低情緒對(duì)雌性大鼠血清性激素作用及與多囊卵巢綜合征的關(guān)系探討

李鴻奎，姬丙哲，張祖源，陳 靜，李丙楠，馬金鑫，段麗娜，丁 玉

(黃河科技學(xué)院 醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州 450000)

多囊卵巢綜合征[1](Polycystic ovarian syndrome,PCOS)，是育齡婦女常見(jiàn)的一種內(nèi)分泌疾病，在1935年由Stein和Leventhal首次報(bào)道，近年來(lái)其患者的心理問(wèn)題受到一些學(xué)者的關(guān)注，而從精神、心理學(xué)在解剖、遺傳和內(nèi)分泌等方面的研究進(jìn)展，特別是從應(yīng)激所引起的內(nèi)分泌變化方面的研究來(lái)看，精神、心理因素與之有廣泛的聯(lián)系，有可能是多囊卵巢綜合征的誘因之一，并可能是引起其遠(yuǎn)期并發(fā)癥的重要因素。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)大鼠進(jìn)行情志刺激，觀察大鼠血清性激素的改變，進(jìn)而探討情志刺激對(duì)多囊卵巢綜合征的影響具有臨床意義。

結(jié)果匯報(bào)如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物

選用SPF級(jí)6～8周齡雌性大鼠45只，體重(200±20) g,由河南省鄭州市中原區(qū)玉飛種兔公司提供。飼養(yǎng)于黃河科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)樓，三樓動(dòng)物飼養(yǎng)房，采用IVC鼠籠喂養(yǎng)，投喂標(biāo)準(zhǔn)飼料，光照10 h/d，溫度20～23 ℃，相對(duì)濕度45%～65%。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)藥物與試劑

50%葡萄糖注射液(湖北科倫藥業(yè)有限公司，產(chǎn)品批號(hào)：C180902XA)、水合氯醛[2](上海展云化工有限公司，批號(hào)：180923)

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備

三諾安穩(wěn)免調(diào)碼血糖儀(產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)：YZB/湘0043-2012，版本號(hào)：QY-PY-VPU)、三諾安穩(wěn)免調(diào)碼血糖試條(批號(hào)820625)、三諾一次性使用末梢采血針(生產(chǎn)批號(hào)：180908)、電子天平(批號(hào)：XJ320M,上海精科天美科學(xué)儀器有限公司)、顯微鏡(奧林巴斯CX22無(wú)窮遠(yuǎn)生物顯微鏡，日本)、一次性使用負(fù)壓采血容器(山東省成武縣醫(yī)用制品廠，生產(chǎn)批號(hào)：20181102)、羅氏Cobas e601型全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(試劑批號(hào)：304760、315724、315772、329429)、羅氏Cobas e602型全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(試劑批號(hào)：295188、304760、315772、329429)。

2 方法

2.1 具體動(dòng)物分組及造模方法

2.1.1 動(dòng)物分組

進(jìn)行open-field[3]法行為學(xué)評(píng)分后，45只雌性大鼠隨機(jī)分為正常健康組15只、輕度抑郁組15只、重度抑郁組15只。

2.1.2 造模方法[4]

不良刺激包括：禁食(除去鼠籠飼料，24 h)、禁水(除去鼠籠存水，24 h)、濕籠(向鼠籠中均勻?yàn)⑺?00 mL，早7點(diǎn)至晚19點(diǎn)，共12 h，晚上更換墊料)，斜籠(鼠籠靠墻傾斜放置，24 h)、水平搖晃(不斷劇烈水平搖晃鼠籠，每日早、中、晚，共3次，每次5 min)、敲打鼠籠(用木棒不斷敲打鼠籠，每日早、中、晚，共3次，每次5 min)、日照直射(放置于日光直射處，12 h)。正常健康組，每日進(jìn)行正常飼喂，保證飲水、飼料充足，鼠籠干燥，無(wú)不良刺激。輕度抑郁組，每日進(jìn)行一項(xiàng)不良刺激，每種刺激不連續(xù)使用，且根據(jù)每日刺激要求，進(jìn)行飼喂大鼠。重度抑郁組，每日同時(shí)進(jìn)行兩項(xiàng)不良刺激，每種刺激不連續(xù)使用，且根據(jù)每日刺激要求，進(jìn)行飼喂大鼠。連續(xù)30 d。造模結(jié)束后，在正常組、輕度組、重度組中，分別隨機(jī)選取12只，進(jìn)行陰道脫落物涂片及口服糖耐量實(shí)驗(yàn)(OGTT)，于大鼠動(dòng)情間期，將其麻醉，腹主動(dòng)脈取血后，稱(chēng)量子宮及附件凈重，并將大鼠處死。

2.2 觀察內(nèi)容及方法

2.2.1 口服糖耐量試驗(yàn)(OGTT)

大鼠禁食不禁水12 h，以3 g/kg劑量灌服50%葡萄糖溶液，用血糖儀測(cè)定大鼠灌胃后0、30、60、120 min時(shí)血糖值，計(jì)算葡萄糖曲線下面積(AUC)，公式為AUC=A/2+B+C+D/2(A為空腹值，B為30 min值，C為60 min值，D為120 min值)。

