三種植物源增殖性底物 對嗜酸乳桿菌發(fā)酵及蛋白表達的影響

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(1.天津商業(yè)大學(xué)生物技術(shù)與食品科學(xué)學(xué)院,天津市食品生物技術(shù)重點實驗室,天津 300134; 2.河北一然生物科技有限公司,河北石家莊 050899)

目前,有關(guān)益生菌的發(fā)酵生產(chǎn)以及功能評價一直是生物發(fā)酵領(lǐng)域的研究主題,使用較多的是乳桿菌屬和雙歧桿菌屬。日本、歐洲、澳大利亞、美國等國的益生菌制品在功能性食品市場份額上占有很大的比重。現(xiàn)如今益生菌產(chǎn)品開發(fā)的新方向還包括:減肥降脂食品、孕嬰食品、宇航食品、運動食品、減壓食品、過敏人群食品、減少損害食品[1]等。研究表明,益生菌能改善宿主微生態(tài)平衡、發(fā)揮有益作用并產(chǎn)生確切的健康療效,對宿主健康具有非常重要的作用,因此在生物工程、工農(nóng)業(yè)、食品安全等領(lǐng)域[2]均有廣泛應(yīng)用,也是研究的熱點。嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)是目前乳酸菌家族中研究與開發(fā)比較廣泛的益生菌之一,是人體腸道中重要的微生物,被視為第三代乳酸發(fā)酵劑菌種[3]。報道指出,L.acidophilus具有平衡腸道微生物區(qū)系、調(diào)節(jié)腸道功能紊亂、增強機體腸粘膜屏障、調(diào)節(jié)腸道內(nèi)免疫系統(tǒng)、抗癌抗腫瘤的作用[4-5]。L.acidophilusCICC6005 屬于革蘭氏G+,無芽孢桿菌科的乳桿菌屬,以短鏈、單個、成對等形式存在于人及一些動物腸道中,其最適生長溫度為35～38 ℃,最適pH為5.5～6.2[6]，具有耐酸、耐膽汁酸鹽的特性,能通過胃進入腸道,代謝乳糖產(chǎn)生乳酸、細菌素等[7]物質(zhì);因L.acidophilusCICC6005的主要代謝產(chǎn)物是有機酸,可降低環(huán)境中的氧化還原電位和pH,抑制酸性細菌和需氧細菌生長,這是該菌發(fā)揮益生作用的主要原因[8]。因此,對其進行更深一步的研究是非常必要的。

已有研究表明,益生菌分泌的一些代謝產(chǎn)物具有免疫調(diào)節(jié)作用,能夠促進腸道穩(wěn)態(tài),在保健食品的開發(fā)研究中具有顯著的開發(fā)潛力[9]。Schlee等[10]研究發(fā)現(xiàn)，L.acidophilusPZ 1138、發(fā)酵乳桿菌PZ 1162,干酪乳桿菌干酪亞種LMGP.17806混合益生菌分泌的胞外蛋白可以通過激活NF-kB和MAPK信號通路誘導(dǎo)上皮細胞抗菌肽hβD-2的分泌。Bernaro等[11]研究發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌分泌的肽類物質(zhì)可以誘導(dǎo)人類腸道樹突細胞產(chǎn)生白細胞介素-10(interleukin,IL-10),IL-10對炎癥、自身免疫疾病的預(yù)防和腸道穩(wěn)態(tài)的維持有很重要的作用。

目前本實驗室對L.acidophilusCICC6005也進行了一定的研究,賈彥等[12-13]研究了不同質(zhì)量濃度的杜仲水提液添加到MRS培養(yǎng)基中,旨在探究不同質(zhì)量濃度的杜仲水提液對L.acidophilusCICC6005菌株增殖情況及對發(fā)酵過程中胞外和胞內(nèi)蛋白含量變化的影響,并對其蛋白組分進行分析。結(jié)果顯示添加適宜質(zhì)量濃度的杜仲水提液對L.acidophilusCICC6005菌株的增殖起到了一定的促進作用,并對其發(fā)酵產(chǎn)物組成產(chǎn)生了一定的影響。在此研究基礎(chǔ)上為更好地探究和利用L.actobacillusCICC6005的生物學(xué)功能,解析該菌表現(xiàn)生物學(xué)功能的活性成分,本研究進一步從基礎(chǔ)培養(yǎng)基(TJA)出發(fā),通過添加不同的增殖性底物,篩選并優(yōu)化促進L.actobacillusCICC6005菌株增殖的組合促進劑;同時重點分析鑒定該組合促進劑對發(fā)酵L.actobacillusCICC6005的胞內(nèi)和胞外蛋白質(zhì)的作用,探討對該菌表達蛋白質(zhì)的影響,對闡述該菌的益生功能具有科學(xué)意義。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

