Girdin、VEGF在兒童腎母細(xì)胞瘤中的表達(dá)及意義

王利娟，張紅梅，黃閃，高海麗，李慧霞

(鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院、河南省兒童醫(yī)院、鄭州兒童醫(yī)院血液腫瘤科，河南 鄭州 450000)

兒童腎母細(xì)胞瘤是臨床上多見的兒童實(shí)體細(xì)胞性腫瘤，流行病學(xué)研究顯示，兒童腎母細(xì)胞瘤的發(fā)病率可達(dá)234～535/10萬人左右[1]。臨床上兒童腎母細(xì)胞瘤的發(fā)生，能夠增加患兒的致殘率或者病死率[2]，給家庭帶來較為嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)及心理負(fù)擔(dān)。生物學(xué)因素或者腫瘤相關(guān)因子的改變，能夠通過影響兒童腎母細(xì)胞瘤病灶組織內(nèi)細(xì)胞的生物學(xué)特征，增加早期腫瘤發(fā)生或者中晚期惡性腫瘤病情進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)。Girdin作為新發(fā)現(xiàn)的肌動蛋白，其表達(dá)濃度的改變能夠通過影響到癌細(xì)胞的變形能力，進(jìn)而參與到腫瘤細(xì)胞的浸潤或者擴(kuò)散等過程中[3]；血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表達(dá)，能夠促進(jìn)新生血管的形成和腫瘤部位血管內(nèi)皮細(xì)胞的移行等過程，增加腫瘤病灶組織的血流灌注量，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)移[4，5]。已有的相關(guān)研究揭示了VEGF在兒童腎母細(xì)胞瘤發(fā)生過程中的作用，認(rèn)為VEGF的高表達(dá)是促進(jìn)兒童腎母細(xì)胞瘤臨床分期進(jìn)展、病死率增加等的重要因素[6]，但對于Girdin的分析研究不足。為了進(jìn)一步探討Girdin、VEGF在影響兒童腎母細(xì)胞瘤發(fā)生過程中的作用，從而為臨床上疾病的診療提供理論基礎(chǔ)，本次研究選取2012年2月至2017年10月在我院治療的腎母細(xì)胞瘤患兒52例，探討了Girdin、VEGF與患者臨床病理特征的關(guān)系，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年2月至2017年10月在我院治療的腎母細(xì)胞瘤患兒52例，其中男性30例，女性22例；年齡1～11歲，中位年齡3歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴均經(jīng)病理組織學(xué)確診；⑵術(shù)前未行放化療等治療；⑶患兒監(jiān)護(hù)人知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴臨床病理資料欠缺；⑵合并有其他惡性腫瘤者。同時(shí)選取癌旁組織（距癌≥3cm）作為對照（鏡下無癌細(xì)胞浸潤）。

1.2 檢測方法 石蠟切片脫蠟至水，過氧化氫封閉內(nèi)源性過氧化物酶：3%H2O2，室溫10min（避光），10mMpH 6.0枸櫞酸鈉緩沖液），PBS沖洗5min，滴加正常山羊或兔血清封閉處理，37℃，15min。用濾紙吸去血清，不洗，直接滴加第一抗體，37℃2h，滴加生物素化的二抗，37℃，40min，PBS 沖洗 5min，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，加拿大樹膠（或中性樹膠）封片。

1.3 結(jié)果判斷 Girdin、VEGF表達(dá)以胞質(zhì)染色棕黃色為陽性細(xì)胞。根據(jù)陽性細(xì)胞比例及染色程度進(jìn)行判斷，其中陽性細(xì)胞比例＜5%為0分，5%～10%為 1分，11%～50%為 2分，51%～75%為 3分，＞75%為4分；染色程度：不著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，深褐色為3分。陽性細(xì)胞比例與染色程度得分之積為最終結(jié)果，≥4分為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 19.0軟件，計(jì)數(shù)資料比較使用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearman相關(guān)。以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腎母細(xì)胞瘤和癌旁組織Girdin、VEGF表達(dá)比較 腎母細(xì)胞瘤Girdin和VEGF蛋白陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織（P＜0.05），見表1和圖1。

2.2 Girdin、VEGF表達(dá)與腎母細(xì)胞瘤臨床病理特征的關(guān)系 Girdin蛋白陽性表達(dá)與腎母細(xì)胞瘤腫瘤直徑、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）；VEGF蛋白陽性表達(dá)與腎母細(xì)胞瘤臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。 見表 2。

表1 腎母細(xì)胞瘤和癌旁組織Girdin、VEGF表達(dá)比較

2.3 相關(guān)分析 經(jīng)Spearman相關(guān)分析，結(jié)果顯示Girdin和VEGF蛋白表達(dá)無相關(guān)性（P＞0.05），見表3。

