桑樹抗黃化型萎縮病種質(zhì)資源篩選試驗(yàn)

李萬(wàn)明

(安康學(xué)院，陜西 安康 725000)

在陜南安康，桑樹黃化型萎縮病防治主要通過(guò)防治媒介昆蟲菱紋葉蟬[2]，由于菱紋葉蟬年發(fā)生4代，第二、三代常遷出桑園在其它寄主危害，行蹤不定。且該蟲食性繁雜，又有世代重疊現(xiàn)象，依靠防蟲控制病害的效果較差。樹干注藥又受到條件限制難以長(zhǎng)期維持?；瘜W(xué)防治污染環(huán)境且易對(duì)非靶標(biāo)家蠶造成毒害[3]。故該病防控必須依靠抗性品種的培育和栽培。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)試材

測(cè)試品種包括陜西省蠶桑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室品種圃引植品種47種，陜南安康地區(qū)有明確品種引種記載的主栽品種11種，共計(jì)58種。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 品種抗病性鑒定 采用種質(zhì)接穗高接法[4]，此法系病樹(砧)接健穗，2014-2015年，每年以發(fā)病較重桑樹上高接待鑒定桑樹品種，方法是選擇樹冠較大、萎縮病較重、生長(zhǎng)勢(shì)較強(qiáng)的成齡湖桑19桑樹，在湖桑19病枝上高接待鑒定58桑樹材料的健康接穗，每份參加鑒定的材料每株病樹上嫁接4個(gè)接穗，5株重復(fù)，即每份鑒定材料嫁接20個(gè)接穗組成試驗(yàn)樣本。

桑樹黃化型萎縮病嚴(yán)重度分級(jí)為：

1級(jí)——健壯，無(wú)癥狀。代表值為0。

2級(jí)——病株有隱癥現(xiàn)象，髙接接穗中僅有1個(gè)枝梢出現(xiàn)黃化枝，表現(xiàn)葉色黃化，皺縮，葉脈呈黃色網(wǎng)狀，有時(shí)葉片有5%變黃或變紅發(fā)紫等典型癥狀。代表值為1。

3級(jí)——病株無(wú)隱癥現(xiàn)象，髙接接穗中有2～3個(gè)枝梢出現(xiàn)黃化枝，病株葉片有5%～15%表現(xiàn)黃化萎縮病狀，株型出現(xiàn)矮化癥狀。代表值為2。

4級(jí)——病株無(wú)隱癥現(xiàn)象，髙接接穗中有4個(gè)以上枝梢出現(xiàn)黃化枝，病株葉片有16%～25%以上桑葉表現(xiàn)癥狀，株型明顯矮化。代表值為3。

5級(jí)——病株無(wú)隱癥現(xiàn)象，髙接接穗中枝梢全部出現(xiàn)黃化枝，病株葉片幾乎全部表現(xiàn)黃化癥狀，甚至枯焦脫落，枝莖枯死，有時(shí)整株出現(xiàn)急性凋萎死亡。代表值為4。

發(fā)病程度計(jì)算公式[5]：發(fā)病率(%)=發(fā)病接穗數(shù)/成活接穗總數(shù)×100

病情指數(shù)=∑(各級(jí)病株數(shù)×該病級(jí)值)/ (調(diào)查總株數(shù)×最高級(jí)值)×100

桑樹抗黃化型萎縮病抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：高抗品種：發(fā)病率≤5%，病情指數(shù)≤5%； 中抗品種：發(fā)病率6%～20%，病情指數(shù)6%～10%； 中感品種：發(fā)病率21%～40%，病情指數(shù)11%～20%；高感品種：發(fā)病率≥40%，病情指數(shù)≥21%。

