河北省130份西瓜品種與種質(zhì)資源抗病基因KASP檢測(cè)分析

張敬敬，張海英，潘秀清，許 勇，任 毅，高秀瑞，李 冰，史宇凡，黨繼革，楊明珠，武彥榮

(1.河北省農(nóng)林科學(xué)院 經(jīng)濟(jì)作物研究所，河北 石家莊 050051；2.北京市農(nóng)林科學(xué)院 蔬菜研究中心，北京 100097；3.河北雙星種業(yè)股份有限公司，河北 石家莊 050061)

中國(guó)是世界上最大的西瓜種植國(guó)和消費(fèi)國(guó)，每年的西瓜產(chǎn)量約7×103萬(wàn)t[1]，河北省西瓜種植面積基本維持在6.67萬(wàn)hm2，居全國(guó)第5位[2]。由于西瓜經(jīng)濟(jì)效益高，生產(chǎn)區(qū)連年種植，連作障礙日益嚴(yán)重，造成西瓜枯萎病、炭疽病和白粉病等病害多發(fā)和重發(fā)，顯著降低了西瓜產(chǎn)量和品質(zhì)，因此，選育優(yōu)質(zhì)單抗或多抗西瓜品種仍是河北省的重要目標(biāo)。

由于常規(guī)育種具有操作簡(jiǎn)單、選擇性狀綜合全面等優(yōu)勢(shì)，目前仍是育種的主要方法，但常規(guī)育種易受環(huán)境和育種者的經(jīng)驗(yàn)影響，存在育種周期長(zhǎng)、效率低等缺點(diǎn)[3]，尤其是田間抗病鑒定復(fù)雜，而多抗鑒定更難。近年來(lái)，隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，由LGC公司研發(fā)的競(jìng)爭(zhēng)性等位基因特異性PCR技術(shù)即KASP技術(shù)具有高度穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性和高效性，逐漸被用于重要功能基因的SNPs和InDels檢測(cè)和重要性狀標(biāo)記[4-8]，采用高通量分型KASP標(biāo)記技術(shù)可同時(shí)鑒定多種病害，可加快西瓜抗病性育種步伐。

本試驗(yàn)針對(duì)河北省西瓜枯萎病、白粉病和炭疽病等病害發(fā)生嚴(yán)重，生產(chǎn)中抗病西瓜品種缺乏等突出問(wèn)題，利用許勇團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)的西瓜抗枯萎病、抗炭疽病和抗白粉病分子標(biāo)記，對(duì)河北省130份西瓜品種和資源進(jìn)行抗病性狀功能基因的KASP標(biāo)記檢測(cè)，為準(zhǔn)確評(píng)價(jià)西瓜品種和資源提供參考，以進(jìn)一步提高河北省西瓜育種效率。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

以河北省近年來(lái)審(鑒)定西瓜品種和優(yōu)勢(shì)組合(星研七號(hào)、美佳、美勝、貴妃、17-11等)以及優(yōu)異種質(zhì)資源共130份為試驗(yàn)材料(表1)，以3抗302為抗病基因分子檢測(cè)的抗病對(duì)照，以GBZG為感病基因分子檢測(cè)的感病對(duì)照。

1.2 DNA的提取及檢測(cè)

取西瓜種芽放入加有鋼珠的2 mL離心管中，每個(gè)材料3次重復(fù)，采用CTAB法提取DNA(向樣品中加入100 μL CTAB，用組織打碎儀將種芽打碎后用離心機(jī)離心1 min(1 000 r/min)，加入400 μL CTAB后65 ℃水浴加熱30 min，加入三氯甲烷+異戊醇(24∶1)400 μL，4 ℃放置5 min，離心10 min(2 500 r/min)后取其上清液加入400 μL異丙醇，放入-20 ℃冰箱至少30 min，從冰箱取出后離心10 min(2 500 r/min)，將上清液倒出，向沉淀物中加入70%酒精100 μL，離心5 min(2 500 r/min)，倒出上清液，將沉淀物放入通風(fēng)櫥風(fēng)干，加入50 μL ddH2O，放入-20 ℃冰箱備用)，使用Thermo 公司生產(chǎn)的超微量分光光度計(jì)檢測(cè)DNA濃度。

