不同病情程度妊娠期高血壓疾病患者血清APN、胎盤MMP-9水平變化及臨床意義探討

張永梅，王睿

(1.鄭州市婦幼保健院門診內(nèi)科；2.鄭州市婦幼保健院檢驗(yàn)科，河南 鄭州 450000)

妊娠期高血壓疾?。≒regnancy-induced hypertension syndrome，PIH）屬產(chǎn)科嚴(yán)重并發(fā)癥之一，易導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局，但其發(fā)病機(jī)制及病因尚未完全清楚，臨床需及早發(fā)現(xiàn)，以對(duì)癥治療，控制病情進(jìn)展。脂聯(lián)素（APN）是近年發(fā)現(xiàn)的由脂肪組織分泌的一種蛋白質(zhì)激素，臨床研究發(fā)現(xiàn)，其血清中水平變化與糖尿病、肥胖、脂代謝紊亂及高血壓等關(guān)系密切[1]?；|(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）是由內(nèi)皮細(xì)胞、滋養(yǎng)細(xì)胞等分泌的Zn2+依賴肽鏈內(nèi)切酶，是引起滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲的主要物質(zhì)之一，相關(guān)研究指出，隨妊娠期高血壓病情進(jìn)展，絨毛上皮組織MMP-9表達(dá)迅速降低，其侵蝕能力顯著下降[2，3]。本研究選取我院PIH患者174例作研究對(duì)象，旨在探討不同病情程度間血清APN水平及胎盤MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率變化及臨床意義?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年3月-2018年2月我院PIH患者174例作研究對(duì)象，根據(jù)病情程度不同分單純?nèi)焉锲诟哐獕航M（n=60）、輕度子癇前期組（n=56）、重度子癇前期組（n=58），另選同期健康體檢者57例作對(duì)照組。3組年齡、體質(zhì)量指數(shù)、孕周、孕次、產(chǎn)次、居住地等基礎(chǔ)資料對(duì)比無(wú)顯著差異（P＞0.05），見表 1。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) ⑴納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合PIH診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；均為單胎；均知情本研究并簽署同意書。⑵排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有高血壓、癲癇、糖尿病史者；伴有精神異常者；合并血液系統(tǒng)疾病者；臨床資料缺失者等。

1.3 方法

1.3.1 血清APN檢測(cè)方法 入院后均于次日晨抽取空腹肘靜脈血 5ml，離心 10min（3000r/min），取上層血清置入-70℃冰箱待測(cè)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELASA）檢測(cè)APN水平。所用試劑及試劑盒均由南京軒凱生物科技有限公司提供，操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3.2 胎盤MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率檢測(cè) a、胎盤組織取材、制備，于胎盤娩出30min后取母面中央1cm×1cm×1cm左右組織塊，注意避開壞死、鈣化區(qū)，以生理鹽水漂洗后用福爾馬林溶液（10%）固定＞24h，常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片。b、主要試劑，試劑一抗、試劑盒 （南京軒凱生物科技有限公司，SP9000）、磷酸氫二鉀、磷酸氫二鈉、氯化鉀、氯化鈉等。化學(xué)試劑均由萬(wàn)華化學(xué)集團(tuán)股份有限公司提供，均為分析純。c、免疫組化測(cè)定，均由相同檢驗(yàn)科醫(yī)師嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。以已知陽(yáng)性標(biāo)本作陽(yáng)性對(duì)照，以BSA（1%）替代一抗作陰性對(duì)照。以細(xì)胞出現(xiàn)棕黃色沉著顆粒視MMP-9陽(yáng)性反應(yīng)；以免疫組織化學(xué)法（SP）測(cè)定胎盤組織MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率。與背景一致計(jì)0；胞漿內(nèi)或胞核內(nèi)見少量淡黃色顆粒，顯著高于背景計(jì)1；胞漿內(nèi)或胞核內(nèi)見稍多深棕色顆粒計(jì)2；胞漿內(nèi)或胞核內(nèi)見大量褐色或深棕色顆粒計(jì)3。陽(yáng)性細(xì)胞百分比，無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì) 0；＜25%計(jì) 1；25%～50%計(jì) 2；＞50%計(jì) 3。 取上述兩項(xiàng)乘積：0～1 為（-）；2～3 為（+）；4～5 為（++）；＞5為（+++）。

表1 基礎(chǔ)資料

1.4 觀察指標(biāo) ⑴分析不同分組間血清APN水平及胎盤MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率。⑵分析血清APN水平及胎盤MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率與PIH病情程度相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 通過SPSS 21.0處理數(shù)據(jù)，以n（%）表示計(jì)數(shù)資料（胎盤MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率），行χ2檢驗(yàn)，以（x±s）表示計(jì)量資料（血清 APN 水平），行t檢驗(yàn)，組間比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，采用Spearman分析法進(jìn)行相關(guān)性分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PIH患者與健康者血清APN水平及胎盤MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率 PIH患者血清APN水平及胎盤MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率低于健康對(duì)照組（P＜0.05），見表2。