番茄、蘋果、土豆 天津市水木天成店物美超市,體型飽滿,無病蟲害;嗜酸乳桿菌CICC6005(L.acidophilusCICC6005) 本實驗室保藏菌種;MRS肉湯培養(yǎng)基、TJA培養(yǎng)基 購自北京奧博星生物技術(shù)有限公司；十二烷基硫酸鈉(SDS) 上海威奧科技有限公司;TEMED 碧云天生物技術(shù)研究所;葡聚糖凝膠SephadexG-100 北京索萊寶科技有限公司;30%丙烯酰胺 Solarbio公司;1.0 mol/L Tris-HClSolarbio公司;過硫酸銨 天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司;考馬斯亮藍R-250 Sigma公司;細菌總蛋白抽提試劑盒 上海生工生物工程股份有限公司;BCA蛋白定量試劑盒 北京康為世紀生物科技有限公司。

MuLtiskan MK3Thermo酶標(biāo)儀 Thermo 公司;3-18KS高速冷凍離心機 Sigma公司;TD5Z低速離心機 Aida公司;DYCZ-24DN迷你雙垂直電泳槽 北京六一儀器廠;24DN制膠器 北京六一儀器廠;DYY-2C電泳儀 北京六一儀器廠;T6新世紀紫外分光光度計 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;OHG-9073BS-Ⅲ電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司;SPX-250BS-Ⅱ生化培養(yǎng)箱 上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司;XW-80A微型漩渦混合儀 上海滬西分析儀器有限公司;HYG-Ⅲ廻轉(zhuǎn)式恒溫搖瓶柜 上海欣蕊自動化設(shè)備有限公司;CXG-1電腦恒溫層析柜 上海瀘西分析儀器廠有限公司;BT-100恒流泵 上海瀘西分析儀器廠有限公司;1H1D-5電腦紫外檢測儀 上海瀘西分析儀器廠有限公司;BS-100A自動部分收集器 上海瀘西分析儀器廠有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 番茄汁、蘋果汁、土豆汁的制備 番茄汁的制備:將新鮮番茄切碎(勿搗碎),置于4 ℃冰箱中8～12 h至到有上清液析出,紗布過濾即得;蘋果汁、土豆汁的制備:將新鮮蘋果、土豆洗凈,切成邊長為0.5 cm左右的小丁,各稱取150 g,加水煮沸15 min,定容至500 mL,過濾取上清。將以上汁液(作為植物源增殖性底物)分裝,121 ℃,滅菌15 min,4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2L.acidophilusCICC6005種子液的配制 以TJA培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,將凍存的L.acidophilusCICC6005菌種于固體斜面培養(yǎng)基上活化24～36 h,再轉(zhuǎn)接于MRS活化24 h,以此作為種子液。

1.2.3 單因素實驗設(shè)計 前期通過預(yù)實驗確定了L.acidophilusCICC6005菌株在TJA培養(yǎng)基上的生長情況,在此基礎(chǔ)上,將番茄汁、蘋果汁、土豆汁分別稀釋成0%、2%、4%、6%、8%的濃度,分別取2 mL逐個加入48 mL TJA液體培養(yǎng)基中,調(diào)節(jié)pH為6.2,為5組實驗組,另取2 mL蒸餾水添加到48 mL TJA液體培養(yǎng)基中作為對照組,以上5組分別做3個平行實驗,121 ℃滅菌15 min,實驗組和對照組均按2%接種量接入L.acidophilusCICC6005菌株,在37 ℃下培養(yǎng)24 h后,得到的菌懸液用平板計數(shù)法測定活菌數(shù)[14]。

