• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    鉛脅迫下接種AM真菌對龍葵根際土壤微生物群落代謝特征的影響*

    2019-04-13 03:22:08張向前趙金莉
    關(guān)鍵詞:植物

    韓 娟, 張向前, 趙金莉

    ?

    鉛脅迫下接種AM真菌對龍葵根際土壤微生物群落代謝特征的影響*

    韓 娟, 張向前, 趙金莉**

    (河北大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 保定 071002)

    為從微生態(tài)角度探索接種AM真菌對鉛污染根際土壤微生物群落代謝特征的影響, 以摩西管柄囊霉()和幼套近明囊霉()為接種菌劑, 在溫室盆栽條件下以Pb4+含量為0 mg?kg-1、200 mg?kg-1、400 mg?kg-1和800 mg?kg-1土壤種植龍葵()10周后采集根際土壤, 采用Biolog微平板法測定龍葵根際土壤微生物群落的代謝變化。結(jié)果表明: 1)微生物平均代謝活性(AWCD)隨鉛濃度增加呈降—升—降趨勢; 接種AM真菌顯著提高了鉛脅迫下根際土壤微生物的AWCD值, 僅中濃度(400 mg?kg-1)下未達(dá)顯著差異。2)中濃度鉛處理能顯著提高根際土壤微生物對糖類及其衍生物、氨基酸類、脂肪酸和脂類及代謝產(chǎn)物類四大類碳源底物利用能力; 接種AM真菌, 高濃度(800 mg?kg-1)鉛處理顯著提高了根際土壤微生物對氨基酸類底物的利用能力。3)鉛脅迫下接種AM真菌提高了根際土壤微生物多樣性指數(shù), 在中濃度下豐富度指數(shù)、Shannon-Wiener多樣性指數(shù)、Simpson優(yōu)勢度指數(shù)均達(dá)顯著水平。4)主成分分析顯示, 代謝產(chǎn)物類在PC1和PC2中種類最多, 分別為6種和4種; 糖類及其衍生物在PC3中種類最多(5種)。5)在鉛脅迫和接種AM真菌共同作用下, 微生物碳源利用主要受鉛濃度調(diào)節(jié), 并且二者對微生物碳源利用具有顯著交互效應(yīng)。綜上可知, 接種AM真菌能夠提高鉛脅迫下龍葵根際土壤微生物多樣性指數(shù), 增強根際土壤微生物對碳源底物的利用能力。該研究為進(jìn)一步探究AM真菌強化植物聯(lián)合修復(fù)技術(shù)提供了依據(jù)。

    AM真菌; 龍葵; 鉛脅迫; 根際土壤; 微生物代謝特征; Biolog-ECO微平板

    全國土壤污染調(diào)查結(jié)果顯示, 我國土壤重金屬污染突出, 污染類型主要以鎘、鉛、銅、鋅等為主。目前, 全世界平均每年排放鉛約5×106t, 我國約有1.3×104hm2耕地受到鉛等重金屬嚴(yán)重污染, 致使糧食減產(chǎn)達(dá)1.0×107t[1]。土壤中鉛過量會使植物生長受到抑制[2], 影響植物光合作用和呼吸作用, 不利于植物對養(yǎng)分的吸收, 最終影響植物產(chǎn)量和質(zhì)量。傳統(tǒng)修復(fù)鉛污染土壤的方法不僅消耗成本高, 而且可能造成環(huán)境二次污染, 近年來興起的植物提取修復(fù)技術(shù)顯示出良好的應(yīng)用前景。但由于富集植物通常存在植株矮小、生長緩慢、生物量低等問題, 導(dǎo)致修復(fù)效率低、修復(fù)時間長[3]。土壤微生物不僅能促進(jìn)植物生長, 同時能利用其分泌的活性物質(zhì)改變重金屬形態(tài), 促進(jìn)植物對重金屬的吸收, 提高植物修復(fù)效率[4]。

    AM(arbuscular mycorrhiza)真菌是自然界分布最廣的一類真菌, 能與陸地上80%以上植物根系建立共生關(guān)系[5]。重金屬污染條件下, AM真菌與植物根系形成的共生體能促進(jìn)植物對營養(yǎng)元素的吸收, 增強植物抗逆性[6]; 提高植物在重金屬污染土壤中的耐受能力, 減輕重金屬對植物體的毒害[7]; 調(diào)節(jié)植株對重金屬的吸收和轉(zhuǎn)運, 使重金屬從土壤中高效移出, 實現(xiàn)生物修復(fù)[8-9]。研究證實, 接種AM真菌顯著提高了萬壽菊()對鎘的吸收, 增加鎘向地上部轉(zhuǎn)運[10]。接種AM真菌促進(jìn)了翅莢木()對重金屬的吸收, 提高了翅莢木植株重金屬累積量[11]。近年來AM真菌強化植物修復(fù)的作用和機理研究成為生物修復(fù)的一個熱點領(lǐng)域[12]。但是, 目前圍繞AM真菌在重金屬污染土壤生物修復(fù)作用中的研究主要集中在對植物生理代謝的調(diào)控、物理性防御體系的形成、生化拮抗物質(zhì)的產(chǎn)生及基因表達(dá)的調(diào)控等方面, 而從根際土壤微生態(tài)角度的研究尚不多見。因此, 研究重金屬污染下AM真菌對超富集植物根際土壤微生物群落代謝特征的影響, 對于進(jìn)一步理解AM真菌強化植物聯(lián)合修復(fù)機理具有重要意義。

    本試驗以重金屬超富集植物龍葵()為研究對象, 在不同Pb4+濃度處理下接種AM真菌, 應(yīng)用Biolog-ECO方法對比分析根際土壤微生物代謝功能多樣性, 旨在深入理解AM真菌影響宿主植物吸收、轉(zhuǎn)運和累積重金屬的作用機制, 為充分利用菌根生物技術(shù)強化植物修復(fù)重金屬污染土壤提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 供試土壤

    供試土壤采自河北省保定市郊區(qū)農(nóng)田, 其基本理化性質(zhì): 全氮0.89 g·kg-1, 全磷1.07 g·kg-1, 全鉀15.12 g·kg-1, 速效氮115.60 mg·kg-1, 速效磷24.48 mg·kg-1, 速效鉀348 mg·kg-1, 有機質(zhì)35.17 g·kg-1, 重金屬鉛含量為1.12 mg·kg-1(試驗中忽略不計), pH 6.82。土壤采回后, 風(fēng)干, 過2 mm篩, 除去石塊、植物根系等雜物。各處理均以一定量Pb(CH3COO)2·3H2O溶液噴灑到土壤里, 充分混勻。放置四周后裝入花盆, 每盆3 kg土壤。

