清眩降壓湯和清達(dá)顆粒對(duì)大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)張力作用的藥效比較研究

黃 月 ，褚劍鋒 ，2，3，沈阿靈 ，3，李瓊瑜 ，林 珊 ，3，彭 軍 ，2，3

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究院，福建 福州 350122；2.福建省中西醫(yī)結(jié)合老年性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350122；3.福建中醫(yī)藥大學(xué)陳可冀學(xué)術(shù)思想傳承工作室，福建 福州 350122）

高血壓病是嚴(yán)重危害人類健康的常見心血管病之一，是全球疾病負(fù)擔(dān)的主要因素［1］。根據(jù)《中國居民營養(yǎng)與慢性病狀況報(bào)告（2015年）》［2］調(diào)查顯示：2012年年齡≥18歲人群高血壓的知曉率、治療率和控制率分別為46.5%、41.1%和13.8%。人群對(duì)高血壓“三率”的認(rèn)識(shí)也是很低的，大多數(shù)高血壓患者血壓控制還遠(yuǎn)未達(dá)標(biāo)，防治任務(wù)相當(dāng)艱巨。目前，藥物治療是高血壓病最主要的治療方法，其中中藥治療在高血壓的早期防治中逐漸成為一個(gè)熱點(diǎn)［3-5］。

國醫(yī)大師陳可冀院士認(rèn)為高血壓發(fā)病存在由陽盛到陰陽兩虛的一個(gè)演化過程［6］，臨床上高血壓初期多以肝陽上亢或肝火上炎為主要證候特征，故陳可冀院士在天麻鉤藤飲的基礎(chǔ)上加減化裁，創(chuàng)立了清眩降壓湯用以治療上述證型的高血壓患者。臨床研究表明：清眩降壓湯可較好地控制血壓，有效改善高血壓患者的臨床癥狀和生活質(zhì)量［7-11］?；A(chǔ)研究提示清眩降壓湯可有效控制SHR大鼠血壓，改善高血壓引起的腦損害，并有效抑制靶器官損害如腎臟纖維化、心肌重構(gòu)和血管重構(gòu)等［9-10］。清達(dá)顆粒由清眩降壓湯精簡化裁而來，由天麻、鉤藤、黃芩和蓮子心4味藥組成，前期研究已證實(shí)清達(dá)顆粒具有顯著抑制SHR大鼠血壓的作用［12］。為了進(jìn)一步比較清達(dá)顆粒與清眩降壓湯對(duì)血管舒張作用，本文通過檢測(cè)血管環(huán)張力改變，比較清眩降壓湯和清達(dá)顆粒對(duì)高鉀和去甲腎上腺素預(yù)收縮后大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)的舒張作用，為進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究提供前期基礎(chǔ)。

1 材 料

1.1 動(dòng)物及分組 本實(shí)驗(yàn)采用8～10周齡的SPF級(jí)wistar雄性大鼠，平均體質(zhì)量為（200±20）g。每次實(shí)驗(yàn)取1只健康雄性wistar大鼠的胸主動(dòng)脈制備成血管環(huán)，分為對(duì)照組、清眩降壓湯組和清達(dá)顆粒組，每組3個(gè)血管環(huán)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由福建中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購買，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（閩）2014-0001。

1.2 試劑 清眩降壓湯（生產(chǎn)批號(hào)：CKJ2016004）和清達(dá)顆粒（生產(chǎn)批號(hào)：CKJ2017001）購于江陰天江藥業(yè)有限公司，分別用生理鹽水配制成50 mg／mL的溶液，現(xiàn)配使用；重酒石酸去甲腎上腺素一水合物（NE，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；氯化鉀（KCl，美國 Sigma 公司）；乙酰膽堿（Ach，美國Sigma公司）；Krebs緩沖液由超純水溶解配制，其成分為：118 mM NaCl（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；4.7 mM KCl（美國 Sigma 公司）；1.2 mM MgCl2（美國Sigma 公司）；10 mM HEPES（美國 Sigma 公司）；11.1 mM葡萄糖（北京索萊寶科技有限公司）和2 mM CaCl2（天津市博迪化工有限公司）。Krebs緩沖液配制完成后用3 mol／L NaOH（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）調(diào)pH值至 7.4，后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需試劑均由正常Krebs緩沖液稀釋至所需濃度。實(shí)驗(yàn)過程中所述濃度均為浴槽內(nèi)試劑的終濃度。

1.3 儀器 JH-2（5 g）張力換能器、BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、HV1403離體組織器官恒溫灌流系統(tǒng)和HW-500超級(jí)恒溫水浴均購自成都泰盟科技有限公司。

2 方 法

2.1 大鼠胸主動(dòng)脈血管環(huán)制備及內(nèi)皮完整性檢測(cè)

將大鼠用2%戊巴比妥鈉麻醉后，腹主動(dòng)脈采血處死，迅速打開胸腔并分離胸主動(dòng)脈，置于4℃Krebs緩沖液中，用大頭針固定血管環(huán)兩端，剝離干凈血管周圍的脂肪及結(jié)締組織，把動(dòng)脈剪成長度約3～4 mm的血管環(huán)。血管環(huán)一端用不銹鋼三角鉤垂直懸掛于浴槽中，另一端連接張力轉(zhuǎn)換器，使用BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄血管環(huán)的張力。每個(gè)浴槽內(nèi)懸掛一條血管環(huán)并向浴漕內(nèi)持續(xù)通入95%O2和5%CO2，緩慢調(diào)節(jié)血管環(huán)張力至 2 g，37℃下平衡1 h，期間每20 min換液 1次。在浴槽中加入60 mM KCl刺激，張力收縮幅度小于1 g的血管環(huán)被認(rèn)為活性差，不用于實(shí)驗(yàn)。用1μM NE預(yù)收縮血管環(huán)，待收縮達(dá)到平臺(tái)期后加入10μM乙酰膽堿，若舒張幅度大于70%認(rèn)為內(nèi)皮完整。

