Hns 對(duì)紫貽貝和牡蠣的急性毒性試驗(yàn)

邵躍

（錦州市科學(xué)技術(shù)研究院，遼寧 錦州 121000）

海洋污損生物，是指粘附在船舶的底部、海里的浮標(biāo)以及各類人工設(shè)施上的動(dòng)物、植物、微生物的總稱，其嚴(yán)重影響了人類正常的生產(chǎn)生活[1]。為了避免海洋污損生物，通常采用涂裝防污涂料的方法[2]。Hns 是從植物中提取到的一種毒性物質(zhì)。對(duì)于其機(jī)理和作用暫不清楚，現(xiàn)研究Hns 對(duì)海洋污損生物——紫貽貝和牡蠣的毒性效應(yīng)，來(lái)確定Hns是否可作為新型低毒、高效的防污試劑而被廣泛應(yīng)用。

1 研究方法

1.1 試驗(yàn)用品

紫貽貝和牡蠣（大小均等，紫貽貝約7 cm，牡蠣約個(gè)體長(zhǎng)度在8 cm）；Hns（粗提物，無(wú)臭，有淡淡的酒精味，易溶于水，有泡沫狀物質(zhì)產(chǎn)生，由大連大學(xué)提供，母液質(zhì)量濃度為10.000 g/L）；砂濾后海水溫度（20±1）℃，pH 值 為7.9～8.1，鹽度30。

1.2 預(yù)試驗(yàn)方法

急性毒性試驗(yàn)在不投喂?fàn)顟B(tài)下，采用靜態(tài)試驗(yàn)方法。通過(guò)預(yù)試驗(yàn)分別確定了紫貽貝和牡蠣的致死濃度范圍，其中對(duì)紫貽貝的致死質(zhì)量濃度為5～500 mg/L，對(duì)牡蠣的致死質(zhì)量濃度為10～320 mg/L。

1.3 正式試驗(yàn)

按照之前準(zhǔn)備試驗(yàn)確定的Hns 對(duì)牡蠣和紫貽貝的致死濃度范疇，依據(jù)等對(duì)數(shù)間距原則確定相應(yīng)的濃度組和空白對(duì)照組，并設(shè)置各濃度組和空白對(duì)照組3 個(gè)平行。在對(duì)紫貽貝進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)中，Hns 的質(zhì)量濃度設(shè)置為5，15，32，80，200 和500 mg/L；在對(duì)牡蠣進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)中，Hns 的質(zhì)量濃度設(shè)置為10，20，40，80，160 和320 mg/L。箱中裝滿10 L 過(guò)濾海水，再放入10 個(gè)大小一致的紫貽貝或牡蠣，投入對(duì)應(yīng)體積的母液，曝氣，連續(xù)觀察2 種生物對(duì)Hns 的中毒反應(yīng)，并分別記錄24，48，72 和96 h 藥物作用下紫貽貝和牡蠣的死亡數(shù)。

手動(dòng)刺激紫貽貝和牡蠣的外殼，如發(fā)現(xiàn)外殼無(wú)閉殼現(xiàn)象，可判斷為死亡，并及時(shí)撈出。檢查次數(shù)為每天1 次以上。

試驗(yàn)結(jié)束后，用概率單位法[3]計(jì)算出Hns 分別對(duì)紫貽貝和牡蠣24，48，72 和96 h 的半致死濃度（LC50），并作X2回歸檢驗(yàn)，求出24，48，72 和96 h半致死濃度的95%置信區(qū)間，以及在藥物作用下紫貽貝和牡蠣的安全濃度[4]。

式中：h——小時(shí)；

LC50——半致死濃度，mg/L。

2 結(jié)果與討論

2.1 結(jié)果

紫貽貝和牡蠣接觸Hns 溶液時(shí)，每個(gè)濃度的3個(gè)平行組間的毒性無(wú)差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），各濃度組在各個(gè)時(shí)間段的死亡百分率見(jiàn)表1 和表2。由表1 和表2 可見(jiàn)，紫貽貝和牡蠣的死亡百分率隨著濃度和暴露時(shí)間的的增加而增加。

根據(jù)紫貽貝和牡蠣在24，48，72 和96 h 的病死率，采用概率單位法求出Hns 對(duì)紫貽貝和牡蠣在24，48，72 和96 h 的半致死濃度（LC50）以及半致死濃度的95%置信區(qū)間和對(duì)紫貽貝的安全濃度（表3）。通過(guò)表3 數(shù)據(jù)可以看出，牡蠣對(duì)Hns 的抗藥性要比紫貽貝大，前者大約是后者的8 倍。

表1 紫貽貝暴露于Hns 溶液中的死亡比例

表2 牡蠣暴露于Hns 溶液中的死亡比例

表3 Hns 對(duì)紫貽貝和牡蠣急性毒性計(jì)算結(jié)果 mg/L

2.2 討論

急性毒性試驗(yàn)是指在接受大劑量某種藥物后發(fā)生的迅速而嚴(yán)重的毒性反應(yīng)，它能提供關(guān)于藥物對(duì)人體毒性影響的初步數(shù)據(jù)。半致死濃度（LC50）是評(píng)價(jià)藥物毒性大小的重要指標(biāo)，其數(shù)值越大，就說(shuō)明該藥物越安全[5]。

由表1 和表2 可見(jiàn)，紫貽貝和牡蠣的死亡百分率隨著Hns 濃度的增加及暴露時(shí)間的增加而升高，這與賈曉平等[6]探究的翡翠貽貝接觸石油類物質(zhì)的試驗(yàn)結(jié)果一致。

由表3 可見(jiàn)，Hns 對(duì)紫貽貝和牡蠣這2 種生物的半致死濃度差異很大，可見(jiàn)這兩種的抗藥性具有顯著性差異：牡蠣的抗藥性比紫貽貝的抗藥性要大，前者大約是后者的8 倍。根據(jù)我國(guó)農(nóng)藥毒性的劃分等級(jí)：ρ（48 hLC50）＜1 mg/L 為高毒性，ρ（48 hLC50）=1～10 mg/L 為中毒性，ρ（48 hLC50）＞10 mg/L 為低毒性[5]，可得出結(jié)論：Hns 對(duì)紫貽貝和牡蠣均屬于中毒性藥物。與賈曉平等[6]調(diào)研得出翡翠貽貝接觸0 號(hào)柴油后的96 h 半致死濃度為1.41 mg/L，南海原油對(duì)翡翠貽貝的96 h 半致死濃度為4.17 mg/L 的結(jié)論相比，紫貽貝和牡蠣對(duì)Hns 的敏感性要低于0號(hào)柴油而高于南海原油，這說(shuō)明Hns 對(duì)紫貽貝和牡蠣等污損生物產(chǎn)生毒害作用要比南海原油大，而比0號(hào)柴油小。假設(shè)將Hns 應(yīng)用于防污涂料中，雖然對(duì)污損生物有一定的防污作用，但仍會(huì)對(duì)其他海洋生物造成一定的毒性作用，影響海洋的生態(tài)系統(tǒng)平衡。總之，Hns 還沒(méi)有達(dá)到低毒高效的最佳防污試劑的要求。