    1.2 AM真菌

    供試AM真菌為摩西管柄囊霉()和幼套近明囊霉()(北京市農(nóng)林科學(xué)院提供), 接種菌劑為經(jīng)玉米擴(kuò)繁后獲得含有孢子、菌絲和侵染根段的混合物[摩西管柄囊霉的孢子密度為40.8 個?(10g)-1(土), 幼套近明囊霉的孢子密度為34.8 個?(10g)-1(土)], 裝入柱狀尼龍袋, 放入花盆內(nèi)土壤的中間部位, 接種劑量為基質(zhì)重量的7%, 接種方法見圖1。

    圖1 菌劑接種及播種方式

    1.3 試驗設(shè)計

    試驗為雙因素試驗: 因素一為接菌處理, 包括接種AM真菌和未接種AM真菌; 因素二為Pb4+處理, 包括0 mg?kg-1(CK)、200 mg?kg-1(Pb1, 低濃度)、400 mg?kg-1(Pb2, 中濃度)、800 mg?kg-1(Pb3, 高濃度)4個Pb4+濃度[根據(jù)《土壤環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(GB 15618-1995)設(shè)定Pb4+濃度]。共計8個處理, 即不接種AM真菌CK、Pb1、Pb2、Pb3和接種AM真菌AM+CK、AM+Pb1、AM+Pb2、AM+Pb3。每處理4個重復(fù)。

    1.4 龍葵的培育及樣品采集

    龍葵種子由北京市醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所提供。挑選大小一致飽滿的龍葵種子經(jīng)18 g?L-1稀HCl溶液室溫浸泡24 h[13], 用去離子水沖洗3次, 經(jīng)0.5% NaClO消毒20 min, 去離子水沖洗干凈, 取出擺放于濕濾紙上, 在25 ℃培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)48 h。挑選萌發(fā)一致的龍葵種子, 分別播種于不同處理的花盆內(nèi), 待幼苗出土后, 保留呈三角形分布的3株長勢一致的幼苗(圖1)。在光照16 h(28 ℃)、黑暗8 h(20 ℃)、光照強度為12 000 Lux的溫室中培養(yǎng)。10周后, 將龍葵根系從土壤中挖出, 慢慢抖掉與根系結(jié)合比較松散的土壤, 然后用滅菌鑷子刮取附著在根系上的薄層土壤作為根際土壤[14], 裝入自封袋, 4 ℃保存。

    1.5 測試及計算方法

    1.5.1 土壤微生物群落功能多樣性

    采用(Biolog-ECO)生態(tài)板分析微生物群落代謝特征。稱取相當(dāng)于10 g干重的鮮土, 加入90 mL無菌生理鹽水, 振搖30 min, 靜置沉淀3~5 min, 100倍稀釋, 以每孔150 μL稀釋液加入微孔板中。接種好的微平板放到鋪有6層濕紗布的塑料飯盒中, 塑料飯盒用保鮮膜包裹, 保鮮膜扎若干個小孔, 以保證微生物培養(yǎng)所需氧氣, Biolog-ECO生態(tài)板在30 ℃恒溫箱避光培養(yǎng)。于培養(yǎng)1~10 d后同一時間在酶標(biāo)儀上讀取微孔溶液在590 nm和750 nm的吸光值。

    1.5.2 土壤微生物代謝活性

    描述土壤微生物代謝活性常用微孔中溶液平均顏色變化率(average well color development, AWCD)[14], 計算公式:

    AWCD=∑(C-)(1)

    式中:C為碳源微孔吸光值,為對照孔吸光值,為Biolog微平板上供試碳源種類(=31)。

    1.5.3 土壤微生物多樣性指標(biāo)

    豐富度指數(shù)(): 被利用碳源總數(shù)目, 即(C?R)>0.25的孔數(shù)。

    Simpson優(yōu)勢度指數(shù)(): 表征微生物群落中最常見物種的優(yōu)勢度。

    =1-∑P2(2)

    式中:P為第孔相對吸光值與整個平板相對吸光值總和的比率。

    Shannon-Wiener多樣性指數(shù)(): 反映微生物群落物種及其個體數(shù)。

    =∑P×lnP (3)

    Mclntosh均勻度指數(shù)(): 反映微生物群落中個體分布的均勻程度。

    式中:n為第孔的相對吸光值(C-)。

    1.5.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

    采用SPSS 19.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析, 獨立樣本檢驗用于檢驗單個培養(yǎng)時間條件下AWCD值和微生物多樣性指數(shù)在鉛處理之間的差異顯著性(<0.05)。重復(fù)測量數(shù)據(jù)方差分析用于評價AM真菌對鉛脅迫下根際微生物碳源利用和多樣性的影響。主成分分析和多變量方差分析用于比較碳源利用在不同處理之間的總體差異顯著性。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 AM真菌對鉛脅迫下龍葵根際土壤微生物利用碳源動力學(xué)特征的影響

    AWCD反映土壤微生物群落對碳源利用的整體情況及利用活性。結(jié)果表明, 隨著培養(yǎng)時間延長, 微生物利用碳源的量逐漸增加, 24 h至96 h增長快速, 144 h后增長緩慢(圖2a-d)。與對照相比, 低濃度和高濃度鉛處理均降低了根際土壤微生物的AWCD, 中濃度鉛處理提高了AWCD(圖2b、2d、2c); 接種AM真菌明顯提高了根際土壤微生物代謝強度, 僅Pb4+濃度為400 mg·kg-1時未達(dá)顯著差異(<0.05)。方差分析結(jié)果表明, 鉛脅迫和接種AM真菌對龍葵根際微生物AWCD值均有顯著影響, 二者具有顯著交互效應(yīng)(表1,<0.05)。

    圖2 接種AM真菌對鉛脅迫下龍葵根際土壤微生物平均顏色變化率(AWCD)的影響

    CK: 未接種AM真菌, Pb4+為0 mg?kg-1; AM: 接種AM真菌; Pb1: Pb4+濃度為200 mg?kg-1(低濃度); Pb2: Pb4+濃度為400 mg?kg-1(中濃度); Pb3: Pb4+濃度為800 mg?kg-1(高濃度)。*和**分別表示在<0.05和<0.01水平差異顯著。CK: no AM with 0 mg?kg-1Pb4+; AM: inoculation of AM; Pb1: low Pb4+concentration(200 mg?kg-1); Pb2: medium Pb4+concentration (400 mg?kg-1); Pb3: high Pb4+concentration (800 mg?kg-1). * and ** mean significant difference at< 0.05 and< 0.01 levels, respectively.

    表1 接種AM真菌和鉛脅迫對各測定指標(biāo)影響的方差分析

    NS: 不顯著; *: 顯著水平為<0.05; **: 顯著水平為<0.01; ***: 顯著水平為<0.001。NS: no significant difference; *: significant difference at< 0.05; **: significant difference at< 0.01; ***: significant difference at< 0.001.

