血清中INF-γ、ADA和TB-IGRA水平變化與結(jié)核性胸膜炎患者病情嚴(yán)重程度的關(guān)系研究

崔魁麗，劉衛(wèi)國，李秋玉，李四清

(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院結(jié)核內(nèi)科，河南 衛(wèi)輝 453100)

流行病學(xué)研究表明，我國部分地區(qū)結(jié)核性胸膜炎的發(fā)病率可接近485～683/1萬人左右[1]。臨床上結(jié)核性胸膜炎的發(fā)生，不僅能夠?qū)е禄颊呱钯|(zhì)量的下降，同時還能夠增加遠(yuǎn)期致殘率和病死率[2]。現(xiàn)階段缺乏對于結(jié)核性胸膜炎患者病情評估的可靠性指標(biāo)，血清學(xué)相關(guān)細(xì)胞因子的檢測，能夠?yàn)榻Y(jié)核病患者的病情評估提供參考。干擾素（INF－γ）的表達(dá)上升，能夠誘導(dǎo)患者T淋巴細(xì)胞的免疫功能紊亂，抑制T淋巴細(xì)胞對于結(jié)核桿菌的吞噬能力，導(dǎo)致結(jié)核病灶組織肉芽腫的形成[3，4]；腺苷脫氨酶（ADA）主要存在于T淋巴細(xì)胞內(nèi)，在T淋巴細(xì)胞持續(xù)性增殖的過程中，ADA可顯著的釋放，進(jìn)而促進(jìn)外周血中ADA的表達(dá)濃度的上升；干擾素釋放相關(guān)因子（IGRA）能夠評估患者體內(nèi)炎癥性因子的激活程度，進(jìn)而參與到肉芽腫的形成和結(jié)核病灶的病理性進(jìn)展過程中[5]。為了揭示INF－γ、ADA和TB－IGRA的表達(dá)與結(jié)核性胸膜炎患者的病情關(guān)系，從而為臨床上結(jié)核性胸膜炎患者的病情評估提供參考，本次研究選取2016年5月－2017年8月在我院接受治療的結(jié)核性胸膜炎患者為研究對象，探討了INF－γ、ADA和TB－IGRA及不同白細(xì)胞介素在結(jié)核性胸膜炎患者中的表達(dá)情況，報(bào)告如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2016年5月－2017年8月在我院接受治療的結(jié)核性胸膜炎患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴成年者；⑵診斷為結(jié)核性胸膜炎者；⑶無其他呼吸系統(tǒng)疾病者；排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴臨床資料不全者；⑵近期有感染性疾病者。根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)共納入病例數(shù)80例，男42例，女38例，年齡32～65 歲，平均 49.68±2.16 歲，其中合并胸腔積液組35例，未合并胸腔積液組45例。對照組納入排除標(biāo)準(zhǔn)：成年者，無呼吸系統(tǒng)同疾病者，共納入50例，男 30 例，女 20 例，年齡 30～67 歲，平均 49.65±3.01歲。本項(xiàng)研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會評審?fù)ㄟ^，且所有患者均知情同意。

1.2 檢測方法 采集患者的靜脈血3ml，加入IL－2、IL－4 和 IL－6 單抗，標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的 IL－2、IL－4和IL－6會與單抗結(jié)合，PBS液體洗滌5min。按照1：500的比例加入羊標(biāo)志的一抗5ml，4℃放置過夜，PBS緩沖液洗滌3次，每次5min，加入鼠來源的二抗（1：1000）2ml，室溫放置 2h，PBS 液體洗滌5min。加入顯色底物，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑顯藍(lán)色，加終止液變黃。在450nm處測OD值。

采集入院后靜脈血，1000r/min離心5min，離心半徑10cm，離心后收集上清液，采用電化學(xué)發(fā)光法檢測INF-γ、ADA和TB-IGRA水平，加入檢測試劑，配套試劑盒購自南京博奧生物檢測公司，微型離心機(jī)HITETIC購自上海精密儀器有限公司。