1.3 KASP標(biāo)記檢測(cè)

根據(jù)許勇團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)的西瓜抗枯萎病、抗炭疽病、抗白粉病分子標(biāo)記序列和上海生工生物工程(上海)股份有限公司合成的抗枯萎病、抗炭疽病、抗白粉病基因的KASP標(biāo)記引物，使用LGC公司生產(chǎn)的KASP 平臺(tái)檢測(cè)。PCR反應(yīng)體系為7.32 μL，包括1.5 μL DNA(2～10 ng/μL)，4.32 μL Master Mix，1.5 μL KASP Assay Mix。PCR反應(yīng)程序：94 ℃預(yù)變性15 min；94 ℃ 20 s，61 ℃ 1 min，10個(gè)循環(huán)；94 ℃ 20 s，55 ℃ 1 min，26個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后熒光掃描，并進(jìn)行基因分型分析。

1.4 西瓜苗期接種枯萎病、炭疽病、白粉病病菌試驗(yàn)

西瓜枯萎病病菌生理小種、炭疽病病菌生理小種、白粉病病菌生理小種由北京市蔬菜工程中心許勇團(tuán)隊(duì)惠贈(zèng)，試驗(yàn)于2018年10月在河北省農(nóng)林科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所智能溫室中進(jìn)行。

將130份試驗(yàn)材料和抗病對(duì)照、感病對(duì)照于55 ℃溫湯浸種6 h后放置30 ℃恒溫箱中培養(yǎng)24 h，取出發(fā)芽整齊的種子播種至已滅菌的育苗基質(zhì)中，覆蛭石澆水蓋膜保濕。

浸根接種枯萎病病菌：每份西瓜材料子葉展平期選取生長(zhǎng)一致的幼苗30株，用清水洗凈根系，在濃度為106個(gè)/mL分生孢子懸浮液中浸根15 min，接種后將瓜苗移栽至滅菌的基質(zhì)中，放在28 ℃環(huán)境中生長(zhǎng)，3 d后調(diào)查枯萎病發(fā)病情況。西瓜枯萎病抗性標(biāo)準(zhǔn)、等級(jí)劃分和病情指數(shù)計(jì)算參照姬萬(wàn)麗等[9]試驗(yàn)方法。

噴霧法接種炭疽病病菌：西瓜幼苗長(zhǎng)至2片真葉時(shí)，采用噴霧法于傍晚將濃度為106個(gè)/mL分生孢子懸浮液接種至西瓜葉片，每份材料接種30株，接種7 d后調(diào)查發(fā)病情況。參照崔召明等[10]方法的抗性標(biāo)準(zhǔn)、等級(jí)劃分和病情指數(shù)進(jìn)行劃分和計(jì)算。

噴霧法接種白粉病病菌：于子葉展平期接種，用噴霧器將孢子懸浮液噴到葉片表面，每份西瓜材料接種30株。接種后保持溫度28 ℃/20 ℃(日/夜)，相對(duì)濕度約70%，接種12～15 d充分發(fā)病后，參照徐向麗等[11]方法計(jì)算病情指數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 西瓜種芽DNA質(zhì)量濃度的檢測(cè)結(jié)果

使用Thermo公司生產(chǎn)的超微量分光光度計(jì)檢測(cè)提取好的西瓜種芽DNA濃度，用ddH2O稀釋使DNA質(zhì)量濃度在2～10 ng/μL。