1.2.2 種質(zhì)抗性穩(wěn)定性鑒定 采用皮枝接種法和管狀芽接法[6]，此法以健樹(砧)接病穗。具體方法是每年提前3月份將待測(cè)定的桑樹品種嫁接在實(shí)生苗上獲取健壯的嫁接苗。至7月中旬時(shí)開始進(jìn)行兩次嫁接，第一次嫁接采用皮枝接種法，主要是幼苗(穗)木質(zhì)化程度不夠，目的是檢測(cè)桑品種產(chǎn)生木衛(wèi)素前抗性情況。第二次采用管狀芽接法，8月中旬開始選取上年高接接穗中的病桑接穗，扭動(dòng)皮部使之與木質(zhì)部分離，在病穗芽上下0.5 cm處環(huán)割皮層形成芽管，接穗均用5%的鹽酸土霉素溶液浸泡后套接在待鑒定的桑品種嫁接苗上。嫁接苗枝條選木質(zhì)化或半木質(zhì)化健壯枝條。觀察萎縮病芽發(fā)病率、病情指數(shù)和等級(jí)，比較桑品種抗黃化型萎縮病的抗性。

2016-2017年，每年將初選18個(gè)抗性品種的接穗再次高接在健康的桑樹上，每株接8個(gè)接穗，每品種5株重復(fù)，每品種40個(gè)復(fù)接接穗組成觀察樣本，觀察品種資源抗病性的穩(wěn)定性。每年逐代嫁接兩次。

桑樹品種對(duì)黃化型萎縮病抗病穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)為：0級(jí),接穗(芽)不發(fā)?。?級(jí),10%以下接穗(芽)發(fā)??；2級(jí),11%～20%接穗(芽)發(fā)?。?級(jí),21%～30%接穗(芽)發(fā)?。?4級(jí),30%以上接穗(芽)發(fā)病。

2 結(jié)果分析

2.1 調(diào)查黃化型萎縮病在不同桑品種上的發(fā)病情況如表1所示。

由表1可知，初測(cè)58個(gè)桑樹種對(duì)桑樹黃化性萎縮病抗性較強(qiáng)的桑樹品種有：育237、育2、鳳尾芽變、團(tuán)頭荷葉白、魯誘1號(hào)、魯誘3號(hào)、魯誘7號(hào)、小紅皮、908、湖桑199、強(qiáng)桑、葫蘆桑、扶桑丸、烏克蘭107號(hào)、洞庭1號(hào)、731、倫教408、青葉鼠返共18個(gè)品種。

2.2 抗病穩(wěn)定性檢測(cè)

經(jīng)對(duì)18個(gè)抗性桑品種種質(zhì)抗性穩(wěn)定性逐代嫁接復(fù)選，結(jié)果如表2所示。

表2可見：抗性穩(wěn)定性能好，且抗病力強(qiáng)的品種有：鳳尾芽變、育237、育2、強(qiáng)桑、湖桑199、葫蘆桑等六個(gè)品種?？剐圆环€(wěn)定，且相對(duì)較弱的品種有：魯誘1號(hào)、洞庭1號(hào)兩個(gè)品種，中等抗性的品種有：魯誘7號(hào)、魯誘3號(hào)、團(tuán)頭荷葉白、烏克蘭107號(hào)、731、青葉鼠返等。同時(shí)，由表2可知，由病芽病穗接健砧接穗成活率高，黃化型萎縮病的發(fā)病率低，這種現(xiàn)象說(shuō)明病害發(fā)生時(shí)病原存活在芽稍上數(shù)量少，這與王忠陽(yáng)部分觀點(diǎn)相吻合[7]。

表1 58個(gè)桑品種抗黃化型萎縮病發(fā)病程度 (陜西安康 2014，2015)

表2 桑品種種質(zhì)抗性穩(wěn)定性檢測(cè) (陜西安康 2016，2017)

2.3 綜合抗性結(jié)果

按照桑樹黃化型萎縮病評(píng)鑒標(biāo)準(zhǔn),兩次評(píng)鑒的抗性等級(jí)，綜合表1和表2結(jié)果，桑樹58個(gè)品種經(jīng)篩選抗性結(jié)果如下：