1.2.4 正交試驗設(shè)計 在單因素實驗的基礎(chǔ)上,對番茄汁、土豆汁、蘋果汁進行3因素3水平正交試驗[15-16]見表1。在600 nm[17]下測定懸菌液的OD值(OD值與活菌數(shù)在同一介質(zhì)溶液中呈線性相關(guān),為避免計算存在的誤差,正交試驗結(jié)果以O(shè)D600 nm下測定的吸光度為指標(biāo)),得出影響條件的主次順序及各因素對反應(yīng)的影響程度,選取最優(yōu)組合。

表1 正交試驗因素水平表Table 1 Factors and levelsTable of orthognal experiment

1.2.5L.acidophilusCICC6005菌體胞外蛋白和胞內(nèi)蛋白的提取 胞內(nèi)蛋白的提取:將以上最優(yōu)組合發(fā)酵液于4 ℃離心,10000 r/min,10 min,分離上清液和菌體。收集移出的上清液,并于4 ℃條件下保存。沉淀的菌體用2 mL預(yù)冷的 0.01 mol/mL磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer saline,PBS)振蕩洗滌,10000 r/min離心10 min,除去上清液,沉淀即為胞內(nèi)蛋白,將其存放于-20 ℃條件下保存[18-19]。

胞外蛋白的提取:采用TCA-丙酮沉淀法濃縮胞外蛋白。上清液與TCA以體積比4∶1混合,4 ℃條件下處理60 min,4 ℃條件下14000 r/min離心20 min,棄去上清液。用預(yù)冷丙酮溶液反復(fù)洗去蛋白沉淀中的TCA,4 ℃條件下14000 r/min離心5 min棄上清液,待丙酮完全揮發(fā),用0.01 mol/L PBS溶解沉淀,與-20 ℃條件下存放[20-21]。蛋白質(zhì)濃度的測定采用BCA法,具體操作按照試劑盒說明書。

對照組蛋白為1.2.3對照組培養(yǎng)后所得懸菌液提取的粗蛋白。

1.2.6L.acidophilusCICC6005胞內(nèi)和胞外蛋白的純化 采用凝膠過濾層析法將Sephadex G-100凝膠柱(1.6 cm×50 cm)用0.05 moL/L的PBS緩沖液(pH7.4)平衡好溶脹好后,取胞外或胞內(nèi)蛋白2 mL進行上樣,然后用緩沖液以1 mL/min的流速進行洗脫,用紫外檢測儀在波長280 nm處檢測,并用核酸、蛋白檢測系統(tǒng)收集信號,收集各峰組分;用PEG 10000包埋濃縮[22-23]。

1.2.7 SDS-PAGE凝膠電泳鑒定蛋白質(zhì)的分子量大小 聚丙烯酰胺凝膠電泳是根據(jù)不同的蛋白質(zhì)具有不同的電荷,能產(chǎn)生不同的遷移率,從而將蛋白質(zhì)分離成若干條譜帶。SDS能將分子間和分子內(nèi)的氫鍵和疏水鍵斷裂,以一定的比例與蛋白質(zhì)分子結(jié)合成復(fù)合物,使蛋白質(zhì)不再受電荷的影響,只與分子大小有關(guān),當(dāng)分子量在15～200 ku之間時,蛋白質(zhì)的遷移率和分子量的對數(shù)呈線性關(guān)系[24]。凝膠電泳遷移率是根據(jù)SDS-PAGE凝膠電泳結(jié)果圖,以蛋白質(zhì)Marker中各蛋白迀移率X作為橫坐標(biāo),以標(biāo)準蛋白質(zhì)分子量的對數(shù)為縱坐標(biāo)作圖,根據(jù)標(biāo)準曲線得出各峰的蛋白分子量大小。將培養(yǎng)好的L.acidophilusCICC6005 的胞內(nèi)胞外蛋白粗提液及兩組胞內(nèi)蛋白、胞外蛋白組進行SDS-PAGE 凝膠電泳分析,判斷胞外胞內(nèi)蛋白組分分子量大小。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度增殖性底物對L. acidophilus CICC6005活菌數(shù)的影響

本研究以TJA為基礎(chǔ)培養(yǎng)基考察L.acidophilusCICC6005的生長狀況,經(jīng)平板計數(shù),L.acidophilusCICC6005活菌數(shù)可達5.38×109CFU/mL。隨后考察不同增殖性底物對L.acidophilusCICC6005生長的影響。

