(zhì)量差異及其影響因素有待于進(jìn)一步的研究。