高抗品種：鳳尾芽變、育237、育2、強(qiáng)桑、湖桑199、葫蘆桑。

中抗品種：魯誘1號(hào)、魯誘3號(hào)、豆腐皮、908、紅頭桑、望天青、湖桑199、廣1號(hào)、陜桑305、劍持、強(qiáng)桑、扶桑丸、紅皮海桑、鏡泊桑、倫敦40號(hào)、中桑5801、中亞細(xì)亞、烏克蘭107號(hào)、GM41、洞庭1號(hào)、金龍、731、黑葉墨斗、倫教408、青葉鼠返、農(nóng)桑14、農(nóng)桑8號(hào)、陜桑406、陜桑403、陜桑402、金十。

中感品種：桐鄉(xiāng)青、盛東1號(hào)、8837、魯9463、浙農(nóng)火桑、朝桑、伊豆早生、荊青1號(hào)、紫薇桑、雙頭桑、黃桑、麻桑、日本早生、鳳尾桑、羊角桑、農(nóng)桑12號(hào)。

高感品種：真肚子、湖桑16、湖桑175、油燈雞毛撣。

3 結(jié)論及討論

(1)高接和芽管套接操作過(guò)程中，要嚴(yán)格執(zhí)行桑黃化型萎縮病防治規(guī)程[8]中桑樹嫁接修剪病原阻斷技術(shù)。具體做法是:①桑樹修剪嫁接操作時(shí)首先準(zhǔn)備臉盆一個(gè)，內(nèi)盛5 L潔凈清水。②臉盆中加入消毒液。消毒液配方為：84消毒液50 mL+3%多氧清水劑5 mL(或用病毒靈5 g+農(nóng)用土霉素25 g+四環(huán)素4 g。③準(zhǔn)備嫁接工具或修剪工具2至3套，浸泡在消毒液中，確保浸泡時(shí)間5～10 min。④大樹修剪(或嫁接)時(shí)，浸泡工具輪換交替使用，確保一桑(穗)一剪(工具)。此項(xiàng)技術(shù)，可以防止病原在高接和芽接時(shí)通過(guò)工具交互感染。

(2)試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，芽管套接時(shí)對(duì)芽管使用5%的鹽酸土霉素浸泡后，部分芽萌發(fā)展葉時(shí)葉片能正常發(fā)芽展葉，對(duì)桑黃化型萎縮病病原的抑制效果明顯。但是葉片發(fā)黃，分析原因，浸泡葉的PH值過(guò)小，因此，在健砧接病穗時(shí)，對(duì)病穗的消毒藥劑及其配比有待進(jìn)一步研究。

(3)鑒定桑樹抗黃化型萎縮病的抗病力,大田誘發(fā)法及媒介昆蟲傳毒法比較傳統(tǒng)，雖能真實(shí)反映桑種質(zhì)抗病力強(qiáng)弱,但持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)且費(fèi)工費(fèi)力[9]. 蒯元璋[10]為了減少病芽管接時(shí)接菌量大而提出芽接發(fā)病中量法,此法對(duì)砧木與接穗的粗細(xì)搭配要求較為苛刻。技術(shù)難度大，不易控制推廣。故試驗(yàn)中對(duì)芽接發(fā)病中量法進(jìn)行如下改進(jìn)：一是采用了皮枝接種法和管狀芽接法兩種方法。在芽管嫩稍未木質(zhì)化前，此時(shí)芽管難以剝離，采用皮枝接種法，在健砧上接病穗。后期病芽芽管易剝離時(shí)采用管狀芽接法，克服病穗失水后難取管狀芽不足。二是統(tǒng)一對(duì)接穗接芽進(jìn)行了適當(dāng)?shù)乃巹┨幚恚瑥亩鴾p少帶菌量。因此，皮枝接種法和管狀芽接法具有操作簡(jiǎn)便，成活率較高，無(wú)需貯藏接穗等特點(diǎn)，兩法配合使用可有效鑒定桑品種抗黃化型萎縮病的抗病穩(wěn)定性。但這兩種方法在夏季高溫季節(jié)操作時(shí)易造成芽穗脫水，其改良方法有待進(jìn)一步探索完善。