表2 PIH患者與健康者血清APN水平及胎盤MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率

2.2 不同病情程度血清APN水平及胎盤MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率 經(jīng)單因素方差分析，不同病情程度間血清APN水平及胎盤MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩兩比較，輕度子癇前期組血清APN水平及胎盤MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率低于單純?nèi)焉锲诟哐獕航M，重度子癇前期組低于輕度子癇前期組（P＜0.05），見表 3。

表3 3組血清APN水平及胎盤MMP-9表達(dá)率對(duì)比

2.3 血清APN水平及胎盤MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率與PIH病情程度相關(guān)性分析 經(jīng)Spearman分析，血清APN水平及胎盤MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率與PIH病情程度呈負(fù)相關(guān) （r1=-0.714，P1=0.013；r2=-0.614，P2=0.021）。

3 討論

PIH多發(fā)于孕20周后，據(jù)臨床統(tǒng)計(jì)，我國(guó)發(fā)病率約10%[5]。其臨床表現(xiàn)蛋白尿、血壓升高、水腫等，嚴(yán)重者會(huì)出現(xiàn)抽搐、昏迷，累及多器官損傷，終止妊娠可迅速緩解病情。該疾病主要病理變化是全身小動(dòng)脈痙攣，且血管內(nèi)皮細(xì)胞功能缺失、損傷為PIH發(fā)病中心環(huán)節(jié)。

APN是由脂肪細(xì)胞分泌的一種含244個(gè)氨基酸內(nèi)源性激素多肽，高分子復(fù)合體是其主要活性形式。該物質(zhì)于機(jī)體糖代謝、脂肪酸氧化、穩(wěn)定血管內(nèi)皮功能中起重要調(diào)節(jié)作用，據(jù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，給予高血壓大鼠外源性APN可降低其血壓水平[6]。另外，學(xué)者張艷等[7]研究指出，高血壓患者血清APN呈低水平狀態(tài)，認(rèn)為交感神經(jīng)過度興奮抑制了APN表達(dá)。本研究通過檢測(cè)174例PIH患者血清APN水平發(fā)現(xiàn)，其低于健康對(duì)照組，且經(jīng)單因素方差分析，不同病情程度間血清APN水平對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩兩比較，輕度子癇前期組血清APN水平低于單純?nèi)焉锲诟哐獕航M，重度子癇前期組低于輕度子癇前期組（P＜0.05），表明隨PIH病情程度加重，血清APN水平呈降低趨勢(shì)，尤其是重度子癇前期組降低更為顯著。臨床研究指出，于胚胎植入中，滋養(yǎng)細(xì)胞沿子宮螺旋小動(dòng)脈浸潤(rùn)子宮內(nèi)膜、肌層尤為關(guān)鍵，若侵蝕螺旋動(dòng)脈不足、植入過淺會(huì)影響胎盤血管重塑過程，致使胎盤缺氧缺血，引起各種細(xì)胞因子入血損傷血管內(nèi)皮，誘發(fā)蛋白尿、水腫等多種PIH臨床癥狀[8，9]。MMP-9主要作用于Ⅰ及Ⅴ型明膠、Ⅳ及Ⅴ型膠原，能降解細(xì)胞外基質(zhì)，參與調(diào)解月經(jīng)周期、創(chuàng)傷修復(fù)、胎盤形成、胎膜破裂等過程[10]。臨床研究證實(shí)，MMP-9的表達(dá)會(huì)直接影響滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)能力，其降解蛋白多糖、膠原蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)，能促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲[11，12]。本研究發(fā)現(xiàn)，PIH患者胎盤MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率低于健康對(duì)照組（P＜0.05），且對(duì)不同病情程度患者進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn)，輕度子癇前期組胎盤MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率低于單純?nèi)焉锲诟哐獕航M，重度子癇前期組低于輕度子癇前期組（P＜0.05），表明胎盤MMP-9表達(dá)不足是導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力低，影響胎盤著床的主要因素之一。另外，本研究經(jīng)Spearman分析得知，血清APN水平及胎盤MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率與PIH病情程度呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），表明血清APN水平及胎盤MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率與PIH患者病情程度密切相關(guān)，及時(shí)了解其水平變化可有效防治PIH。

綜上可知，血清APN水平及胎盤MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率與PIH患者病情程度密切相關(guān)，為臨床探討其發(fā)病機(jī)制提供了新途徑。