    2.2 AM真菌對鉛脅迫下龍葵根際土壤微生物多樣性指數(shù)的影響

    土壤微生物培養(yǎng)120 h時, 各處理間平均顏色變化率開始出現(xiàn)明顯差異, 本研究選取120 h的AWCD值分析根際土壤微生物群落多樣性。由表2可見, 鉛脅迫降低了根際土壤微生物群落的McIntosh均勻度指數(shù), 而對豐富度指數(shù)、Shannon-Wiener 指數(shù)和Simpson指數(shù)無顯著影響(<0.05); 同一Pb4+濃度處理下, 接種AM真菌提高了根際土壤微生物多樣性指數(shù), 并且在中濃度下豐富度指數(shù)、Shannon-Wiener指數(shù)和Simpson指數(shù)均達(dá)到顯著水平(<0.05)。方差分析結(jié)果表明, AM真菌對多樣性指數(shù)均有顯著影響, 鉛處理只對McIntosh指數(shù)有顯著影響, 二者對McIntosh指數(shù)有顯著交互效應(yīng)(表1)。

    表2 接種AM真菌對鉛脅迫下龍葵根際土壤微生物功能多樣性指數(shù)的影響

    CK: 未接種AM真菌, Pb4+為0 mg?kg-1; AM: 接種AM真菌; Pb1: Pb4+濃度為200 mg?kg-1(低濃度); Pb2: Pb4+濃度為400 mg?kg-1(中濃度); Pb3: Pb4+濃度為800 mg?kg-1(高濃度)。同列不同小寫字母分別表示接種AM真菌或未接種AM真菌處理下不同Pb4+濃度間差異顯著(<0.05); 同列不同大寫字母表示同一Pb4+濃度下接種AM和不接種AM處理間差異顯著(<0.05)。CK: no AM with 0 mg?kg-1Pb4+; AM: inoculation of AM; Pb1: low Pb4+concentration (200 mg?kg-1); Pb2: medium Pb4+concentration (400 mg?kg-1); Pb3: high Pb4+concentration (800 mg?kg-1). Different lowercase letters in the same column indicate significant differences among different concentrations of Pb4+at< 0.05. Different capital letters in the same column indicate significant differences between AM inoculation and no inoculation under the same Pb4+concentration at< 0.05.

    2.3 AM真菌對鉛脅迫下龍葵根際土壤微生物碳源利用強度的影響

    本試驗以微生物對三大營養(yǎng)物質(zhì)代謝途徑為基本劃分原則, 將Biolog-Eco的31種碳源底物分為4大類: 糖類及其衍生物、氨基酸類、脂肪酸和脂類、代謝產(chǎn)物類。利用各處理培養(yǎng)120 h的AWCD值分析土壤微生物利用碳源能力(表3)。不接種AM真菌處理, 中濃度Pb4+(Pb2)增強了土壤微生物對碳源的利用能力, 且對糖類及其衍生物、代謝產(chǎn)物類代謝能力的變化達(dá)顯著水平(<0.05); 接種AM真菌條件下, 鉛處理降低了土壤微生物對碳源的代謝能力, 且對脂肪酸和脂類、代謝產(chǎn)物類代謝能力的變化達(dá)顯著水平, 但4大類碳源底物代謝能力在不同鉛濃度間無顯著差異(<0.05)。

    表3 接種AM真菌對鉛脅迫下龍葵根際土壤微生物碳源利用強度的影響

    CK: 未接種AM真菌, Pb4+為0 mg?kg-1; AM: 接種AM真菌; Pb1: Pb4+濃度為200 mg?kg-1(低濃度); Pb2: Pb4+濃度為400 mg?kg-1(中濃度); Pb3: Pb4+濃度為800 mg?kg-1(高濃度)。同列不同小寫字母分別表示接種AM真菌或未接種AM真菌處理下不同Pb4+濃度間差異顯著(<0.05); 同列不同大寫字母表示同一Pb4+濃度下接種AM和不接種AM處理間差異顯著(<0.05)。CK: no AM with 0 mg?kg-1Pb4+; AM: inoculation of AM; Pb1: low Pb4+concentration (200 mg?kg-1); Pb2: medium Pb4+concentration (400 mg?kg-1); Pb3: high Pb4+concentration (800 mg?kg-1). Different lowercase letters in the same column indicate significant differences among concentrations of Pb4+at< 0.05. Different capital letters in the same column indicate significant differences between AM inoculation and no inoculation under the same Pb4+concentration at< 0.05.

    同一Pb4+濃度脅迫下, 接種AM真菌能增強土壤微生物對4大類碳源的代謝能力, 僅對氨基酸類影響顯著(<0.05)。方差分析結(jié)果表明, 接種AM真菌只對代謝產(chǎn)物類有顯著影響, 鉛處理對4類碳源都有顯著影響, 且二者對4類碳源的利用有顯著交互效應(yīng)(表1)。

    2.4 龍葵根際土壤微生物群落代謝特征主成分分析

    利用各處理培養(yǎng)120 h微生物群落對31種碳源代謝情況做主成分分析, 共提取6個主成分, 累積方差貢獻(xiàn)率達(dá)98.38%。其中第1主成分(PC1)、第2主成分(PC2)和第3主成分(PC3)方差貢獻(xiàn)率分別為27.25%、24.15%和21.64%, 其余主成分貢獻(xiàn)率較小, 因此選取前3個主成分得分值繪圖(PC1為軸, PC2為軸, PC3為軸)。從圖3可見, 不同處理根際土壤微生物群落代謝特征存在明顯差異。無論接種AM真菌與否, 中濃度Pb4+(Pb2)處理均集中分布在平面上, 高(Pb3)、低(Pb1)濃度Pb4+處理集中分布在平面上; 無鉛處理接種AM真菌分布在平面上。說明微生物碳源利用主要受鉛濃度調(diào)節(jié), 無鉛脅迫下AM真菌起主導(dǎo)作用。

    圖3 接種AM真菌和鉛脅迫下龍葵根際土壤微生物群落碳源代謝特征的主成分分析

    CK: 未接種AM真菌, Pb4+為0 mg?kg-1; AM: 接種AM真菌; Pb1: Pb4+濃度為200 mg?kg-1(低濃度); Pb2: Pb4+濃度為400 mg?kg-1(中濃度); Pb3: Pb4+濃度為800 mg?kg-1(高濃度)。CK: no AM with 0 mg?kg-1Pb4+; AM: inoculation AM; Pb1: low Pb4+concentration (200 mg?kg-1); Pb2: medium Pb4+concentration (400 mg?kg-1); Pb3: high Pb4+concentration(800 mg?kg-1).