2.2.2 計(jì)算穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)[5](IR)、胰島素敏感指數(shù)(ISI)

IR=空腹血糖(mmol/L)×空腹胰島素(mIU/L)/22.5；

ISI=1/(空腹血糖×空腹胰島素)。

2.2.3 動(dòng)情周期

連續(xù)2個(gè)周期大鼠陰道脫落物細(xì)胞涂片，HE染色觀察大鼠動(dòng)情周期。

2.2.4 計(jì)算BMI值

分別用電子體重測(cè)量?jī)x測(cè)量體重，用皮尺測(cè)量大鼠鼻至肛門(mén)直線距離，并計(jì)算BMI值。BMI=體重(kg)/身長(zhǎng)2(m)

2.2.5 稱(chēng)量子宮及附件凈重

腹主動(dòng)脈取血后，解剖大鼠子宮及附件，觀察期形態(tài)是否存在異常，并且使用電子體重測(cè)量?jī)x測(cè)量子宮及附件凈重。

2.2.6 大鼠血清胰島素(INS)、卵泡刺激素(FSH)、促黃體生成素(LH)、睪酮(T)水平

待測(cè)血清，用ELISA法檢測(cè)其INS、FSH、LH、T水平，具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果與分析

3.1 低情緒大鼠對(duì)于空腹血糖值(GLU)及葡萄糖曲線下面積(AUC)的影響

與健康組相比，輕度抑郁組GLU及AUC(P>0.05)無(wú)明顯差異，重度抑郁組的GLU及AUC增加顯著(P﹤0.01)具有顯著差異。與輕度抑郁組相比，重度抑郁組的GLU及AUC增加顯著(P﹤0.01)具有顯著差異，見(jiàn)表1、圖1。

表1 低情緒大鼠對(duì)于空腹血糖值(GLU)及葡萄糖曲線下面積(AUC)的影響

注:與健康組相比，△△P﹤0.01、△△△P>0.05；與模型組比較，##P﹤0.01。

圖1 三組大鼠葡萄糖曲線下面積(AUC)比較折線圖

3.2 低情緒大鼠對(duì)于穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(IR)、胰島素敏感指數(shù)(ISI)的影響

與健康組相比，輕度抑郁組IR有明顯增加(P﹤0.01)具有顯著差異，ISI有明顯減少(P﹤0.01)具有顯著差異，重度抑郁組的IR有明顯增加(P﹤0.01)具有顯著差異，ISI有明顯減少(P﹤0.01)具有顯著差異。與輕度抑郁組相比，重度抑郁組IR有明顯增加(P﹤0.01)具有顯著差異，ISI有明顯減少(P﹤0.01)具有顯著差異，見(jiàn)表2、圖2。

表2 低情緒大鼠對(duì)于穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(IR)、胰島素敏感指數(shù)(ISI)的影響

注:與健康組相比，△△P﹤0.01；與模型組比較，##P﹤0.01。

圖2 三組大鼠胰島素抵抗指數(shù)(IR)比較折線圖

3.3 低情緒大鼠對(duì)于其體重、BMI值及卵巢質(zhì)量的影響

與健康組相比，輕度抑郁組大鼠體重和BMI(P>0.05)無(wú)明顯差異，卵巢重量有明顯上升(P﹤0.05)具有顯著差異，重度抑郁組大鼠體重和BMI(P>0.05)無(wú)明顯差異，卵巢質(zhì)量有顯著上升(P﹤0.01)具有顯著差異。與輕度抑郁組相比，重度抑郁組大鼠體重和BMI(P>0.05)無(wú)明顯差異，卵巢質(zhì)量有明顯上升(P﹤0.01)具有顯著差異，見(jiàn)表3。

表3 低情緒大鼠對(duì)于其體重、BMI值及卵巢質(zhì)量的影響

注:與健康組比較，△P﹤0.05、△△P﹤0.01、△△△P>0.05；與輕度組比較，##P﹤0.01、###P>0.05。

3.4 低情緒大鼠對(duì)于INS、FSH、LH、T水平的影響

與健康組相比，輕度抑郁組INS、LH、T有明顯增加(P﹤0.01)具有顯著差異，F(xiàn)SH(P>0.05)不具有顯著差異，重度抑郁組INS、LH、T、FSH有明顯增加(P﹤0.01)具有顯著差異。與輕度抑郁組相比，重度抑郁組T具有明顯增高(P﹤0.05)，INS、LH、FSH有顯著增高(P﹤0.01)具有顯著差異，見(jiàn)表4、圖3、4。