在增殖培養(yǎng)基中，添加的增殖性底物中含有豐富的營養(yǎng)成分[25]，會對菌株生長產(chǎn)生一定的影響，不同增殖性底物對L.acidophilusCICC6005生長的影響如圖1所示。由圖1可知，隨著增殖性底物濃度的增大，活菌數(shù)均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。當(dāng)番茄汁濃度為4%～6%時，活菌數(shù)較高，對L.acidophilusCICC6005的生長促進作用較大；當(dāng)番茄汁濃度為8%時，對菌的生長產(chǎn)生了明顯的抑制作用，這是由于番茄汁添加量的增大，其含有的糖類物質(zhì)濃度相應(yīng)增加，導(dǎo)致L.acidophilusCICC6005生存環(huán)境中的滲透壓升高，從而抑制了菌的增殖[26]。在蘋果汁濃度為4%時，活菌數(shù)達到最高，對L.acidophilusCICC6005的生長促進作用達到最大。當(dāng)蘋果汁濃度過大(8%)時，對菌的生長產(chǎn)生抑制作用，蘋果汁中含有多糖、維生素以及有機酸類物質(zhì)[27]，隨著蘋果汁濃度的增大，使培養(yǎng)基中多糖、維生素含量偏高，增大培養(yǎng)基的滲透壓，抑制了L.acidophilusCICC6005的生長。當(dāng)土豆汁濃度為2%～4%時，對菌的生長促進作用也較大。土豆中富含淀粉、氨基酸、維生素以及無機鹽，可為L.acidophilusCICC6005提供生長所需的碳源、氮源、以及生長因子[28]。土豆汁濃度過高時，同樣使活菌數(shù)下降，對L.acidophilusCICC6005的生長不利。綜上，選擇的較優(yōu)番茄汁濃度為5%，蘋果汁濃度為4%，土豆汁濃度為3%。

圖1 不同濃度增殖性底物對L. acidophilus CICC6005活菌數(shù)的影響Fig.1 Effect of different concentration of growth promoting substance on the growth of L. acidophilus CICC6005

2.2 正交試驗結(jié)果

按照正交試驗表1設(shè)計,考察三種植物源增殖性底物的組合對L.acidophilusCICC6005在TJA培養(yǎng)基共培養(yǎng)所表現(xiàn)的對菌體增殖能力的影響,結(jié)果見表2所示。

表2 正交試驗設(shè)計及結(jié)果Table 2 Design and results of orthogonal experiment

由K值分析比較可得出，較優(yōu)試驗組合為A2B2C1，即番茄汁濃度5%、土豆汁濃度3%、蘋果汁濃度2%，此時測得OD值為0.694，L.acidophilusCICC6005活菌數(shù)達2.31×1010CFU/mL。由R值分析比較可得，RC>RB>RA，即：影響L.acidophilusCICC6005生長濃度各因素的主次順序為：C(番茄汁濃度)、B(土豆汁濃度)、A(蘋果汁濃度)。

2.3 L.acidophilus CICC6005胞內(nèi)和胞外蛋白分析鑒定結(jié)果

2.3.1L.acidophilusCICC6005發(fā)酵液胞內(nèi)和胞外全蛋白分析 按方法1.2.5所述,分離提取發(fā)酵液和菌體的全蛋白,均按照BCA試劑盒法測定發(fā)酵液和菌體的蛋白質(zhì)含量。采用SDS-PAGE進行分析,結(jié)果見圖2所示。

圖2 L. acidophilus CICC6005胞內(nèi)胞外 全蛋白SDS-PAGE電泳結(jié)果Fig.2 The result of SDS-PAGE electrophoresis of intracellular and extracellular protein of L. acidophilus CICC6005 注:M：Marker;1：對照組; 2：未純化的胞內(nèi)全蛋白;3:未純化的胞外全蛋白。