2.2 西瓜抗枯萎病、炭疽病、白粉病的KASP檢測(cè)結(jié)果和苗期接種結(jié)果

本研究根據(jù)許勇團(tuán)隊(duì)提供的西瓜抗病分子標(biāo)記，利用高通量KASP對(duì)河北省130份西瓜參試材料進(jìn)行了抗枯萎病、抗炭疽病和抗白粉病性狀基因的KASP檢測(cè)，為驗(yàn)證KASP引物的特異性及準(zhǔn)確性，選取抗病材料3抗302和感病材料GBZG，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可知，KASP標(biāo)記檢測(cè)技術(shù)可以清晰地把上述抗病的2種基因型分開(kāi)，三角形為抗病的純合型材料，五角星為感病的純合型材料，正方形為攜帶等位變異的雜合型材料，圓形為未檢出。

本試驗(yàn)共檢測(cè)了3個(gè)抗病基因，包括抗枯萎病基因(Fon-1)、抗炭疽病基因(AR1)、抗白粉病基因(PM1)。結(jié)果顯示，F(xiàn)on-1在供試材料中所占比例最大，有33份，占供試材料的25.38%，AR1在供試材料中有19份，占比14.62%，PM1在供試材料中有7份，占比5.38%，F(xiàn)on-1和AR1同時(shí)在供試材料中有5份，AR1和PM1同時(shí)在供試材料中有1份，3種抗病基因同時(shí)在供試材料中有1份(表1、圖2)。

苗期接種試驗(yàn)結(jié)果表明，130份供試材料抗枯萎病材料33份，其中中抗材料17份包括美勝、花早綠、貴妃等，輕抗材料16份包括0405-3、S67-M、S68-M等；抗炭疽病材料19份，中抗材料13份包括星研七號(hào)、雙星37、S67-M等，輕抗材料6份包括S64-M、SJL、力母等；抗白粉材料7份包括美佳、S66、901新等，中間類(lèi)型材料23份包括ZH、S68-M、NDL等，苗期鑒定結(jié)果與KASP檢測(cè)結(jié)果相一致，均可為西瓜抗病育種提供參考。

根據(jù)KASP對(duì)西瓜抗病性狀基因的檢測(cè)結(jié)果，比對(duì)供試西瓜材料田間表現(xiàn)，抗枯萎病如貴妃、美勝、三白西瓜、花早綠、0412、0419等材料，此類(lèi)型材料多晚熟，田間表現(xiàn)出生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，后期不衰秧，西瓜品質(zhì)中等偏上的特點(diǎn)；抗炭疽病如星研七號(hào)、雙星37、JB-1、LGZ、力母、力父等材料，此類(lèi)型多晚熟，生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，瓜的類(lèi)型較多，品質(zhì)中等偏上，四倍體材料多屬于這類(lèi)；抗白粉病如美佳、901細(xì)花紅、901新、S66等材料，此類(lèi)型與小果型西瓜有血緣關(guān)系的居多，具體表現(xiàn)生長(zhǎng)勢(shì)中等，分枝性中等，果實(shí)品質(zhì)較好；同時(shí)抗枯萎病和抗炭疽病2種病害材料包括F35板葉、S64-M、S67-M、0405-3、0406，此類(lèi)型為中果型瓜，熟性較晚，生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，不衰秧；同時(shí)抗炭疽病和抗白粉病2種病害材料LGZ，該材料為小果型瓜、長(zhǎng)勢(shì)中庸、分枝性中等、葉片稀疏、較小、品質(zhì)好；同時(shí)抗枯萎病、抗炭疽病和抗白粉病材料3種病害材料JB-3，田間表現(xiàn)為生長(zhǎng)勢(shì)較強(qiáng)，不衰秧，單瓜質(zhì)量3～4 kg，淺黃底色上有深黃色花條、圓瓜、紅瓤、質(zhì)地沙，中心和邊緣可溶性固形物含量分別為10.5%和7.8%。上述材料在西瓜抗性育種中具有較大應(yīng)用潛力，尤其是同時(shí)抗上述3種病害材料JB-3，可進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)該材料的利用。

三角形.純合型基因抗?。晃褰切?純合型基因感??；正方形.雜合型基因；圓形.未檢出；A.枯萎病基因的KASP標(biāo)記；B.炭疽病基因的KASP標(biāo)記；C.白粉病基因的KASP標(biāo)記。Triangle.Homozygous resistance gene； Pentagram.Homozygous susceptible gene； Square.Hoterozygous gene； Roundness.Not detected; A.KASP marker of Fusarium wilt gene； B.KASP marker of anthracnose gene; C.KASP marker of powdery mildew gene.