1.3 評價指標(biāo) 觀察各組血清中INF-γ、ADA和TB-IGRA水平，比較各組患者炎癥因子、肺功能指標(biāo)的差異，分析結(jié)核性胸膜炎患者中INF-γ、ADA和TB-IGRA水平與炎癥因子、肺功能的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)錄入后，采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)和計(jì)量資料分別采用例和均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。各組血清中INF-γ、ADA和TB-IGRA水平、炎癥因子、肺功能指標(biāo)的比較采用方差分析進(jìn)行處理，采用Pearson相關(guān)分析法分析結(jié)核性胸膜炎患者中INF-γ、ADA和TB-IGRA水平與炎癥因子、肺功能的相關(guān)性。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清INF-γ、ADA和TB-IGRA水平的比較 結(jié)核性胸膜炎患者的血清INF-γ、ADA和TBIGRA水平均高于對照組，且合并胸腔積液組患者的血清INF-γ、ADA和TB-IGRA水平高于未合并胸腔積液組。見表1。

表1 各組血清INF-γ、ADA和TB-IGRA水平的比較

2.2 各組血清炎癥因子水平的比較 結(jié)核性胸膜炎患者的血清IL-2、IL-4和IL-6水平均高于對照組，且合并胸腔積液組患者的血清IL-2、IL-4和IL-6水平高于未合并胸腔積液組。見表2。

表2 各組血清炎癥因子水平的比較

2.3 各組肺功能指標(biāo)的比較 結(jié)核性胸膜炎患者的FVC、FEV1和FEV1/FVC水平均低于對照組，且合并胸腔積液組患者的FVC、FEV1和FEV1/FVC水平低于未合并胸腔積液組。見表3。

表3 各組肺功能指標(biāo)的比較

2.4 結(jié)核性胸膜炎患者中INF-γ、ADA和TB-IGRA與炎癥因子、肺功能的相關(guān)性 結(jié)核性胸膜炎患者中INF-γ、ADA和TB-IGRA水平與IL-2、IL-4和IL-6水平正相關(guān)，與 FVC、FEV1和 FEV1/FVC水平負(fù)相關(guān)。見表4。

3 討論

自身免疫力的下降或者結(jié)核桿菌的細(xì)菌感染載量的增加，均能夠促進(jìn)結(jié)核性胸膜炎的發(fā)生，特別是在合并有T淋巴細(xì)胞功能紊亂的患者中，結(jié)核性胸膜炎的發(fā)生率可進(jìn)一步的上升[6]。結(jié)核性胸膜炎的發(fā)生，不僅能夠?qū)е禄颊咝夭颗R床癥狀的出現(xiàn)，同時還能夠限制肺通氣和肺換氣過程，導(dǎo)致肺功能的限制下降[7]。臨床上對于結(jié)核性胸膜炎的病情評估具有重要的意義，其能夠指導(dǎo)結(jié)核性胸膜炎患者的治療預(yù)后的評估。胸部CT檢查雖然能夠在結(jié)核性胸膜炎患者的病情評估過程中發(fā)揮作用，但一項(xiàng)囊括了209例樣本量的病情評估分析研究可見，依靠CT檢查評估結(jié)核性胸膜炎的靈敏度不足45%，其評估患者病情嚴(yán)重程度的一致性率不足40%[8]。而本次研究對于血清中細(xì)胞因子的研究，能夠?yàn)榕R床上結(jié)核性胸膜炎患者的病情評估提供參考。

