館藏紙質(zhì)書畫文物上霉菌的分離與鑒定方法探析

全銳

摘 要：館藏紙質(zhì)書畫文物具有較高的收藏價值，但紙質(zhì)書畫的較難保存，較易引發(fā)霉菌污染等情況的發(fā)生。對紙質(zhì)書畫污染菌進行分離及鑒定，不但可以提高紙質(zhì)書畫文物霉變防治工作的有效性，還能夠提高防治效果。文章提取貴州省博物館館藏紙質(zhì)書畫文物上的霉菌，通過對霉菌形狀及特征的分析，提出分離與鑒定霉菌的相關方法。

關鍵詞：紙質(zhì)書畫文物;霉菌;鑒定方法;分離

在我國歷史發(fā)展進程中，紙質(zhì)書畫起到較為關鍵的作用。其不但能夠充分展現(xiàn)我國歷史風貌，還能夠凸顯我國特色歷史文化。但相比較其他材質(zhì)文物，紙紙質(zhì)書畫文物較易出現(xiàn)霉菌污染等情況。若無法對此種情況進行有效解決，會使其出現(xiàn)糟朽變質(zhì)的現(xiàn)象，一定程度上影響紙質(zhì)書畫文物的展示效果。

1 材料與方法

1.1 采集樣品

本次實驗提取的樣品來自貴州省博物館內(nèi)部帶有霉斑的紙質(zhì)書畫文物。一般情況下，霉斑多以棕褐色、黑色以及黃色的形式出現(xiàn)于紙質(zhì)書畫文物的表面。在具體實驗過程中，需及時對霉菌進行取樣。此期間可采用一次性無菌拭子進行提取，提取方式按照單一擦拭規(guī)律進行。完成霉菌樣本采集后，將樣本放置于管器中，并在管器表面標明時間及編號。然后將霉菌樣本放置于冰盒中，對其進行分離培養(yǎng)。

1.2 霉菌的分離及純化

在實驗前期，需保證實驗在無菌環(huán)境下進行。首先，使用無菌剪刀對霉菌采樣時使用的拭子頭進行裁剪;其次，準備一只錐形瓶，在瓶內(nèi)注入SDA液體;最后，將裁剪下來的拭子頭放至錐形瓶內(nèi)進行霉菌培養(yǎng)。在實際培養(yǎng)期間，需注意霉菌較易出現(xiàn)菌膜等現(xiàn)象。為避免此現(xiàn)象的發(fā)生，在瓶內(nèi)放置少量無菌玻璃珠。完成以上環(huán)節(jié)后，將錐形瓶放置于100r/min震蕩環(huán)境下進行培養(yǎng)，此期間溫度應保持在25℃左右。培養(yǎng)3天后即可對培養(yǎng)液進行稀釋處理，主要按照10倍配比，利用無菌去離子水進行處理。在整個實驗過程中，稀釋梯度的設置尤為關鍵，其不僅決定實驗的成敗與否，還影響最終的實驗準確性。因此，在進行稀釋梯度的設置期間，需按照10-2、10-3、10-4的比例來進行。與此同時，及時對稀釋液按照不同梯度及濃度進行針對性采集，采集數(shù)量應保持在200μL左右。將采集到的稀釋液均勻涂抹于葡萄糖瓊脂表面，然后將葡萄糖瓊脂放置于25℃溫度下進行培養(yǎng)。培養(yǎng)3天后，即可觀察到霉菌出現(xiàn)的分離現(xiàn)象。霉菌分離后，多呈現(xiàn)菌落形態(tài)，并且顏色較為多樣。在完成霉菌分離實驗后，即可對其進行純化處理。部分霉菌的產(chǎn)孢量相對較大，對于此類型霉菌，可進行劃線培養(yǎng)。若經(jīng)劃線培養(yǎng)后霉菌依然存在污染等情況，可加大劃線純化的次數(shù)，以達到霉菌純化效果。

1.3 觀察霉菌形態(tài)

在進行菌落形態(tài)的觀察期間，首先需對凍存后的瓷珠進行提取。大多瓷珠呈紅色，并且表面吸附了菌液。使用無菌鑷子進行夾取，夾取數(shù)量為1粒。將夾取的瓷珠放置于帶有葡萄糖瓊脂的平板表面，將平板放置于25℃環(huán)境下培養(yǎng)4天左右。在此期間定期對菌落現(xiàn)象進行觀察，針對菌落的外觀、濕潤度、顏色以及生長情況進行實時記錄。在觀察菌落顯微形態(tài)期間，將水作為主要浮載劑，用解剖針挑取菌落邊緣的菌絲。將挑取的菌絲放置于載玻片上，以順時針形式將載玻片表面的菌絲挑散。將蓋玻片放置于菌絲表面，用顯微鏡對其進行深層觀察，明確孢子以及菌絲在顯微鏡下的微觀形態(tài)，并將此形態(tài)進行拍照存儲。

