全自動尿沉渣分析儀計數(shù)體液細(xì)胞的性能評價

李春蕓 陳春燕 陳 彬

體液細(xì)胞常規(guī)檢驗是鑒別滲出液與漏出液的重要方法之一，目前常規(guī)測定方法是用牛鮑氏手工鏡檢法計數(shù)，其存在的弊端是操作繁瑣，重復(fù)性差，且與檢驗人員水平密切相關(guān)。因此，迫切需要一種更簡單、快速、精密度高以及準(zhǔn)確度高的方法替代。血常規(guī)分析儀計數(shù)體液細(xì)胞是目前使用最多的一種替代方法，但由于大部分血細(xì)胞分析儀白細(xì)胞(white blood cell，WBC)檢測下限為100×106/L，且間皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞對WBC的檢測易造成干擾，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性[1-2]。IRIS IQ200型全自動尿沉渣分析儀(簡稱IQ200分析儀)主要用于尿液沉渣定量分析，其測定WBC和紅細(xì)胞(red blood cell，RBC)的線性范圍大，且IQ200分析儀具有人工修飾功能，可任意地選取熒光屏上可疑的成分圖像，根據(jù)檢測人員經(jīng)驗進(jìn)行判斷，重新分類。

本研究參照“2014版國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(ICSH)體液細(xì)胞自動化計數(shù)儀性能和驗證指南”對IQ200分析儀計數(shù)體液WBC和RBC進(jìn)行性能評價[3-4]。評估IQ200分析儀計數(shù)體液WBC和RBC的各項性能指標(biāo)(精密度，攜帶污染率，檢出下限，相關(guān)性)，評價IQ200分析儀計數(shù)體液中WBC和RBC的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2018年1-6月?？卺t(yī)院住院的150例患者的150份體液(胸水、腹水及腦脊液)標(biāo)本，其中腦脊液33份，胸水67份，腹水50份。外觀正常標(biāo)本26份，微渾標(biāo)本38份，黃色渾濁標(biāo)本40份，血性46份。標(biāo)本立即送檢，并在2 h內(nèi)完成計數(shù)。

1.2 儀器與試劑

采用IQ200分析儀[美國國際遙控影像系統(tǒng)有限公司(International Remote Imaging System，IRIS)]及配套試劑、質(zhì)控品(美國IRIS公司)；牛鮑氏計數(shù)板(上海求精生化試劑儀器有限公司)；光學(xué)顯微鏡(日本OLYMPUS公司)；生理鹽水(自配)。

1.3 檢測方法

1.3.1 標(biāo)本前期處理

對不同外觀的標(biāo)本進(jìn)行前期處理，外觀正常標(biāo)本直接計數(shù)，血性、渾濁標(biāo)本用生理鹽水按1∶5～1∶100倍稀釋。每份標(biāo)本分成兩份，一份用于手工計數(shù)，一份用于IQ200分析儀計數(shù)。計數(shù)結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)即為最終細(xì)胞數(shù)，見表1。

表1 不同外觀標(biāo)本采用的稀釋倍數(shù)

1.3.2 空白實驗

用去離子水作為樣本，分別使用儀器法和手工法檢測3次，計數(shù)WBC和RBC。由2名有經(jīng)驗的檢驗人員采用雙盲方式完成，取2次測定結(jié)果的平均值進(jìn)行報告。

1.3.3 批內(nèi)精密度

選取WBC和RBC含量低值、中值及高值的3份體液標(biāo)本，每份分別使用儀器法和手工法連續(xù)計數(shù)11次，各剔除1個最差的結(jié)果，分別統(tǒng)計每組10個結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差(S)和變異系數(shù)(coefficient of variation，CV)。

1.3.4 攜帶污染率

分別取WBC和RBC高值體液標(biāo)本連續(xù)測定3次(H1、H2、H3)，然后再測定3次低值標(biāo)本(L1、L2、L3)，計算污染率，其計算為公式1：

污染率=(L1-L3)÷(H3-L3)×100% (1)

1.3.5 牛鮑氏手工計數(shù)法

標(biāo)本前期處理后，再手工顛倒15次充分混勻，然后用移液管吸取少量滴入牛鮑氏計數(shù)板稍待靜置5～10 min，低倍鏡下計數(shù)10個大方格內(nèi)RBC數(shù)和WBC數(shù)。由2名有經(jīng)驗的檢驗人員采用雙盲方式完成，取2次測定結(jié)果的平均值進(jìn)行報告，上述所有標(biāo)本2 h內(nèi)測定完畢。

1.3.6 IQ200分析儀計數(shù)法

標(biāo)本前期處理后，再手工顛倒15次充分混勻后按照儀器說明書上機檢測。本實驗由有經(jīng)驗的檢驗人員對可疑的成分圖像重新判斷，并記錄修飾后的定量計數(shù)結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法空白實驗

用去離子水作為樣本，手工法計數(shù)WBC和RBC均為0，儀器法計數(shù)WBC和RBC均為0。

因此IQ200分析儀計數(shù)體液WBC和RBC的檢測下限可達(dá)到0，同手工法計數(shù)。

2.2 兩種方法計數(shù)體液細(xì)胞精密度

兩種方法分別計數(shù)高值、中值及低值細(xì)胞11次后，各剔除一個最差結(jié)果，其平均值，標(biāo)準(zhǔn)差，變異系數(shù)見表2。