    31種碳源主成分分析中的因子載荷可反映碳源利用的差異, 絕對值越大, 表明該基質(zhì)的影響越大, 在眾多碳源中起主要分異作用[15]。由表4可知, PC1中貢獻(xiàn)大的碳源(|載荷值|≥0.5)有14種(糖類及其衍生物5種, 氨基酸類1種, 脂肪酸和脂類2種, 代謝產(chǎn)物類6種); 對PC2貢獻(xiàn)大的碳源(|載荷值|≥0.5)有11種(糖類及其衍生物1種, 氨基酸類3種, 脂肪酸和脂類3種, 代謝產(chǎn)物類4種); PC3中貢獻(xiàn)大的碳源(|載荷值|≥0.5)有9種(糖類及其衍生物5種, 氨基酸類3種, 代謝產(chǎn)物類1種)。綜合分析, 糖類及其衍生物和代謝產(chǎn)物類碳源為各處理下微生物功能多樣性表現(xiàn)出差異的敏感碳源, 代謝產(chǎn)物類中的葡萄糖-1-磷酸鹽、4-羥基苯甲酸和D-蘋果酸, 在PC1和PC2載荷均達(dá)到0.5以上。

    3 討論

    平均顏色變化率(AWCD)是土壤微生物群落利用單一碳源能力的重要指標(biāo), 反映了土壤微生物利用碳源的能力和代謝活性的大小, 其值越高, 說明土壤微生物群落的代謝活性越強[16-17]。本研究結(jié)果表明, 不接種AM真菌時, 中濃度鉛處理的AWCD值明顯高于無鉛處理和低、高濃度鉛處理; 接種AM真菌后, 各鉛濃度處理的AWCD值均升高, 僅中濃度鉛處理未達(dá)顯著。說明根際土壤微生物群落對鉛脅迫有一個逐漸適應(yīng)的過程, 土壤環(huán)境受到鉛脅迫時, 土壤微生物為了維持生存可能需要更多能量, 從而使代謝活性增強[18], 當(dāng)鉛濃度超過某一閾值(400 mg·kg-1)時, 就會對土壤微生物造成不可逆轉(zhuǎn)的損傷, 因而代謝活性逐漸降低; 接種AM真菌緩解了鉛脅迫對根際土壤微生物生存環(huán)境的影響, 有利于土壤微生物發(fā)揮其代謝功能, 表現(xiàn)出較高的碳源利用率和代謝多樣性。AM真菌根外菌絲、泡囊以及叢枝結(jié)構(gòu)具有較大的比表面積, 對重金屬具有更強的生物吸附能力, 能夠固定更多重金屬, 同時AM真菌通過分泌球囊霉素相關(guān)土壤蛋白、低分子量有機酸等化合物與土壤中重金屬離子結(jié)合, 改變根際土壤重金屬形態(tài), 導(dǎo)致土壤中有效態(tài)重金屬含量下降, 提高了土壤對鉛的緩沖能力, 緩解了鉛的抑制作用, 使得土壤微生物活性以及碳源代謝能力有所恢復(fù)。Gadkar等[19]發(fā)現(xiàn), 高濃度重金屬脅迫下球囊霉素超表達(dá); 陳衛(wèi)莉等[20]的研究也表明, 鉛脅迫下接種AM真菌提高了土壤球囊霉素含量, 并且在含鉛、鋅的重污染土壤中, 球囊霉素相關(guān)蛋白優(yōu)先固定土壤中的鉛[21]。

    表4 接種AM真菌和鉛脅迫下龍葵根際土壤微生物Biolog-ECO板上碳源利用的主成分載荷矩陣

    土壤微生物Shannon-Wiener多樣性指數(shù)、Simpson優(yōu)勢度指數(shù)和McIntosh均勻度指數(shù)分別表征土壤微生物的豐富度、優(yōu)勢度和均勻度, 將3個指數(shù)結(jié)合可以反映土壤微生物群落的功能多樣性[22]。本研究中, 鉛處理顯著降低了根際土壤微生物群落的均勻度。房君佳等[23]也發(fā)現(xiàn), 水稻()田土壤中的鉛鋅尾礦砂通過抑制微生物生長, 造成水稻田土壤微生物群落結(jié)構(gòu)簡單。接種AM真菌顯著增加了低濃度(200 mg·kg-1)和中濃度(400 mg·kg-1)鉛處理下土壤微生物多樣性的Shannon-Wiener多樣性指數(shù)和Simpson優(yōu)勢度指數(shù)值。分析認(rèn)為可能是由于接種AM真菌后, AM真菌使宿主植物根際土壤pH、根系分泌物等發(fā)生變化, 土壤pH的變化影響重金屬鉛的移動性和生物有效性, 而根系分泌物為根際微生物提供能源和光合產(chǎn)物。利用變性梯度凝膠電泳技術(shù)對生長在重金屬污染土壤上的牧豆樹()根際土壤細(xì)菌和菌根的小亞基RNA分析發(fā)現(xiàn), 接種AM真菌可以改變牧豆樹根際土壤微生物的群落結(jié)構(gòu), 增加細(xì)菌、AM真菌等的生物多樣性[24]。Nogueira等[25]研究表明, 接種AM真菌能顯著提高宿主植物根際土壤錳-氧化細(xì)菌數(shù)量, 抑制錳-還原細(xì)菌的生成, 導(dǎo)致對錳的還原能力降低, 減少植物對錳的吸收。

    氮素是植物生長發(fā)育過程中必須的大量元素之一。周艷麗等[26]研究表明, 在重金屬鎘脅迫下, 水稻土壤溶液無機態(tài)氮含量顯著下降。本研究結(jié)果表明, 接種AM真菌顯著提高了高濃度鉛處理下土壤微生物對氨基酸類底物的利用能力。劉濤等[27]研究表明, 硝化抑制劑氯甲基吡啶隨尿素少量多次滴灌棉田后, 增加了土壤微生物的碳代謝強度、多樣性指數(shù)及豐富度指數(shù), 提高了土壤微生物對氨基酸及胺類的利用。可見, 接種AM真菌顯著改變了根際土壤微生物群落結(jié)構(gòu), 影響土壤微生物對氮素的轉(zhuǎn)化, 改善了土壤的微生態(tài)環(huán)境。

    4 結(jié)論

    鉛脅迫下接種AM真菌對超富集植物龍葵根際土壤微生物的影響隨Pb4+濃度的不同而發(fā)生變化。在中濃度(400 mg·kg-1)Pb4+處理下, 接種AM真菌能提高土壤微生物的AWCD值和對四大類碳源底物利用能力, 顯著增加了土壤微生物多樣性指數(shù)——豐富度指數(shù)、Shannon-Wiener多樣性指數(shù)和Simpson優(yōu)勢度指數(shù)。糖類及其衍生物和代謝產(chǎn)物類碳源為不同處理下微生物功能多樣性表現(xiàn)差異的敏感碳源。

    [1] 張敏, 郜春花, 李建華, 等. 重金屬污染土壤生物修復(fù)技術(shù)研究現(xiàn)狀及發(fā)展方向[J]. 山西農(nóng)業(yè)科學(xué), 2017, 45(4): 674–676 ZHANG M, GAO C H, LI J H, et al. Research status and development direction of bioremediation technique on heavy metal contaminated soil[J]. Journal of Shanxi Agricultural Sciences, 2017, 45(4): 674–676