1.4 提取霉菌基因組的DNA

完成霉菌純化工作后需及時對其進行培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境溫度保持在25℃。根據(jù)真菌DNA試劑盒的標準規(guī)定進行提取，首先準備離心管，保證離心管的儲存量為2mL。將200mg的真菌絲放置于離心管內(nèi)部進行凍融，凍融次數(shù)為3～4次。然后將溶菌酶放置于離心管中，溶菌酶的總量要達到20μL。完成以上環(huán)節(jié)工作后，將離心管儲存于37℃的培養(yǎng)箱中。放置1天后，將離心管取出，放置于帶有55℃的水浴鍋內(nèi)，再將100%的乙醇加入至離心管進行攪拌。最后經(jīng)收集管以及吸附柱的特殊處理得到DNA洗脫液。

2 結果與討論

2.1 分離純化及形態(tài)觀察

通過霉菌分離、純化，得到紙質(zhì)書畫文物帶有的8株霉菌。經(jīng)對8株霉菌的對比及分析可發(fā)現(xiàn)，霉菌經(jīng)不同處理后的形態(tài)及顏色皆存在較大差異。霉菌顏色較為多樣，主要為黃、綠、灰等顏色，菌落整體呈絨毛及平展形態(tài)，部分菌落存在較強特性。大部分菌絲的高度較為發(fā)達，但仍有少部分菌絲并未見明顯生長趨勢。霉菌除具有吸附生長特性外，其中的木霉及曲霉皆有纖維素酶，并且二者的纖維素酶皆具有較強的高活性。纖維素酶能夠有效分解纖維素，在生物降解作用下，會對織物產(chǎn)生一定損傷，導致織物出現(xiàn)破損。與此同時，煙曲霉、黃曲霉以及黑曲霉皆會對紙質(zhì)書畫造成損壞，使其出現(xiàn)脫色等現(xiàn)象。由此可見，上述霉菌種類皆將嚴重影響紙質(zhì)書畫文物的存儲。

2.2 分子生物學鑒定結果

對提取的8株真菌進行實驗及鑒定可得，在8株霉菌中，帶有黃曲霉、大葉黃耆、尼日曲霉菌株及根瘤菌屬。表1是不同真菌在同源性對比下的不同數(shù)據(jù)。

傳統(tǒng)真菌種類相對較多，需依靠形態(tài)觀察才能對真菌結構進行深入分析。但就形態(tài)鑒定方法而言，此方法在實際鑒定期間需花費大量鑒定時間，需及時對菌落的顏色及形態(tài)進行實時觀察。同時，真菌形態(tài)存在較大差異性，針對其形態(tài)特征的研究相對復雜，并且受真菌培養(yǎng)環(huán)境及條件等方面影響，真菌鑒定結果缺乏準確性。為改變傳統(tǒng)形態(tài)學研究弊端，可利用分析生物學的研究方法對真菌進行系統(tǒng)分析。此方法能夠較大程度地彌補傳統(tǒng)形態(tài)學的不足，并且利用分子生物學所得到的序列同源性高達99%。由此可見，分子生物學具有較強實用性及準確性，應加大對此方法的研究力度。在霉菌實驗過程中，充分利用分子生物學中的分析技術，實現(xiàn)對真菌的有效鑒定及分類，進而為真菌研究提供有效參考依據(jù)。

3 結語

霉變是館藏紙質(zhì)書畫文物主要的病害之一。為避免紙質(zhì)書畫文物發(fā)生霉變，可利用霉菌鑒定等方法對霉菌種類進行分析，而后針對霉菌特點進行霉菌抑制劑的選擇。據(jù)實驗研究可得，霉菌種類相對較多，在霉菌的研究過程中，分子生物學能夠對其進行合理解析。因此，在實際研究過程中，可利用分析生物學檢定方法對霉菌菌株形態(tài)進行研究。同時在文物保護的相關工作中，合理將分子生物學鑒定技術融入其中，能夠有效提高分類鑒定的準確性，進而避免館藏紙質(zhì)書畫文物出現(xiàn)霉菌等問題，從而為紙質(zhì)書畫文物建立合理儲存空間。

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