3 討論

兒童腎母細(xì)胞瘤的發(fā)生主要與腎源性殘留或者M(jìn)T基因的突變等因素有關(guān)，特別是具有相關(guān)家族史的人群中，兒童腎母細(xì)胞瘤的發(fā)病率更高，臨床預(yù)后更差[7，8]。現(xiàn)階段臨床上主要通過手術(shù)等方式治療兒童腎母細(xì)胞瘤，但包括各種綜合性方式治療后患兒的病情緩解率水平或者臨床預(yù)后等的改善并不理想[9，10]。本次研究通過對于兒童腎母細(xì)胞瘤發(fā)病過程中的病理標(biāo)本組織中腫瘤相關(guān)因子的分析，能夠?yàn)閮和I母細(xì)胞瘤的靶向治療提供參考，并為疾病的病因?qū)W研究提供依據(jù)。

Girdin對于肌動蛋白活性的影響，能夠提高癌細(xì)胞的變形能力，增加癌細(xì)胞通過淋巴結(jié)、血行、直接浸潤等方式進(jìn)行擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)近年來相關(guān)基礎(chǔ)方面的研究還顯示，Girdin的表達(dá)可以通過對細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶的調(diào)控作用，影響腫瘤細(xì)胞的周期，提高G1/S的比例，提高癌細(xì)胞快速跨越G0期的速度[11]；VEGF不僅能夠協(xié)同刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移，促進(jìn)局部病灶組織新生血管的形成，提高腫瘤病灶組織的血流灌注，同時(shí)VEGF的表達(dá)對于局部淋巴結(jié)竇的形成作用，能夠誘導(dǎo)癌細(xì)胞局部富集效應(yīng)，提高癌細(xì)胞通過淋巴結(jié)等進(jìn)行轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)?，F(xiàn)階段臨床上多數(shù)研究探討了VEGF在消化系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等惡性腫瘤發(fā)生過程中的作用，認(rèn)為VEGF的高表達(dá)是促進(jìn)患者臨床病理特征惡化、放化療敏感性下降等的重要因素，而對于兒童腎母細(xì)胞瘤中的VEGF的分析也相應(yīng)證實(shí)了這一點(diǎn)，但缺乏對于Girdin與VEGF的相關(guān)關(guān)系的研究。

本次研究通過免疫組化研究方法分析了Girdin、VEGF蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Girdin、VEGF在兒童腎母細(xì)胞瘤患者病灶組織中的陽性表達(dá)率均顯著上升，高于癌旁組織中相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，提示了Girdin、VEGF均參與到了兒童腎母細(xì)胞瘤的發(fā)生過程中[12，13]：⑴Girdin對于腎母細(xì)胞瘤發(fā)生的影響主要與其對于腫瘤細(xì)胞浸潤能力、突破基底膜的能力等的影響有關(guān)，同時(shí)也與Girdin對于腫瘤細(xì)胞的增殖過程的調(diào)控作用有關(guān)；⑵VEGF的高表達(dá)能夠通過影響到新生血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移及化生，促進(jìn)新生血管的形成、增加血流灌注，為腫瘤細(xì)胞的DNA的擴(kuò)增、轉(zhuǎn)移等提供基礎(chǔ)。王晗等[14]研究者在探討了58例樣本量的兒童腎母細(xì)胞瘤患者病灶組織中VEGF的表達(dá)陽性率后發(fā)現(xiàn)，VEGF的表達(dá)陽性率可較癌旁組織上升25%以上，同時(shí)在癌細(xì)胞分化較差、臨床分期Ⅲ期或者Ⅳ期等患者中，VEGF的表達(dá)具有進(jìn)一步的上升趨勢。免疫組化染色可見，Girdin、VEGF二者均主要表達(dá)于癌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)或者細(xì)胞間質(zhì)中，同時(shí)癌細(xì)胞的異型性越為顯著，Girdin、VEGF的染色程度越深。Girdin、VEGF均與兒童腎母細(xì)胞瘤患者的臨床分期或者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，同時(shí)Girdin還能夠影響腫瘤病灶組織的直徑，提示了二者與患者臨床病情的關(guān)系，Girdin、VEGF對于臨床分期或者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響主要在于其對于癌細(xì)胞的浸潤或者淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞粘附能力的改變有關(guān)，而對于腫瘤直徑的影響的機(jī)制不清，可能與Girdin對腫瘤細(xì)胞持續(xù)性增殖能力的影響有關(guān)。但部分研究者并不認(rèn)為VEGF的表達(dá)與腎母細(xì)胞瘤患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)[15]，考慮可能與病例入組標(biāo)準(zhǔn)、病程長短、檢測試劑的敏感程度的不同等有關(guān)。

表2 Girdin、VEGF表達(dá)與腎母細(xì)胞瘤臨床病理特征的關(guān)系

表3 相關(guān)分析

綜上所述，兒童腎母細(xì)胞瘤中Girdin和VEGF表達(dá)增高，與患者的臨床分期或者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征密切相關(guān)，可以作為進(jìn)一步深入探討的指標(biāo)。