由圖2可看出,L.acidophilusCICC6005胞外全蛋白對應(yīng)的泳帶中包含6條主條帶,分別位于80、75、63、48、40、30 ku附近,未純化的胞內(nèi)全蛋白與對照組相比,泳帶明顯增多,說明植物源增殖性底物對L.acidophilusCICC6005菌體蛋白表達具有一定的促進作用。未純化的胞外全蛋白與對照組相比,泳帶也明顯增多的原因,這可能是由于菌體產(chǎn)蛋白酶含量降低有關(guān)。

2.3.2L.acidophilusCICC6005菌體胞外胞內(nèi)蛋白的純化 依據(jù)1.2.6所建立的方法對含有植物源增殖性底物發(fā)酵生產(chǎn)的發(fā)酵液和菌體的蛋白進行純化,凝膠過濾層析是根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同而達到分離效果的,凝膠過濾填料中含有大量微孔,只容許緩沖液及小分子量蛋白質(zhì)通過,而大分子蛋白質(zhì)及一些蛋白復(fù)合物則被阻擋在外[29]。

采用最優(yōu)試驗組合A3B2C3的粗提蛋白進行純化,所得層析圖譜如圖3、圖4所示。由于菌體胞內(nèi)和胞外蛋白含量的不同,所以在對蛋白進行層析時胞內(nèi)蛋白和胞外蛋白層析圖譜上均出現(xiàn)兩個明顯的洗脫峰,將其命名為a、b、c、d四個峰，用BCA法和通過標(biāo)準曲線測定a、b、c、d四個峰的蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度,依次為2.144、0.744、2.394、4.644 mg/mL。對各峰分別進行收集,對收集的各峰組分進行透析、濃縮備用。

圖3 L. acidophilus CICC6005胞內(nèi)蛋白層析圖譜Fig.3 Intracellular protein chromatography of L. acidophilus CICC6005注:圖中a、b分別指凝膠層析Sephadex G-100 分離獲得的菌體內(nèi)的兩個主要蛋白質(zhì)峰。

圖4 L. acidophilus CICC6005胞外蛋白層析圖譜Fig.4 Extracellular protein chromatography of L. acidophilus CICC6005注:圖中c、d分別指凝膠層析Sephadex G-100 分離獲得的發(fā)酵液中的兩個主要蛋白質(zhì)峰。

2.3.3 SDS-PAGE 凝膠電泳鑒定各峰組分蛋白質(zhì)的分子量大小 對最優(yōu)試驗組合A3B2C3培養(yǎng)L.acidophilusCICC6005 的胞內(nèi)胞外蛋白粗提液及兩組胞內(nèi)蛋白(a、b)、胞外蛋白組進行(c、d)SDS-PAGE凝膠電泳分析,判斷胞外胞內(nèi)蛋白組分分子量大小,結(jié)果如圖5。由圖5可知,胞內(nèi)蛋白a峰的泳帶集中在48～90 ku附近,b峰在18 ku附近處有一條清晰的電泳條帶;胞外蛋白c峰在分子量18、35、48、64 ku附近有較清晰的條帶,d峰在37、48 ku附近處有清晰泳帶。相比未純化的胞內(nèi)胞外全蛋白,當(dāng)TJA營養(yǎng)培養(yǎng)基中加入植物源增殖性底物時,L.acidophilusCICC6005各組分蛋白條帶較清晰,差異明顯,說明經(jīng)Sephadex G-100凝膠層析后也實現(xiàn)了較好的分離。

圖5 L. acidophilus CICC6005胞外胞內(nèi) 蛋白SDS-PAGE電泳結(jié)果Fig.5 The results of SDS-PAGE electrophoresis of extracellular and intracellular protein of L. acidophilus CICC6005

2.3.4 凝膠電泳遷移率標(biāo)準曲線 標(biāo)準曲線如圖6,得到回歸方程為y=-1.3029x+2.3431(R2=0.977)根據(jù)標(biāo)準曲線得出各峰的蛋白分子量大小,即胞內(nèi)蛋白的分子量為a峰59 ku、b峰17 ku;胞外蛋白的分子量為c峰66 ku、d峰35 ku。

圖6 凝膠電泳遷移率標(biāo)準曲線Fig.6 Standard curve of gel electrophoresis mobility

3 討論

益生菌是一類通過改善宿主腸道微生物菌群的平衡而發(fā)揮作用的活性微生物,其能夠調(diào)節(jié)胃腸道失調(diào),在抗癌抗腫瘤、預(yù)防肥胖、抗過敏、提高免疫功能等有良好的功效[30]。番茄、土豆、蘋果是我們?nèi)粘Ｉ钏婕暗氖巢?對人體腸道微生物的菌群消長有著較為密切關(guān)系。