    [2] 朱劍飛, 李銘紅, 謝佩君, 等. 紫花苜蓿、黑麥草和狼尾草對Cu、Pb復(fù)合污染土壤修復(fù)能力的研究[J]. 中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報, 2018, 26(2): 303–313 ZHU J F, LI M H, XIE P J, et al. Phytoremediation of single and combined pollution of Cu and Pb by,, and[J]. Chinese Journal of Eco-Agriculture, 2018, 26(2): 303–313

    [3] ALI H, KHAN E, SAJAD M A. Phytoremediation of heavy metals — Concepts and applications[J]. Chemosphere, 2013, 91(7): 869–881

    [4] RAJKUMAR M, SANDHYA S, PRASAD M N V, et al. Perspectives of plant-associated microbes in heavy metal phytoremediation[J]. Biotechnology Advances, 2012, 30(6): 1562–1574

    [5] SCHWARZOTT D, WALKER C, SCHü?LER A., the largest genus of the arbuscular mycorrhizal fungi (Glomales), is nonmonophyletic[J]. Molecular Phylogenetics and Evolution, 2001, 21(2): 190–197

    [6] 孫吉慶, 劉潤進(jìn), 李敏. 叢枝菌根真菌提高植物抗逆性的效應(yīng)及其機制研究進(jìn)展[J]. 植物生理學(xué)報, 2012, 48(9): 845–852 SUN J Q, LIU R J, LI M. Advances in the study of increasing plant stress resistance and mechanisms by arbuscular mycorrhizal fungi[J]. Plant Physiology Journal, 2012, 48(9): 845–852

    [7] DE ANDRADE S A L, DA SILVEIRA A P D. Mycorrhiza influence on maize development under Cd stress and P supply[J]. Brazilian Journal of Plant Physiology, 2008, 20(1): 39–50

    [8] 申鴻, 劉于, 李曉林, 等. 叢枝菌根真菌()對銅污染土壤生物修復(fù)機理初探[J]. 植物營養(yǎng)與肥料學(xué)報, 2005, 11(2): 199–204 SHEN H, LIU Y, LI X L, et al. Influence of arbuscular mycorrhizal fungus () on maize seedlings grown in copper contaminated soil[J]. Plant Nutrition and Fertilizer Science, 2005, 11(2): 199–204

    [9] MEIER S, BORIE F, BOLAN N, et al. Phytoremediation of metal-polluted soils by arbuscular mycorrhizal fungi[J]. Critical Reviews in Environmental Science and Technology, 2012, 42(7): 741–775

    [10] 劉靈芝, 張玉龍, 李培軍, 等. 鉛鋅礦區(qū)分離叢枝菌根真菌對萬壽菊生長與吸鎘的影響[J]. 土壤學(xué)報, 2012, 49(1): 43–49 LIU L Z, ZHANG Y L, LI P J, et al. Effect of arbuscular mycorrhizal fungi isolated from mining area on growth and Cd uptake ofL.[J]. Acta Pedologica Sinica, 2012, 49(1): 43–49

    [11] 李霞, 彭霞薇, 伍松林, 等. 叢枝菌根對翅莢木生長及吸收累積重金屬的影響[J]. 環(huán)境科學(xué), 2014, 35(8): 3142–3148 LI X, PENG X W, WU S L, et al. Effect of arbuscular mycorrhizae on growth, heavy metal uptake and accumulation ofChun seedlings[J]. Environmental Science, 2014, 35(8): 3142–3148

    [12] 祖艷群, 盧鑫, 湛方棟, 等. 叢枝菌根真菌在土壤重金屬污染植物修復(fù)中的作用及機理研究進(jìn)展[J]. 植物生理學(xué)報, 2015, 51(10): 1538–1548 ZU Y Q, LU X, ZHAN F D, et al. A review on roles and mechanisms of arbuscular mycorrhizal fungi in phytoremediation of heavy metals-polluted soils[J]. Plant Physiology Journal, 2015, 51(10): 1538–1548

    [13] 謝桂英, 游秀峰, 孫淑君, 等. 龍葵種子休眠解除方法研究[J]. 雜草科學(xué), 2013, 31(1): 37–39 XIE G Y, YOU X F, SUN S J, et al. A dormancy breaking technique forLseeds[J]. Weed Science, 2013, 31(1): 37–39

    [14] O'DONNELL A G, SEASMAN M, MACRAE A, et al. Plants and fertilisers as drivers of change in microbial community structure and function in soils[J]. Plant and Soil, 2001, 232(1/2): 135–145

    [15] ABAYE D A, LAWLOR K, HIRSCH P R, et al. Changes in the microbial community of an arable soil caused by long-term metal contamination[J]. European Journal of Soil Science, 2005, 56(1): 93–102

    [16] GARLAND J L. Analysis and interpretation of community-level physiological profiles in microbial ecology[J]. FEMS Microbiology Ecology, 1997, 24(4): 289–300

    [17] KONOPKA A, OLIVER L, TURCO JR R F. The use of carbon substrate utilization patterns in environmental and ecological microbiology[J]. Microbial Ecology, 1998, 35(2): 103–115

    [18] 廖敏, 陳雪花, 陳承利, 等. 土壤-青菜系統(tǒng)中鉛污染對土壤微生物活性及多樣性的影響[J]. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報, 2007, 27(2): 220–227 LIAO M, CHEN X H, CHEN C L, et alThe influence of lead contamination on soil-microbial activity and community structure diversity in a soil-greengrocery system[J]. Acta Scientiae Circumstantiae, 2007, 27(2): 220–227

    [19] GADKAR V, RILLIG M C. The arbuscular mycorrhizal fungal protein glomalin is a putative homolog of heat shock protein 60[J]. FEMS Microbiology Letters, 2006, 263(1): 93–101

    [20] 陳衛(wèi)莉, 趙曉改, 王浩, 等. Pb脅迫下接種叢枝菌根真菌對茶樹解毒能力的影響[J]. 河南科學(xué), 2014, 32(4): 511–515 CHEN W L, ZHAO X G, WANG H, et al. Effects of arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) inoculation on detoxification capacity of tea tree under Pb stress[J]. Henan Science, 2014, 32(4): 511–515

    [21] VODNIK D, GR?MAN H, MACěK I, et al. The contribution of glomalin-related soil protein to Pb and Zn sequestration in polluted soil[J]. Science of the Total Environment, 2008, 392(1): 130–136

    [22] STARK S, STR?MMER R, TUOMI J. Reindeer grazing and soil microbial processes in two suboceanic and two subcontinental tundra heaths[J]. Oikos, 2002, 97(1): 69–78

    [23] 房君佳, 李強, 劉暢, 等. 鉛鋅尾礦砂污染下的巖溶土壤微生物群落碳源代謝特征[J]. 環(huán)境科學(xué), 2018, 39(5): 2420–2430 FANG J J, LI Q, LIU C, et al. Carbon metabolism characteristics of the karst soil microbial community for Pb-Zn mine tailings[J]. Environmental Science, 2018, 39(5): 2420–2430