表2顯示，在兩種方法檢測中，細(xì)胞數(shù)越少，精密度越差。儀器法和手工法比較，IQ200分析儀計數(shù)體液WBC、RBC變異系數(shù)均＜10%，比手工法低，可見IQ200分析儀計數(shù)體液細(xì)胞精密度高，適用于體液細(xì)胞計數(shù)。

2.3 IQ200分析儀攜帶污染率

WBC攜帶污染率為0.03%，RBC攜帶污染率為0。IQ200分析儀計數(shù)體液WBC和RBC的攜帶污染率較低，在計數(shù)體液細(xì)胞時，可以不必清洗后再測定，見表3。

2.4 兩種方法計數(shù)體液細(xì)胞的相關(guān)性分析

IQ200分析儀與手工法計數(shù)體液WBC相關(guān)性呈高度相關(guān)r=0.943，如圖1所示。

表2 手工法和IQ200分析儀計數(shù)體液細(xì)胞的變異系數(shù)CV(%，

表2 手工法和IQ200分析儀計數(shù)體液細(xì)胞的變異系數(shù)CV(%，

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表3 IQ200分析儀攜帶污染率

圖1 IQ200分析儀與手工法計數(shù)體液WBC相關(guān)性散點圖

IQ200分析儀與手工法計數(shù)體液RBC相關(guān)性呈高度相關(guān)r=0.982，如圖2所示。

圖2 IQ200分析儀與手工法計數(shù)體液RBC相關(guān)性散點圖

3 討論

牛鮑氏手工鏡檢法計數(shù)是計數(shù)體液細(xì)胞的常規(guī)方法和金標(biāo)準(zhǔn)，但存在的缺點是操作繁瑣，重復(fù)性差，耗時長，對檢驗人員水平要求較高。2014版國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會體液細(xì)胞自動計數(shù)儀性能和驗證指南建議自動細(xì)胞計數(shù)儀準(zhǔn)確計數(shù)體液細(xì)胞的驗證方法[4]。

目前，有多種血液分析儀應(yīng)用于漿膜腔積液細(xì)胞的計數(shù)，但體液中間皮細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞對WBC的檢測造成干擾，特別是間皮細(xì)胞，有些分析儀會把間皮細(xì)胞歸類在WBC中計數(shù)，造成WBC計數(shù)增加，而影響結(jié)果[5-6]。一些血液分析儀由于其背景計數(shù)高，對體液細(xì)胞計數(shù)有一定的局限性，尤其當(dāng)?shù)图?xì)胞濃度時影響更加明顯[7]。低細(xì)胞數(shù)導(dǎo)致了自動化檢測的精密度下降，其CV甚至＞20%，越接近自動化分析儀的最低檢出限，細(xì)胞計數(shù)的準(zhǔn)確性和精密度越差[8-9]。由于低值細(xì)胞計數(shù)常見于各種體液，尤其是腦脊液，因此必須驗證儀器準(zhǔn)確計數(shù)低值細(xì)胞的性能[4]。IQ200分析儀空白試驗WBC可達(dá)到0，其最低檢出限可達(dá)到0。當(dāng)體液細(xì)胞過少時，IQ200分析儀比血液分析儀更有優(yōu)勢，血液分析儀在細(xì)胞＜1×106/L時，儀器不能準(zhǔn)確測出。許多研究報道顯示，血液分析儀僅用于漿膜腔積液細(xì)胞的計數(shù)，不能用于腦脊液的計數(shù)。IQ200分析儀不僅適用于漿膜腔積液，而且也適用于腦脊液的計數(shù)，但其不足之處在于不能對WBC進(jìn)行分類。

IQ200分析儀使用流式細(xì)胞原理和先進(jìn)的自動粒子識別(APR)分析系統(tǒng)。應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)，每個檢測樣本在鞘液包裹下進(jìn)入一個流動樣本室，再進(jìn)行連續(xù)攝影成像，將攝像所得的有形成分與記憶庫中有形成分進(jìn)行對比，從而判斷有形成分的種類及精確計數(shù)有形成分的數(shù)量。同時IQ200分析儀具有人工修飾功能，可任意地選取熒光屏上可疑的成分圖像，根據(jù)檢測人員對形態(tài)判定的經(jīng)驗進(jìn)行判斷，重新分類，并且可以計算出對應(yīng)的數(shù)量，修飾功能可以極大提高檢測準(zhǔn)確性。

IQ200分析儀具有很好的精密度，無論是高值、中值及低值體液細(xì)胞數(shù)，其變異系數(shù)均＜10%。IQ200分析儀還具有較低的互染率，RBC互染率為0，WBC互染率為0.03%；與手工計數(shù)法之間均呈高度相關(guān)(WBC r=0.943、RBC r=0.982)。故IQ200分析儀計數(shù)體液WBC和RBC具有檢出下限低、精密度高及攜帶污染率低，與手工計數(shù)法相關(guān)性高的特點，且簡便、重復(fù)性好，適用于體液WBC和RBC計數(shù)。