表4 低情緒大鼠對(duì)于INS、FSH、LH、T水平的影響

注:與健康組比較，△△P﹤0.01、△△△P>0.05；與輕度組比較，#P﹤0.05，##P﹤0.01。

圖3 三組大鼠FSH、LH、T比較柱狀圖

圖4 三組大鼠血清胰島素(INS)比較折線圖

4 討論

多囊卵巢綜合征(PCOS)是婦科臨床常見(jiàn)的生殖功能障礙性疾病，主要臨床表現(xiàn)是月經(jīng)后期、閉經(jīng)、不孕、卵巢內(nèi)卵泡增多及卵巢增大等生殖功能障礙和肥胖、多毛、黑棘皮、瘦瘡等代謝異常癥狀。現(xiàn)代研究明確，PCOS患者垂體分泌的LH(促黃體生成素)水平、LH(促黃體生成素)水平升高，卵母細(xì)胞被LH誘導(dǎo)，過(guò)早成熟導(dǎo)致其受精能力下降及著床困難，最終導(dǎo)致PCOS患者不孕和流產(chǎn)。PCOS患者體內(nèi)分泌雄激素升高，造成高雄激素血癥[6]，這會(huì)使得卵泡成熟停滯及閉鎖。與此同時(shí)，閉鎖的卵泡導(dǎo)致顆粒細(xì)胞快速調(diào)亡，被成纖維細(xì)跑和卵泡膜細(xì)胞替代，卵巢的間質(zhì)增厚且細(xì)胞在LH的作用下又合成雄激素，形成高度惡性循環(huán)。此外，體內(nèi)的雌激素過(guò)多是PCOS患者的另一重要病理特征。過(guò)量的雄激素抑制了卵泡的發(fā)育，雄激素在芳香化酶的催化作用下還可以轉(zhuǎn)變成雌激素。雌激素的含量的上升直接反饋于下丘腦及垂體，使患者FSH分泌減少和LH分泌増多，患者卵泡成熟障礙及排卵阻礙形成多囊卵巢。PCOS病理生理復(fù)雜，長(zhǎng)期以來(lái)被公認(rèn)為是一個(gè)異質(zhì)性綜合征，遠(yuǎn)期來(lái)看還增加了患者的也血管疾病、子宮內(nèi)膜癌等疾病的發(fā)生率。此外，胰島素抵抗和高胰島素血癥提升了PCOS患者非胰島素依賴(lài)性糖尿病的患病風(fēng)險(xiǎn)。

PCOS的發(fā)病機(jī)制十分的復(fù)雜，目前對(duì)精神也理因素的探究受到越來(lái)越多的國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為情志關(guān)系與PCOS的發(fā)病關(guān)系非常密切，其原因?yàn)榕缘纳硟?nèi)分泌系統(tǒng)受到下丘腦-垂體-卵巢軸的拉制與調(diào)節(jié)。其中的下丘腦不但調(diào)節(jié)著人體內(nèi)分泌中樞，還調(diào)控著人體的情感中樞和情緒中樞。情緒和情感的變化在這個(gè)時(shí)候反作用于下丘腦。PCOS患者抑郁狀態(tài)還可能與炎性因子有關(guān)，但需進(jìn)一步研究其機(jī)制。有研究表明，生活壓力大和低學(xué)歷水平，長(zhǎng)期的焦慮和抑郁、和不同的工作性質(zhì)是引發(fā)PCOS的危險(xiǎn)因素。

本課題，目的在于探索通過(guò)對(duì)大鼠進(jìn)行情志刺激，觀察大鼠血清性激素的改變，進(jìn)而探討情志刺激對(duì)多囊卵巢綜合征的影響，初步研究情志刺激對(duì)大鼠性激素的影響作用，重點(diǎn)對(duì)受刺激大鼠血清雄激素、卵泡雌激素、黃體生成素與多囊卵巢的關(guān)系進(jìn)行分析。

本實(shí)驗(yàn)中，在大鼠抑郁模型造模結(jié)束后，進(jìn)行腹主動(dòng)脈采血的過(guò)程操作時(shí)，剖開(kāi)腹部后，可明顯見(jiàn)到子宮整體充血脹大，重度抑郁組尤甚，采血后稱(chēng)量卵巢重量，重度抑郁組也明顯高于其他兩組。經(jīng)過(guò)分批次的血樣送檢，并對(duì)最終結(jié)果進(jìn)行整合分析后發(fā)現(xiàn)，與健康組相比，由于輕度抑郁組和重度抑郁組大鼠，所受刺激強(qiáng)弱和程度不同，其各組大鼠的空腹血糖、空腹胰島素和葡萄糖曲線下面積、HOMA-IR指數(shù)、INS、LH、T、卵巢重量，均有不同程度的上升，ISI指數(shù)下降，體重及BMI值、FSH(P>0.05)無(wú)明顯差異，并且兩組大鼠均無(wú)規(guī)律的動(dòng)情周期，無(wú)排卵。

實(shí)驗(yàn)表明:由于情志刺激，可引起大鼠血性清激素的改變，繼而引發(fā)相關(guān)的多囊卵巢綜合征的發(fā)病。本實(shí)驗(yàn)證明了情志刺激引起的激素變化與多囊卵巢相關(guān)的影響因素，并為臨床進(jìn)行低情緒預(yù)防性和針對(duì)性治療提供依據(jù)，提高患者的生存質(zhì)量。