    [24] SOLíS-DOMíNGUEZ F A, VALENTíN-VARGAS A, CHOROVER J, et al. Effect of arbuscular mycorrhizal fungi on plant biomass and the rhizosphere microbial community structure of mesquite grown in acidic lead/zinc mine tailings[J]. Science of the Total Environment, 2011, 409(6): 1009–1016

    [25] NOGUEIRA M A, MAGALHAES G C, CARDOSO E J B N. Manganese toxicity in mycorrhizal and phosphorus-fertilized soybean plants[J]. Journal of Plant Nutrition, 2004, 27(1): 141–156

    [26] 周艷麗, 吳亮, 龍光強, 等. 鎘污染下不同類型水稻土氮素供應(yīng)特征及其影響因素[J]. 土壤, 2013, 45(5): 821–829ZHOU Y L, WU L, LONG G Q, et al. Characteristics and determinants for nitrogen supply of different types of paddy soils under spiked-cadmium conditions[J]. Soils, 2013, 45(5): 821–829

    [27] 劉濤, 梁永超, 褚貴新. 氯甲基吡啶對滴灌棉田土壤微生物群落功能多樣性的影響[J]. 中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報, 2017, 25(7): 968–974 LIU T, LIANG Y C, CHU G X. Effect of nitrapyrin on functional diversity of soil microbial community in drip-fertigated cotton field[J]. Chinese Journal of Eco-Agriculture, 2017, 25(7): 968–974

    Effect of arbuscular mycorrhizal fungi on metabolic characteristics of microbial community inrhizosphere soil with lead stress*

    HAN Juan, ZHANG Xiangqian, ZHAO Jinli**

    (College of Life Sciences, Hebei University, Baoding 071002, China)

    Pot experiments were conducted to explore the effect of arbuscular mycorrhiza (AM) fungi on the characteristics and differences in rhizosphere soils ofunder different levels of lead stress [0 mg?kg-1(CK), 200 mg?kg-1, 400 mg?kg-1, 800 mg?kg-1). To this end,was inoculated withand, and the resulting rhizosphere soils collected after 10 weeks of growth under 16 h/8 h, 28 ℃/20 ℃with 12 000 Lux light intensity in a greenhouse. The characteristics and differences in carbon metabolic profiles of microbes were evaluated using the Biolog-ECO micro-plate method. The results showed that: 1) the average metabolic activity of microorganisms, described by average well color development (AWCD), decreased-increased-decreased with increasing lead stress. Inoculation with AM fungi improved AWCD significantly under lead stresses, except for 400 mg·kg-1Pb4+. 2) The ability of soil microbes to utilize the four types of carbon substrates (carbohydrate and derivatives, fatty acid and lipids, amino acids, and metabolites) was higher under 400 mg·kg-1Pb4+than under low (200 mg·kg-1) and high (800 mg·kg-1) stresses of Pb4+. Inoculation with AM fungi significantly improved the ability of soil microbes to utilize amino acid substrates under high lead concentration. 3) Lead stress reduced McIntosh evenness index of rhizosphere soil microbial community, but had no significant impact on richness index, Shannon-Wiener diversity index and Simpson index. Inoculation with AM fungi increased microbial diversity index under lead treatment, and had significant effects on Species richness index, Shannon-Wiener diversity index and Simpson dominance index at medium stress. 4) Under the same Pb4+stress, inoculation of AM fungi enhanced metabolic capacity of soil microorganisms for the four major carbon sources, but only had significant effect on amino acids. Principal component analysis showed that metabolites were the most abundant in PC1 and PC2, with respective values of 6 and 4. Sugar was the most abundant in PC3. 5) Under combined effects of lead stress and AM fungi, microbial carbon source utilization was mainly regulated by lead concentration, both had significant interaction effects on microbial carbon source utilization. In conclusion, inoculation with AM fungi increased microbial diversity index of rhizosphere soils ofunder lead stress, and enhanced utilization of carbon source substrate by rhizosphere soil microbes. This study provided theoretical basis for the application of AM fungi which could strengthen the use of phytoremediation technology in soil remediation for heavy metal pollution.

    AM fungi;; Lead stress; Rhizosphere soil; Microbial metabolism characteristic; Biolog-ECO

    , E-mail: plant@hbu.edu.cn

    Nov. 29, 2018;

    Dec. 5, 2018

    10.13930/j.cnki.cjea.181036

    S154.3

    A

    2096-6237(2019)04-0545-09

    趙金莉, 主要從事土壤生態(tài)學(xué)方面的研究。E-mail: plant@hbu.edu.cn

    韓娟, 主要從事菌根生物技術(shù)方面的研究。E-mail: junhan_hbu@126.com

    2018-11-29

    2018-12-05

    * The study was supported by the Natural Science Foundation of Hebei Province (C2017201044) and the Student Innovation Training Project of Hebei University (2017126).

    * 河北省自然科學(xué)基金項目(C2017201044)和河北大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練項目(2017126)資助

    韓娟, 張向前, 趙金莉. 鉛脅迫下接種AM真菌對龍葵根際土壤微生物群落代謝特征的影響[J]. 中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(中英文), 2019, 27(4): 545-553

    HAN J, ZHANG X Q, ZHAO J L. Effect of arbuscular mycorrhizal fungi on metabolic characteristics of microbial community inrhizosphere soil with lead stress[J]. Chinese Journal of Eco-Agriculture, 2019, 27(4): 545-553