材料名稱(chēng)Materialsname枯萎病Fusarium Wilt白粉病Powdery mildew炭疽病AnthracnoseKASP檢測(cè)苗期接種KASP檢測(cè)苗期接種KASP檢測(cè)苗期接種材料名稱(chēng)Materialsname枯萎病Fusarium Wilt白粉病Powdery mildew炭疽病AnthracnoseKASP檢測(cè)苗期接種KASP檢測(cè)苗期接種KASP檢測(cè)苗期接種3抗302 3 kang 302R15.1HRR34.2RR6.2HR0414-1-1S90.2SS76.6SS68.3SGBZGS94.7SS79.7SS67.1S豐抗 FengkangS94.6SS77.5SR23.4MRS56-1S84.3SS78.3SR22.4MR0405-3R52.7LRS67.9SR20.9MRS57-1H80.5SS70.2SS60.8S美勝 MeishengR39.6MRS63.7SS64.3SS63-MH83.7SS86.5SS63.5S0423-1R41.7MRS73.2SS69.9SS64-MR52.1LRS83.4SR39.7LR西農(nóng)橢 XinongtuoR44.7MRS70.0SS66.1S美佳 MeijiaS86.3SR21.1RS62.8SF35板葉 F35 banyeR38.9MRS67.6SR26.9MRS66S85.4SR30.4RS65.1S黃肉 HuangrouS92.4SS70.6SS76.5SS67-MR61.8LRS80.9SR24.2MRJB-1S95.5SH46.0MR22.7MRS68-MR67.4LRH56.0MS64.3SJB-3R40.1MRR26.8RR20.1MRS69-MR58.2LRS79.4SS61.9S雙星37 Shuangxing 37S86.1SS65.5SR18.9MRS70-MS90.8SS80.4SR20.8MRSJLR62.3LRS80.9SR39.2LRS71-MS95.2SS88.2SR18.6MRBLJM-1R53.3LRN49.2MS85.4SS72-MR60.6LRS71.9SS67.6SXC-1S96.1SS68.9SS88.9SS73-MS90.2SH48.1MH57.9S富士 FushiS90.3SS73.1SS90.0SS74-MS88.9SH53.3MN59.1SLXMN83.4SN43.7MN56.8SS80-MS96.1SN56.7MN58.5S(901)6-1-MN81.6SN56.6MN57.4SS85S95.7SS66.9SR25.3MRLDS95.3SS70.2SS90.1SS75R56.8LRS63.5SS60.9S花早F2-4 Huazao F2-4S94.4SS63.7SS63.3S秀麗F2-1-2 Xiuli F2-1-2S93.7SS67.1SS62.8SLYLR66.1LRS66.4SS70.6S全霜99F2-1-1Quanshuang 99F2-1-1S97.1SS72.4SS70.9S日引1-3-1-3Riyin 1-3-1-3R39.5MRS63.9SS65.6SBSH-1-1-1-2S88.9SS80.9SH59.7S花早綠 HuazaolüR38.4MRS61.5SS60.2S901新901xinS85.0SR20.5RS72.5S三白西瓜Three white watermelonR37.7MRS65.9SS64.3S日引1-3-1-2Riyin 1-3-1-2R39.7MRS72.3SS71.8SKB1MR65.6LRS74.6SS86.7SS84-1-MS96.8SH56.7MS77.3SKB2MR61.1LRS72.3SS88.7SS65S95.7SH49.6MS70.4SKBFS89.7SN57.9MS84.3貴妃 GuifeiR37.5MRS80.3SS75.1STZ6R51.7LRS68.8SS86.5S43451S88.7SH57.3MS72.3S農(nóng)大S7 Nongda S7N82.5SN55.1MN59.1S903R42.5MRS76.6SS74.6S西農(nóng)F1-2-MR40.6MRN56.3MS56.7S Xinong F1-2-M早系1-1 Zaoxi 1-1S90.4SS82.1SS68.4S0402N83.1SH47.7MH60.7SNDLR56.9LRH45.5MS59.8S0403R40.9MRS74.9SS79.6S88-2-2-5S93.4SR23.9RS67.5S星研七號(hào) Xingyan No.7S88.8SS83.1SR22.6MR花早 HuazaoS90.6SH46.1MS65.9S0408S93.4SS80.2SR36.4LRXC2-1S89.1SN49.9MN59.9S901細(xì)花紅 901 xihuahongS90.5SR33.4RS60.3SZY10S85.4SS86.3SH56.6S0410R46.1MRS61.8SS75.4SZHN85.2SH54.2MN60.1S0412R44.4MRH56.6MS72.5SW89S96.9SH53.8MR35.6LR0415S93.7SS70.7SH60.4S力母 LimuS92.1SS82.5SR35.1LR0419R46.7MRS71.9SS70.0S力父 LifuS92.4SS73.3SR32.7MR0420S95.6SS73.2SS69.8SLGZS95.7SR36.6RR40.5LR0422S94.9SS66.6SS73.6S0418-3-1S97.6SS64.9SN58.3S0424R65.3LRS68.4SS68.4SCXF-2-5S94.4SS69.9SS70.3S0425S94.5SS69.1SS72.1S小天使 XiaotianshiS90.2SS75.5SH60.8S齊抗 QikangR42.8MRS76.0SS63.8S