舒張率計(jì)算公式：舒張率＝［（NE誘發(fā)最大收縮值－加入藥物后的血管張力值）／NE誘發(fā)最大收縮值］×100%

2.2 靜息狀態(tài)下3組血管環(huán)張力的觀察 待血管環(huán)張力穩(wěn)定后，清眩降壓湯組和清達(dá)顆粒組分別以累積加藥法依次加入配制好的清眩降壓湯和清達(dá)顆粒藥液，使浴槽內(nèi)藥物終濃度分別達(dá)到0.25、0.5、0.75、1mg／mL，每個(gè)濃度干預(yù)時(shí)間 30 min；對(duì)照組加入等體積生理鹽水。觀察3組血管環(huán)張力的變化。

2.3 KCl預(yù)收縮后3組血管環(huán)張力的觀察 待血管環(huán)張力穩(wěn)定后，用60 mM KCl預(yù)收縮血管環(huán)，使其收縮達(dá)到平臺(tái)期后，清眩降壓湯組和清達(dá)顆粒組分別以累積加藥法依次加入配制好的清眩降壓湯和清達(dá)顆粒藥液，使浴槽內(nèi)藥物終濃度分別達(dá)到0.25、0.5、0.75、1mg／mL，每個(gè)濃度干預(yù)時(shí)間 30 min；對(duì)照組加入等體積生理鹽水。觀察3組血管環(huán)張力的變化。

2.4 NE預(yù)收縮后3組血管環(huán)張力的觀察 待血管環(huán)張力穩(wěn)定后，用1μM NE預(yù)收縮血管環(huán)，使其收縮達(dá)到平臺(tái)期后，清眩降壓湯組和清達(dá)顆粒組分別以累積加藥法依次加入配制好的清眩降壓湯或清達(dá)顆粒藥液，使浴槽內(nèi)藥物終濃度分別達(dá)到0.25、0.5、0.75、1 mg／mL，每個(gè)濃度干預(yù)時(shí)間 30 min；對(duì)照組加入等體積生理鹽水。觀察3組血管環(huán)張力的變化。

每次記錄每組3個(gè)血管環(huán)的張力值，最后結(jié)果取其平均值。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料屬于正態(tài)分布的以（±s）表示，采用單因素方差分析，非正態(tài)分布的采用秩和檢驗(yàn)。

3 結(jié) 果

3.1 3組靜息狀態(tài)下血管環(huán)張力的變化 見圖1。

圖1 3組對(duì)靜息狀態(tài)下胸主動(dòng)脈血管環(huán)張力的變化

3.2 KCl預(yù)收縮血管后3組血管環(huán)張力的變化見圖2。圖2顯示清眩降壓湯對(duì)血管環(huán)的最大舒張率達(dá)18.7%，清達(dá)顆粒對(duì)血管環(huán)的最大舒張率達(dá)34.4%，清達(dá)顆粒在高鉀預(yù)收縮血管后對(duì)血管環(huán)的舒張作用優(yōu)于清眩降壓湯。

圖2 3組對(duì)KCl預(yù)收縮血管環(huán)張力的作用

3.3 NE預(yù)收縮血管后3組血管環(huán)張力的變化見圖3。圖3顯示清眩降壓湯對(duì)血管環(huán)的最大舒張率達(dá)48.1%，清達(dá)顆粒對(duì)血管環(huán)的最大舒張率達(dá)88.3%，清達(dá)顆粒在NE預(yù)收縮血管后對(duì)血管環(huán)的舒張作用優(yōu)于清眩降壓湯。

圖3 3組對(duì)NE預(yù)收縮血管環(huán)張力的作用

4 討 論

清眩降壓湯是陳可冀院士治療高血壓的臨床經(jīng)驗(yàn)方［12］，清達(dá)顆粒是在清眩降壓湯基礎(chǔ)上優(yōu)化化裁而來。清達(dá)顆粒中天麻熄風(fēng)定驚為君；鉤藤清熱平肝熄風(fēng)為臣；黃芩清肝瀉火為佐；加以蓮子心清心除煩為使，全方共奏清肝熱、平肝陽、瀉心火之功效。為探討清達(dá)顆粒和清眩降壓湯在舒張血管上的藥效，本實(shí)驗(yàn)采用大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)，給予不同的血管收縮劑誘導(dǎo)血管收縮后，測(cè)量血管環(huán)張力，觀察清眩降壓湯和清達(dá)顆粒對(duì)離體大鼠胸主動(dòng)脈血管環(huán)張力的影響。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在靜息狀態(tài)下，清眩降壓湯和清達(dá)顆粒對(duì)血管環(huán)的張力并無明顯改變，可見，清達(dá)顆粒和清眩降壓湯對(duì)靜息狀態(tài)下的血管環(huán)張力均無影響；在NE刺激血管收縮后，清達(dá)顆粒和清眩降壓湯均可促進(jìn)血管舒張，可見，舒張因NE水平升高導(dǎo)致的收縮血管可能是清達(dá)顆粒和清眩降壓湯發(fā)揮降壓作用的機(jī)制之一；在KCl刺激血管收縮后，清達(dá)顆粒和清眩降壓湯亦均可促進(jìn)血管舒張，可見，舒張因KCl水平升高導(dǎo)致的收縮血管亦可能是清達(dá)顆粒和清眩降壓湯發(fā)揮降壓作用的另一重要機(jī)制，且清達(dá)顆粒在舒張血管上的效果優(yōu)于清眩降壓湯。