    猜你喜歡
    植物
    誰是最好的植物?
    為什么植物也要睡覺
    長得最快的植物
    各種有趣的植物
    植物也會感到痛苦
    會喝水的植物
    植物的防身術(shù)
    把植物做成藥
    哦,不怕,不怕
    將植物穿身上
    久久午夜亚洲精品久久| 国产精品 欧美亚洲| 麻豆一二三区av精品| 欧美精品亚洲一区二区| 欧美av亚洲av综合av国产av| 啦啦啦 在线观看视频| 一级片免费观看大全| 欧美丝袜亚洲另类 | 大型av网站在线播放| 亚洲成人久久爱视频| 国内精品久久久久精免费| 婷婷精品国产亚洲av| 美女午夜性视频免费| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久性视频一级片| 国产片内射在线| 白带黄色成豆腐渣| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 夜夜夜夜夜久久久久| 黄片播放在线免费| 老汉色∧v一级毛片| 黄片小视频在线播放| 1024视频免费在线观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 99国产精品一区二区三区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产伦人伦偷精品视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 香蕉久久夜色| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲九九香蕉| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产爱豆传媒在线观看 | 午夜精品在线福利| 免费一级毛片在线播放高清视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 黑丝袜美女国产一区| 国产国语露脸激情在线看| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久亚洲精品不卡| 久久久久九九精品影院| 国产精品一区二区免费欧美| 黄色 视频免费看| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 日本五十路高清| 一个人免费在线观看的高清视频| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 日日爽夜夜爽网站| 午夜免费成人在线视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产成人啪精品午夜网站| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 一区二区三区激情视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 性欧美人与动物交配| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产极品粉嫩免费观看在线| 成人亚洲精品av一区二区| 黄色丝袜av网址大全| 久久 成人 亚洲| 中文字幕av电影在线播放| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 国产成人系列免费观看| 欧美性猛交黑人性爽| 日本a在线网址| 麻豆国产av国片精品| 国产麻豆成人av免费视频| 99久久精品国产亚洲精品| svipshipincom国产片| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | xxx96com| 脱女人内裤的视频| 亚洲av片天天在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产亚洲av高清不卡| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 国产精品,欧美在线| 国产午夜精品久久久久久| 性色av乱码一区二区三区2| www.www免费av| 最新在线观看一区二区三区| 日韩欧美国产在线观看| 欧美日本视频| 亚洲电影在线观看av| 男人舔奶头视频| 午夜a级毛片| 国产亚洲欧美在线一区二区| 99久久无色码亚洲精品果冻| 日本一本二区三区精品| 久久久久亚洲av毛片大全| 精品国产乱码久久久久久男人| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲专区字幕在线| 宅男免费午夜| 青草久久国产| 中文字幕av电影在线播放| 久久欧美精品欧美久久欧美| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 色综合站精品国产| 婷婷丁香在线五月| 欧美日韩精品网址| 久久香蕉国产精品| 亚洲av电影不卡..在线观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 女性生殖器流出的白浆| 最新在线观看一区二区三区| 久久香蕉精品热| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 欧美丝袜亚洲另类 | 美国免费a级毛片| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| www.www免费av| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 黑丝袜美女国产一区| 免费看日本二区| 老司机在亚洲福利影院| 长腿黑丝高跟| 老司机午夜十八禁免费视频| av免费在线观看网站| 黄片小视频在线播放| 欧美日韩一级在线毛片| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 亚洲第一av免费看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 丁香六月欧美| 男女下面进入的视频免费午夜 | 手机成人av网站| 国产精品久久久人人做人人爽| 欧美乱妇无乱码| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 亚洲 国产 在线| 久久中文字幕一级| 久久久久久久久免费视频了| av天堂在线播放| 成人午夜高清在线视频 | 亚洲无线在线观看| 国产精品久久电影中文字幕| 久久精品人妻少妇| 夜夜爽天天搞| 日日夜夜操网爽| 无遮挡黄片免费观看| 久久亚洲真实| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲美女黄片视频| 青草久久国产| 亚洲国产欧美网| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 悠悠久久av| 最近在线观看免费完整版| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲国产精品999在线| 亚洲av第一区精品v没综合| 成人18禁在线播放| 亚洲美女黄片视频| 99riav亚洲国产免费| 免费一级毛片在线播放高清视频| 午夜福利一区二区在线看| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲色图av天堂| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲成a人片在线一区二区| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美激情极品国产一区二区三区| √禁漫天堂资源中文www| 欧美三级亚洲精品| 日韩视频一区二区在线观看| 国产精品一区二区免费欧美| 国产又色又爽无遮挡免费看| 久久久国产成人免费| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 在线av久久热| 老司机靠b影院| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久草成人影院| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 亚洲美女黄片视频| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲午夜理论影院| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 麻豆国产av国片精品| 超碰成人久久| 变态另类丝袜制服| svipshipincom国产片| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 免费搜索国产男女视频| 91九色精品人成在线观看| 他把我摸到了高潮在线观看| 在线av久久热| 18禁观看日本| av视频在线观看入口| 精品久久久久久久久久免费视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产亚洲精品av在线| 两个人免费观看高清视频| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲av五月六月丁香网| 极品教师在线免费播放| 久久午夜综合久久蜜桃| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 午夜福利视频1000在线观看| 岛国在线观看网站| or卡值多少钱| 欧美大码av| av天堂在线播放| 一本久久中文字幕| 白带黄色成豆腐渣| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 黄色丝袜av网址大全| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 日本 欧美在线| 国产激情偷乱视频一区二区| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲av电影在线进入| 国产片内射在线| 婷婷精品国产亚洲av在线| 精品久久久久久久末码| 热re99久久国产66热| 亚洲片人在线观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 熟女电影av网| 欧美zozozo另类| 波多野结衣巨乳人妻| 丰满的人妻完整版| 99久久综合精品五月天人人| 午夜福利高清视频| 大香蕉久久成人网| 国语自产精品视频在线第100页| av有码第一页| 欧美久久黑人一区二区| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | √禁漫天堂资源中文www| 波多野结衣高清无吗| www.www免费av| 搞女人的毛片| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 日韩欧美一区视频在线观看| 三级毛片av免费| 女同久久另类99精品国产91| 国产伦人伦偷精品视频| 国产激情欧美一区二区| 一进一出好大好爽视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产精品综合久久久久久久免费| 亚洲精品久久国产高清桃花| 日韩精品中文字幕看吧| 18禁国产床啪视频网站| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 亚洲国产精品999在线| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 好男人在线观看高清免费视频 | 看片在线看免费视频| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 午夜影院日韩av| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产亚洲精品一区二区www| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲av熟女| 高清在线国产一区| 国产99白浆流出| 免费高清视频大片| 麻豆成人午夜福利视频| 久久久久久久久中文| 国产亚洲精品第一综合不卡| 久久中文字幕一级| 午夜成年电影在线免费观看| 