注：R.抗?。籗.感?。籋.雜合位點(diǎn)抗??；N.未檢測(cè)出；HR.高抗；MR.中抗；LR.輕抗；M.中間類(lèi)型。

Note： R.Resistant; S.Susceptible; H.Resistant at heterozygous sites; N.Not detected; HR.High resistant; MR.Middle resistant; LR.Light resistant; M.Middle style.

圖2 西瓜抗病占比Fig.2 Disease resistance rate of watermelon

2.3 以KASP檢測(cè)結(jié)果為基礎(chǔ)的聚類(lèi)分析

以抗枯萎病、抗炭疽病、抗白粉病KASP檢測(cè)結(jié)果顯示抗病、感病、雜合抗性和無(wú)檢測(cè)信號(hào)4種結(jié)果為依據(jù)，將130份西瓜材料與抗病對(duì)照、感病對(duì)照分為4大類(lèi)群(圖3)。第1類(lèi)有12份材料，為不抗白粉病材料，其中7份為感枯萎病材料，5份為抗枯萎病且感炭疽病材料；第2類(lèi)有67份材料，為抗白粉病或同時(shí)感2種病害材料，其中7份材料抗白粉病，60份為同時(shí)感2種病害材料；第3類(lèi)有38份材料，為枯萎病、炭疽病單抗或多抗材料，其中11份為單抗炭疽病材料，5份為同時(shí)抗炭疽病、抗白粉病材料，22份為單抗枯萎病材料；第4類(lèi)有13份材料，在抗枯萎病、抗炭疽病或抗白粉病基因方面均無(wú)檢測(cè)信號(hào)或雜合抗性，其中2份為感枯萎病且在抗白粉病和抗炭疽病基因處無(wú)檢測(cè)信號(hào)，6份為感枯萎病且在抗白粉病或抗炭疽病基因處無(wú)檢測(cè)信號(hào)或雜合抗性，5份為抗枯萎病、抗白粉病和抗炭疽病基因處均無(wú)純合基因檢出。