李輝等[31]研究了黃瓜、番茄、胡蘿卜天然提取汁對嗜酸乳桿菌HS112菌種生長的影響。由單因素實驗結(jié)果得出,黃瓜汁的5%、番茄汁的6%、胡蘿卜汁為8%為HS112菌種的最佳刺激體積分數(shù)。劉奕瑋等[32]研究了藍莓汁及其提取物對嗜酸乳桿菌NCFM體外生長的影響,藍莓多糖添加量為100 mg/L時能較好的促進菌株NCFM的生長,37 ℃培養(yǎng)24 h,細胞活菌數(shù)可達到8.32×108CFU/mL。王烈喜等[33]研究了番茄汁對嗜酸乳桿菌發(fā)酵乳的影響,結(jié)果表明:番茄汁可以刺激嗜酸乳桿菌的生長,在冷藏的過程中,所有添加番茄汁的發(fā)酵乳中嗜酸乳桿菌的活菌數(shù)顯著高于純樣品。

基于該研究方面的早期報道,本實驗探究植物源增殖性底物對L.acidophilusCICC6005菌體的發(fā)酵增殖作用也獲得了類似的研究結(jié)果。本研究以L.acidophilusCICC6005為研究對象,基于人類日常攝入多種果蔬食材的習(xí)慣和特點,以TJA作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,通過添加適量的番茄汁、土豆汁、蘋果汁發(fā)酵培養(yǎng)L.acidophilusCICC6005,對該菌生物量影響是明顯的,在這樣的發(fā)酵培養(yǎng)基組成的條件下,L.acidophilusCICC6005菌體濃度達到2.31×1010CFU/mL的水平。本文重點研究并解析發(fā)酵菌體蛋白質(zhì)表達水平的變化,為闡述和揭示該菌的生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ);研究結(jié)果顯示,三種增殖性底物添加的濃度番茄汁5%、土豆汁3%、蘋果汁2%的組合比例的條件下,對L.acidophilusCICC6005的胞外蛋白與胞內(nèi)蛋白的表達水平產(chǎn)生明顯影響,電泳圖譜的鑒定顯示,蛋白質(zhì)的電泳條帶增多;同時也較明顯地增強了胞內(nèi)蛋白的表達量。經(jīng)進一步鑒定胞外兩種主要的蛋白組分分子質(zhì)量為66、35 ku,胞內(nèi)兩種主要蛋白組分分子質(zhì)量為59、17 ku。研究結(jié)果提示，三種植物源增殖性底物番茄汁、土豆汁、蘋果汁作用于L.acidophilusCICC6005，不僅對該菌具有較好的增殖作用,也對該菌體蛋白質(zhì)的表達量水平具有明顯的促進作用。然而,在該研究條件下L.acidophilusCICC6005表達的蛋白結(jié)構(gòu)及其表現(xiàn)的生物學(xué)功能尚需進一步研究鑒定,將對闡述該發(fā)酵條件下L.acidophilusCICC6005菌體及發(fā)酵液的生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ)。

4 結(jié)論

本文通過研究不同濃度的植物源增殖性底物對L.acidophilusCICC6005 生長量的影響,通過正交試驗確定最優(yōu)組合為:番茄汁5%、土豆汁3%、蘋果汁2%,發(fā)酵液的菌濃為2.31×1010CFU/mL。利用SDS-PAGE的電泳技術(shù)鑒定菌體和發(fā)酵液中表達全蛋白質(zhì)的圖譜顯示,L.acidophilusCICC6005在該營養(yǎng)條件下表達蛋白的數(shù)量有明顯的增加,經(jīng)分離純化胞外及胞內(nèi)蛋白均得到兩個不同的峰,胞內(nèi)蛋白的分子量為59、17 ku;胞外蛋白的分子量為66、35 ku;其蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度依次為2.144、0.744、2.394、4.644 mg/mL。研究對深入闡述益生菌表達的蛋白組分以及其發(fā)揮的功效具有一定科學(xué)價值。