波多野结衣巨乳人妻| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 满18在线观看网站| 国产1区2区3区精品| 亚洲欧美日韩无卡精品| 老鸭窝网址在线观看| 伦理电影免费视频| 久久精品人妻少妇| 精品久久久久久久末码| 色播在线永久视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 亚洲欧美激情综合另类| 曰老女人黄片| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 很黄的视频免费| www日本在线高清视频| 日本 av在线| 最近最新免费中文字幕在线| 成人国语在线视频| 欧美中文日本在线观看视频| 亚洲最大成人中文| 国产免费av片在线观看野外av| 欧美乱妇无乱码| 国产在线精品亚洲第一网站| 欧美精品啪啪一区二区三区| 一进一出好大好爽视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| e午夜精品久久久久久久| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲久久久国产精品| 麻豆国产av国片精品| 中文字幕精品免费在线观看视频| 久久精品国产清高在天天线| 两性夫妻黄色片| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久香蕉国产精品| 真人做人爱边吃奶动态| 欧美性猛交黑人性爽| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久中文看片网| 国产精品 欧美亚洲| 国产真人三级小视频在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 久久精品人妻少妇| 很黄的视频免费| 男人舔女人的私密视频| 操出白浆在线播放| 999精品在线视频| 久久久久九九精品影院| 精品国产亚洲在线| 后天国语完整版免费观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 麻豆av在线久日| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产成人精品久久二区二区91| 欧美成狂野欧美在线观看| 欧美又色又爽又黄视频| 一级毛片高清免费大全| 最近最新中文字幕大全免费视频| 人人妻人人澡人人看| 中文亚洲av片在线观看爽| 欧美性猛交黑人性爽| 久久久久国产一级毛片高清牌| 精品不卡国产一区二区三区| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 欧美又色又爽又黄视频| 国产精品 国内视频| 国产精品野战在线观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产熟女午夜一区二区三区| 久久 成人 亚洲| 美女免费视频网站| 亚洲精华国产精华精| 亚洲人成网站高清观看| 国产在线观看jvid| 亚洲欧美激情综合另类| 亚洲一区二区三区色噜噜| 免费搜索国产男女视频| 99精品在免费线老司机午夜| 免费看a级黄色片| 夜夜爽天天搞| 怎么达到女性高潮| 亚洲国产精品sss在线观看| 视频在线观看一区二区三区| 国产1区2区3区精品| 午夜福利欧美成人| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 色在线成人网| 国产v大片淫在线免费观看| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 婷婷精品国产亚洲av在线| 免费在线观看亚洲国产| 国产野战对白在线观看| 老司机福利观看| 亚洲全国av大片| 亚洲精华国产精华精| 国产99久久九九免费精品| 亚洲精品在线观看二区| 制服丝袜大香蕉在线| 国产精品电影一区二区三区| 国产精品久久久人人做人人爽| 在线观看免费午夜福利视频| 午夜激情av网站| 90打野战视频偷拍视频| 欧美一级a爱片免费观看看 | 天堂动漫精品| 成年女人毛片免费观看观看9| 在线观看66精品国产| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 免费高清视频大片| 午夜日韩欧美国产| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲五月天丁香| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 久久国产精品影院| 国产亚洲精品久久久久5区| 欧美乱色亚洲激情| 色播亚洲综合网| 麻豆成人av在线观看| 日韩高清综合在线| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产在线精品亚洲第一网站| 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 一区二区三区国产精品乱码| 日本免费a在线| 亚洲最大成人中文| 一边摸一边抽搐一进一小说| 色哟哟哟哟哟哟| 日韩有码中文字幕| 久久欧美精品欧美久久欧美| 婷婷丁香在线五月| 国产精品,欧美在线| 人人澡人人妻人| 国产成年人精品一区二区| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲av成人一区二区三| 99国产精品一区二区蜜桃av| 成人特级黄色片久久久久久久| 麻豆成人午夜福利视频| 男女午夜视频在线观看| 午夜久久久在线观看| 宅男免费午夜| 看免费av毛片| 香蕉丝袜av| 搞女人的毛片| www.www免费av| 欧美日韩黄片免| 国产真实乱freesex| 婷婷精品国产亚洲av在线| 中出人妻视频一区二区| 欧美午夜高清在线| 国产99久久九九免费精品| 嫩草影院精品99| 欧美性长视频在线观看| a在线观看视频网站| 一区二区三区高清视频在线| 久久这里只有精品19| 国产高清视频在线播放一区| 久久九九热精品免费| 香蕉久久夜色| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 不卡一级毛片| 在线观看免费日韩欧美大片| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲电影在线观看av| 高清毛片免费观看视频网站| 一边摸一边做爽爽视频免费| 欧美午夜高清在线| 成人国语在线视频| 免费看a级黄色片| 国产成人av教育| 免费在线观看影片大全网站| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 身体一侧抽搐| 男人的好看免费观看在线视频 | 美国免费a级毛片| 一个人免费在线观看的高清视频| 色播在线永久视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 真人做人爱边吃奶动态| 国产三级黄色录像| 国产精品电影一区二区三区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 黄片播放在线免费| 免费在线观看完整版高清| 在线播放国产精品三级| 亚洲熟妇熟女久久| 一本大道久久a久久精品| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 麻豆成人av在线观看| 操出白浆在线播放| 国产不卡一卡二| 最近最新中文字幕大全电影3 | 人人澡人人妻人| 日韩视频一区二区在线观看| 亚洲专区国产一区二区| 午夜老司机福利片| avwww免费| 淫妇啪啪啪对白视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产视频一区二区在线看| 免费在线观看黄色视频的| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 成人亚洲精品一区在线观看| 欧美精品亚洲一区二区| 日韩有码中文字幕| 国产又色又爽无遮挡免费看| 午夜免费鲁丝| 18禁美女被吸乳视频| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲人成伊人成综合网2020| 黄色女人牲交| 看黄色毛片网站| 亚洲av电影在线进入| 午夜日韩欧美国产| 精品国产亚洲在线| 日日干狠狠操夜夜爽| 亚洲国产精品合色在线| 18禁美女被吸乳视频| 国产精品99久久99久久久不卡| 在线观看午夜福利视频| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 亚洲黑人精品在线| 一级a爱视频在线免费观看| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 国产在线精品亚洲第一网站| 久久天堂一区二区三区四区| 在线播放国产精品三级| 国产一卡二卡三卡精品| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲,欧美精品.| 淫妇啪啪啪对白视频| 久久精品影院6| 成人欧美大片| 亚洲熟妇熟女久久| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲av电影在线进入| 91九色精品人成在线观看| 免费观看人在逋| 国产精品久久久久久精品电影 | 草草在线视频免费看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 欧美黑人欧美精品刺激| 免费在线观看日本一区| 色综合站精品国产| 国产熟女xx| 日本免费a在线| 亚洲一区中文字幕在线| av超薄肉色丝袜交足视频| 熟女电影av网| 给我免费播放毛片高清在线观看| 妹子高潮喷水视频| av福利片在线| 波多野结衣高清无吗| 亚洲免费av在线视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 可以在线观看毛片的网站| 老鸭窝网址在线观看| 此物有八面人人有两片| 在线播放国产精品三级| 俄罗斯特黄特色一大片| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产v大片淫在线免费观看| 哪里可以看免费的av片| 色老头精品视频在线观看| 一进一出抽搐动态| 国产免费av片在线观看野外av| 9191精品国产免费久久| 午夜福利视频1000在线观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 日日爽夜夜爽网站| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产男靠女视频免费网站| 精品第一国产精品| 51午夜福利影视在线观看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日本三级黄在线观看| 午夜福利免费观看在线| 一区二区三区激情视频| 特大巨黑吊av在线直播 | 激情在线观看视频在线高清| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产不卡一卡二| 亚洲av片天天在线观看| 国产精华一区二区三区| 亚洲国产看品久久| 色播在线永久视频| 香蕉国产在线看| 男人舔女人下体高潮全视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 成人手机av| www日本黄色视频网| 一区二区三区国产精品乱码| 一区二区三区精品91| 美女午夜性视频免费| 成人精品一区二区免费| 大香蕉久久成人网| 男女下面进入的视频免费午夜 | 亚洲精品粉嫩美女一区| 在线观看66精品国产| 免费看日本二区| 成人免费观看视频高清| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 特大巨黑吊av在线直播 | av免费在线观看网站| 国产97色在线日韩免费| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产精品1区2区在线观看.| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 黄色成人免费大全| 狂野欧美激情性xxxx| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲成人免费电影在线观看| 校园春色视频在线观看| 免费高清在线观看日韩| 国产成人欧美|