3 結(jié)論與討論

3.1 抗病性檢測(cè)分析及高通量分子檢測(cè)應(yīng)用

植物分子抗病性檢測(cè)方法被廣泛應(yīng)用，如西瓜枯萎病檢測(cè)方法中曹月霞等[12]建立了雙重PCR檢測(cè)體系，通過(guò)設(shè)計(jì)和應(yīng)用引物Fon-2R/Fon-2F、Fon-3R/Fon-3F、Fon-4R/Fon-4F和Fon-6R/Fon-6F，采用電泳方法能檢測(cè)出西瓜枯萎病菌。西瓜炭疽病檢測(cè)中唐建輝等[13]利用2對(duì)引物CY1/CY2和SCAR 引物RB/RC組成雙重 PCR 檢測(cè)體系，并且能夠直接在植物組織中將西瓜炭疽菌 (C.orbiculare) 檢測(cè)出來(lái)。劉易科等[14]選用52個(gè)小麥抗赤霉病、條銹病、白粉病和紋枯病的基因(QTL)的功能標(biāo)記或連鎖標(biāo)記對(duì)其進(jìn)行分子鑒定和分析。本試驗(yàn)利用許勇團(tuán)隊(duì)研究的西瓜抗枯萎病[15]、抗炭疽病、抗白粉病[16]分子標(biāo)記和KASP分型標(biāo)記對(duì)130份西瓜材料進(jìn)行抗病性分型檢測(cè)，KASP標(biāo)記具有快速、高效的特點(diǎn)。

圖3 西瓜KASP結(jié)果聚類(lèi)分析Fig.3 Analysis diagram of watermelon KASP results

徐平麗等[17]利用TaqMan 探針標(biāo)記與 KASP 分子標(biāo)記鑒別花生后代籽粒AhFAD2B基因的基因型，進(jìn)而選育高油酸花生品種，大大減少了田間選擇的工作量，提高了回交選育高油酸花生的效率；趙勇等[5]采用測(cè)序法、酶切擴(kuò)增多態(tài)性序列法(CAPS)和競(jìng)爭(zhēng)性等位基因特異性 PCR (KASP)法對(duì)大豆Dt1基因的4個(gè) SNP 進(jìn)行分型，結(jié)果表明，KASP 法準(zhǔn)確率達(dá)94.3%，同時(shí)KASP具有快速、高效的特點(diǎn)；楊子博等[6]為了解江蘇淮北地區(qū)小麥品種資源的籽粒硬度概況及硬度基因型分布規(guī)律，以74份近年來(lái)江蘇淮北地區(qū)所育品種(系)和38份來(lái)自黃淮其他麥區(qū)的常用親本為材料，采用單籽粒谷物硬度測(cè)試儀、KASP標(biāo)記檢測(cè)技術(shù)和基因擴(kuò)增及測(cè)序技術(shù)對(duì)其SKCS硬度值及硬度基因型進(jìn)行鑒定。張宏軍等[18]利用小麥抗赤霉病Fhb1基因的 KASP 標(biāo)記在回交后代中進(jìn)行基因型分析，分別選擇攜帶和不攜帶Fhb1基因的可育株, 對(duì)后代株系進(jìn)行單花滴注接種鑒定和田間病圃自然鑒定，利用Fhb1基因分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)能夠有效地提高黃淮冬麥區(qū)小麥品種的赤霉病抗性水平。Awais Rasheed[19]開(kāi)發(fā)并鑒定了一批與普通小麥適應(yīng)性、產(chǎn)量、品質(zhì)、生物和非生物脅迫抗性相關(guān)的KASP標(biāo)記，研究表明，KASP標(biāo)記的檢測(cè)效率是基于凝膠的傳統(tǒng)PCR標(biāo)記的45倍。目前，KASP標(biāo)記已發(fā)展為一種單基因高通量基因型檢測(cè)技術(shù)，本試驗(yàn)利用西瓜抗枯萎病基因Fon-1、抗炭疽病基因AR1、抗白粉病基因PM1的KASP標(biāo)記，對(duì)130份材料進(jìn)行基因型分析，分為純合位點(diǎn)抗病、雜合位點(diǎn)抗病、純合位點(diǎn)感病和未檢出，與室內(nèi)接種結(jié)果相一致，該方法可作為高通量SNP標(biāo)記的補(bǔ)充，有效促進(jìn)雜交親本和高代品系的鑒定，提高西瓜育種效率。