表4 結(jié)核性胸膜炎患者中INF-γ、ADA和TB-IGRA水平與炎癥因子、肺功能的相關(guān)性

INF-γ是炎癥性相關(guān)因子，其能夠誘導(dǎo)下游腫瘤壞死因子的激活，進(jìn)而促進(jìn)結(jié)核患者病灶組織的破壞和肉芽組織的機(jī)化，導(dǎo)致結(jié)核組織空洞的形成；ADA是反應(yīng)體內(nèi)T淋巴細(xì)胞增殖分化程度的指標(biāo)，在結(jié)核桿菌感染和致病的過程中，T淋巴細(xì)胞的激活，能夠顯著促進(jìn)ADA的釋放[9]；IGRA是干擾素激活程度的指標(biāo)，在局部結(jié)核病灶破壞的過程中，炎癥反應(yīng)的激活能夠顯著促進(jìn)IGRA的上升[10]；IL-2是th1淋巴細(xì)胞分泌的效應(yīng)因子，IL-4和IL-6是th2淋巴細(xì)胞分泌的效應(yīng)因子，IL-2、IL-4和IL-6的表達(dá)紊亂能夠影響到th1/th2淋巴細(xì)胞的平衡，進(jìn)而促進(jìn)體內(nèi)炎癥性瀑布反應(yīng)的發(fā)生，加劇結(jié)核病灶的進(jìn)展速度[11]。

本次研究中可以發(fā)現(xiàn)，在結(jié)核性胸膜炎患者中，INF-γ、ADA和IGRA的表達(dá)均明顯上升，高于非結(jié)核組，差異較為明顯，同時在合并有明顯的胸腔積液的患者中，INF-γ、ADA和IGRA的表達(dá)濃度可進(jìn)一步的上升，提示了相關(guān)血清學(xué)細(xì)胞因子能夠顯著參與到結(jié)核性胸膜炎癥的病情進(jìn)展過程。通過匯集不同的類似文獻(xiàn)，這主要考慮與INF-γ、ADA 和 IGRA 的下列作用機(jī)理特征有關(guān)[12，13]：⑴INF-γ的上升能夠?qū)е麦w內(nèi)抗原提呈細(xì)胞功能的異常，加劇T淋巴細(xì)胞的功能抑制，導(dǎo)致結(jié)核桿菌病原體清除能力的下降；⑵結(jié)核桿菌感染的過程中，由于T淋巴細(xì)胞的分化和增殖，ADA可顯著的釋放；⑶IGRA是評估結(jié)核患者體內(nèi)炎癥性因子的指標(biāo)，由于局部結(jié)核脂多糖對于炎癥反應(yīng)的誘導(dǎo)，IGRA可明顯上升。熊子波等[14]研究者也認(rèn)為，在結(jié)核性胸膜炎癥患者中，INF-γ的表達(dá)濃度可平均上升35%以上，特別是在合并有明顯的肺外播散病灶的患者中，INF-γ的表達(dá)上升更為明顯。在合并有胸腔積液的患者中，相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)上升更為明顯，這主要由于合并有胸腔積液的患者，其結(jié)核病情的嚴(yán)重程度較高，炎癥反應(yīng)的激活更為明顯，進(jìn)而可以促進(jìn)INF-γ、ADA和IGRA的上升。IL-2、IL-4和IL-6是評估th1/th2淋巴細(xì)胞功能的指標(biāo)，在結(jié)核性胸膜炎癥患者中明顯上升，同時在合并有胸腔積液的患者中，IL-2、IL-4和IL-6的表達(dá)濃度可進(jìn)一步的上升，這主要由于合并有胸腔積液的患者，其T淋巴細(xì)胞的紊亂更為明顯，th1/th2平衡的移動更為明顯，進(jìn)而影響到了IL-2、IL-4和IL-6的合成和釋放速度[15]。結(jié)合性胸膜炎癥患者的肺功能明顯的惡化，這主要由于胸腔積液的發(fā)生，能夠限制肺擴(kuò)張過程，導(dǎo)致肺通氣的障礙，影響到了肺功能。相關(guān)關(guān)系分析也可見，INF-γ、ADA和IGRA水平與IL-2、IL-4和IL-6水平正相關(guān)，同時與肺功能指標(biāo)也密切相關(guān)，進(jìn)一步提示了INF-γ、ADA和IGRA的表達(dá)與結(jié)核性胸膜炎癥患者的病情關(guān)系。

綜上所述，在結(jié)核性胸膜炎癥患者中，INF-γ、ADA和IGRA的表達(dá)明顯上升，同時INF-γ、ADA和IGRA的表達(dá)與IL-2、IL-4和IL-6及肺功能指標(biāo)密切相關(guān)。