3.2 聚類(lèi)分析及以KASP為基礎(chǔ)的聚類(lèi)分析應(yīng)用

聚類(lèi)分析方法在作物育種中應(yīng)用廣泛。金鳳媚等[20]通過(guò)測(cè)定番茄品質(zhì)特性的遺傳多樣性和分子標(biāo)記的多態(tài)性，對(duì)番茄品種資源進(jìn)行了聚類(lèi)分析，聚類(lèi)分析是鑒別品種資源遺傳差異程度、篩選核心資源的有效手段。劉亞利等[21]以5個(gè)玉米自交系為測(cè)驗(yàn)種，按NCⅡ遺傳交配設(shè)計(jì)配制55個(gè)測(cè)交組合，進(jìn)行產(chǎn)量配合力效應(yīng)及聚類(lèi)分析。根據(jù)產(chǎn)量SCA進(jìn)行聚類(lèi)分析，可將16個(gè)自交系分為5類(lèi)。楊志剛等[22]以92份辣椒資源為材料，分別對(duì)辣椒色價(jià)值和辣椒單果質(zhì)量、果肉厚、果實(shí)縱橫徑進(jìn)行聚類(lèi)分析，從中篩選干制紅辣椒的優(yōu)良種質(zhì)材料。前人采用聚類(lèi)分析法對(duì)番茄[20]、辣椒[22]、玉米[21]等作物進(jìn)行分類(lèi)，本試驗(yàn)基于西瓜抗枯萎病、炭疽病和白粉病的KASP檢測(cè)結(jié)果，采用Ward離差平方和法對(duì)西瓜進(jìn)行抗病性差異聚類(lèi)分析，把130份材料分為4類(lèi)，第1類(lèi)有12份材料，為不抗白粉病材料；第2類(lèi)有67份材料，為抗白粉病或同時(shí)感2種病害材料；第3類(lèi)有38份材料，為枯萎病或炭疽病單抗或多抗材料；第4類(lèi)有13份材料，為不抗枯萎病、炭疽病和白粉病材料。利用KASP分子標(biāo)記進(jìn)行聚類(lèi)分析，分類(lèi)結(jié)果更加科學(xué)可靠, 對(duì)于鑒別種質(zhì)資源具有指導(dǎo)意義。

3.3 KASP檢測(cè)結(jié)果應(yīng)用

高通量分型KASP標(biāo)記檢測(cè)西瓜抗病性與苗期抗病鑒定結(jié)果一致，該技術(shù)具有高速高效準(zhǔn)確特點(diǎn)，未來(lái)可利用該技術(shù)加快育種進(jìn)程。利用KASP分子標(biāo)記篩選出的同時(shí)抗3種病害的材料JB-3，田間表現(xiàn)生長(zhǎng)勢(shì)較強(qiáng)，不衰秧，單瓜質(zhì)量3～4 kg，中心和邊緣可溶性固形物含量分別為10.5%和7.8%。該材料在果實(shí)品質(zhì)、耐低溫弱光方面表現(xiàn)不理想，但由于JB-3可同時(shí)抗枯萎病、抗炭疽病和抗白粉病，未來(lái)可通過(guò)回交轉(zhuǎn)育、定向選育方法培育出優(yōu)質(zhì)多抗西瓜新品種。